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多叶越南槐总黄酮药理作用的实验研究



全 文 :多叶越南槐总黄酮药理作用的实验研究
李燕婧1,2,钟正贤1,2,陈学芬1,卢文杰1,2,陈家源1
(1 广西中医药研究院·南宁 530022;2 广西中药质量标准重点实验室·南宁 530022)
摘 要 目的:探讨多叶越南槐总黄酮的药理作用。方法:采用小鼠利血平胃溃疡模型、抗凝血实验、小
鼠全脑缺血缺氧实验、大鼠体内静脉血栓形成模型、小鼠高脂血症模型进行多叶越南槐总黄酮药理作用
研究,并对多叶越南槐总黄酮进行急性毒性试验。结果:多叶越南槐总黄酮高剂量与山豆根总黄酮高剂
量均能减轻小鼠胃溃疡指数,延长小鼠凝血时间,延长小鼠脑缺血呼吸时间,降低大鼠静脉血栓重量,降
低高脂血症小鼠血脂水平,两者作用相当;多叶越南槐总黄酮中剂量能减轻小鼠胃溃疡指数,延长小鼠脑
缺血呼吸时间,降低大鼠静脉血栓重量;多叶越南槐总黄酮低剂量能减轻小鼠胃溃疡指数,延长小鼠脑缺
血呼吸时间。急性毒性试验结果表明,多叶越南槐总黄酮的最大给药量为 612. 24 g生药 /kg。结论:多叶
越南槐总黄酮具有一定的抗胃溃疡、抗凝血、抗脑缺血、抗血栓和降血脂作用,其毒性较低。
关键词 胃溃疡;血栓形成;高脂血症;多叶越南槐;总黄酮;药理作用;急性毒性;小鼠;大鼠
基金项目:广西科技厅攻关项目(11107009 - 3 - 4)
Experimental Studies on Pharmcological Actions of Total Flavonoids of
Duoye Yuenan Huai(Sophora Tonkinensis var)
LI Yanjing1,2,ZHONG Zhengxian1,2,CHEN Xuefen1,LU Wenjie1,2,CHEN Jiayuan1
(1Chinese Medicine Academy of Guangxi,Nanning 530022;2Guangxi Key Laboratory
of Traditional Chinese Medicine Quality Standards,Nanning 530022)
ABSTRACT Objective:To observe the pharmcological actions of total flavonoids of Sophora tonkinensis var.
Methods:By using the menthod of gastric ulcer induced by reserpine,anti - coagulation,hypoxic - ischemic brain
damage in mice,experimental venous thrombus in rats,the model with hyperlipidemia in mice;to study pharm-
cological actions of total flavonoids of Sophora tonkinenis Var. acute toxicity test was done. Results:The total fla-
vonoids of Sophora tonkinensis var. and Radix Sophorae tonkinensis at a dose of 200 mg /kg could decrease the
index of gastric ulcer,extend coagulation time in mice and breathe time in hypoxic - ischemic rats,lower the
weight of venous thrombus,decrease the blood lipid level in hyperlipidemia mice,their pharmcological action
were similar to the total flavonoids of Sophora tonkinensis var. At a dose of 100 mg /kg could decrease the index
of gastric ulcer,extend breathe time in hypoxic - ischemic rats,lower the weight of venous thrombus;flavonoids
of Sophora tonkinensis var. at a dose of 50 mg /kg could decrease the index of gastric ulcer,extend breathe time
in hypoxic - ischemic rats,The acute toxicity test showed that total flavonoids of Sophora tonkinensis var. maxi-
mum tolerance was 612. 24g crude drug /kg. Conclusion:The total flavonoids of Sophora tonkinensis var. have
the pharmcological actions of anti - gastriculcer,anti - coagulation,anti - cerebral ischemia,anti - thrombus,
lowering bloot - fat;flavonoids of Sophora tonkinensis var. have little toxicity.
Key words:gastriculcer;thrombosis;sophora tonkinensis var;total flavonoids;pharmcological action;acute tox-
icity;mice;rats
多叶越南槐 Sophora tonkinensis Gagnep. var. polyphylla
S. 为豆科槐属植物,与山豆根( 越南槐)Sophora tonkinensis
是同科同属同种的根,是越南槐的一个变种,生长于石山区,
分布于广西、广东、云南、贵州和江西等省[1],在广西主要分
布于红水河流域,如都安、马山、忻城、武鸣等地[2]。其性
寒,味苦,具有清热解毒、消肿利咽之功效,常用于火毒蕴结
所致咽喉肿痛、齿龈肿痛、肺热咳嗽、肝炎等疾患的治疗。市
场上山豆根面临日益枯竭的现状,因其与山豆根具有相似性
状和药效,广西民间把多叶越南槐当作山豆根药材来使用,
《广西中药材标准,1990 版》也将多叶越南槐作为山豆根药
材的植物来源之一收载,但多叶越南槐药理基础研究尚未见
报道。为探索多叶越南槐药材能否作为山豆根的代用品,为
资源利用和临床应用提供科学依据,因此,笔者对多叶越南
槐总黄酮进行了药理作用研究,现将研究结果报道如下。
1 实验材料
1. 1 药物 多叶越南槐总黄酮药膏( 每克膏相当于25. 0 g
·472· 中国中医药科技 2015 年 5 月第 22 卷第 3 期 May 2015 Vol. 22 No. 3
药材,批号:20120723)、山豆根总黄酮药膏( 每克膏相当于
24. 0 g 药材,批号:20120717) : 均由广西中医药研究院化学
所提供,用蒸馏水配制成所需浓度药液供实验用; 西米替丁
片:江西济民可信药业有限公司产品,批号:120823; 阿司匹
林肠溶片: 武汉远大制药集团股份有限公司产品,批号:
111101;复方丹参片:为广东白云山和记黄埔中药有限公司
产品,批号:120324; 血脂康胶囊: 北京北大维信生物科技有
限公司产品,批号:120613。
1. 2 试剂 利血平注射液:天津金耀氨基酸有限公司产品,
批号:1203241;甲醛:北京市旭东化工厂产品,批号:101130。
凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT) ,凝血酶原时间
(PT) 和纤维蛋白原(Fib) 试剂盒:均为上海太阳生物技术有
限公司产品,批号分别为:112135、121089、115217、122043;
总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL
- C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL - C) 试剂盒: 均为长春汇
丽生物技术有限公司产品,批号分别为:2012014、2012034、
2012049、2012036.
1. 3 动物 健康成年昆明种小鼠,体重 18 ~ 22 g,雌雄各
半;SD大鼠,(200 ± 20)g,雌雄各半,由广西医科大学实验
动物中心提供,许可证号:SCXK( 桂)2009 - 0002,SPF 级。
大鼠饲养于空调实验室内,室温(22 ± 2)℃,湿度(60 ±
5)%,自由饮水和摄食。经本院医学动物管理委员会批准
同意。
1. 4 仪器 AMS - 18A 型全自动生化分析仪: 张家口奥普
森产品;WD -2102A酶标仪:杭州汇尔仪器设备有限公司产
品;FA1004 -型万分之一电子天平: 上海精密科学仪器有限
公司产品。
2 方法与结果
2. 1 抗胃溃疡作用[3]
选取健康小鼠 60 只,随机分为模型对照组,阳性药西米
替丁(400 mg /kg) 组,多叶越南槐总黄酮高、中、低剂量(200、
100、50 mg /kg) 组,山豆根总黄酮(200 mg /kg) 组,每组10
只。给药各组灌胃给药 5 天,1 次 /d,模型对照组灌胃给予
等体积蒸馏水,第 4 天给药后,将动物禁食不禁水 24 小时,
第 5 天给药后各组动物均皮下注射利血平 10 mg /kg,6 小时
后颈椎脱位处死。打开腹腔,结扎胃贲门和幽门,并经胃壁
向胃腔内注入 10%的福尔马林溶液 2 mL,将胃取出,浸入福
尔马林溶液中,30 分钟后沿胃大弯剖开,将其平铺在玻璃板
上,在立体显微镜下测量溃疡长度(× 10) ,以其总和做为溃
疡指数。统计学处理采用 SPSS11. 0 统计软件分析数据。所
得实验数据以均数 ±标准差(x ± s) 表示,采用t检验作组
间比较。实验结果表明,与模型对照组比较,多叶越南槐总
黄酮 200、100、50 mg /kg,山豆根 200 mg /kg 和西米替 J400
mg /kg均可明显抑制利血平溃疡长度,差异有统计学意义(P
< 0. 05,P < 0. 01)。表明多叶越南槐总黄酮和山豆根总黄
酮均有抗胃溃疡作用,多叶越南槐总黄酮 200 mg /kg组与山
豆根黄酮 200 mg /kg组抑制作用相当。结果见表 1。
2. 2 抗凝血作用[4]
选取健康小鼠 60 只,随机分为空白对照组,阳性药阿斯
匹林(200 mg /kg) 组,多叶越南槐总黄酮高、中、低剂量组
(200、100、50 mg /kg) 组,山豆根总黄酮(200 mg /kg) 组,每组
10 只。各组均灌胃相应药液,每天 1 次,连续 9 天,空白对照
组给予等体积水。末次给药后禁食不禁水 14 小时,小鼠眼
眶静脉丛取血 1. 5 mL,3. 8%枸橼酸钠抗凝,1000 r /min离心
10 分钟,分离血浆,用于活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝
血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT) 和纤维蛋白原(Fib) 的
测定。实验结果表明,与空白对照组比较,多叶越南槐总黄
酮 200 mg /kg、山豆根总黄酮 200 mg /kg和阿司匹林 200 mg /
kg均能延长正常小鼠 TT、PT、APTT,差异有统计学意义(P <
0. 05)。表明多叶越南槐总黄酮和山豆根总黄酮均有抗凝血
作用,多叶越南槐总黄酮 200 mg /kg 与山豆根总黄酮 200
mg /kg作用相当。多叶越南槐总黄酮 100、50 mg /kg 对小鼠
凝血参数没有明显影响。结果见表 2。
表 1 各组小鼠胃溃疡指数的测定结果(x ± s)
组别 n 溃疡指数(mm)
模型对照组 10 81. 60 ± 19. 87
西米替丁组 10 25. 39 ± 10. 44**
山豆根总黄酮组 10 46. 64 ± 16. 55**
多叶越南槐总黄酮组( 低) 10 69. 41 ± 18. 30*
多叶越南槐总黄酮组( 中) 10 58. 69 ± 13. 50*
多叶越南槐总黄酮组( 高) 10 40. 62 ± 11. 71**
t检验;与模型对照组比较* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 2 多叶越南槐总黄酮对正常小鼠凝血参数的影响(x ± s,n = 10)
组别
TT
(s)
PT
(s)
APTT
(s)
Fib
(g /L)
空白对照组 11. 5 ± 0. 6 11. 5 ± 1. 2 32. 6 ± 5. 1 2. 04 ± 0. 33
阿斯匹林 13. 6 ± 1. 1** 14. 0 ± 1. 4** 34. 9 ± 4. 8* 1. 71 ± 0. 48*
山豆根总黄酮组 12. 7 ± 1. 1* 13. 0 ± 1. 5* 34. 1 ± 5. 7* 1. 93 ± 0. 47
多叶越南槐总黄酮组( 低) 12. 0 ± 0. 9 11. 1 ± 0. 9 32. 0 ± 5. 3 2. 00 ± 0. 48
多叶越南槐总黄酮组( 中) 11. 9 ± 1. 1 12. 4 ± 1. 5 31. 5 ± 3. 9 1. 92 ± 0. 55
多叶越南槐总黄酮组( 高) 13. 1 ± 0. 9* 13. 2 ± 1. 1* 33. 6 ± 5. 5* 1. 90 ± 0. 51
t检验;与空白对照组比较* P < 0. 05,**P < 0. 01
2. 3 抗脑缺血缺氧作用[5]
选取健康小鼠 60 只,随机分为空白对照组,阳性药复方
丹参片(1200 mg /kg) 组,多叶越南槐总黄酮高、中、低剂量组
(200、100、50 mg /kg) 组,山豆根总黄酮(200 mg /kg) 组,每组
10 只。各组均灌胃相应药液,连续 7 天,空白对照组给予等
体积水。末次给药后 1 小时,小鼠逐只断头,立即按秒表记
录小鼠断头后至张口喘气停止的时间为脑缺血缺氧指标。
实验结果表明,与空白对照组比较,多叶越南槐总黄酮 200、
100、50 mg /kg,山豆根 200 mg /kg 和复方丹参片 1200 mg /kg
均能延长小鼠断头后张口呼吸时间,差异有统计学意义(P
< 0. 05,P < 0. 01)。表明多叶越南槐总黄酮和山豆根总黄
酮均有抗脑缺血缺氧作用。多叶越南槐总黄酮 200 mg /kg
与山豆根总黄酮 200 mg /kg作用相当。结果见表 3。
2. 4 抗血栓形成作用[6]
选取健康小鼠 72 只,随机分为模型对照组,阳性药复方
丹参片(1200 mg /kg) 组,多叶越南槐总黄酮高、中、低剂量组
(200、100、50 mg /kg) 组,山豆根总黄酮(200 mg /kg) 组,每组
·572·中国中医药科技 2015 年 5 月第 22 卷第 3 期 May 2015 Vol. 22 No. 3
表 3 各组小鼠断头后张口呼吸时间的比较(x ± s)
组别 n 呼吸时间(S)
空白对照组 10 13. 0 ± 2. 2
复方丹参片组 10 16. 9 ± 3. 1**
山豆根总黄酮组 10 15. 6 ± 2. 2**
多叶越南槐总黄酮组( 低) 10 14. 9 ± 1. 9*
多叶越南槐总黄酮组( 中) 10 15. 0 ± 1. 7*
多叶越南槐总黄酮组( 高) 10 15. 2 ± 1. 5**
t检验;与空白对照组比较* P < 0. 05,**P < 0. 01
12 只。各组均灌胃相应药液,每天 1 次,连续 7 天,模型对照
组给予等体积水。末次给药后 1 小时,大鼠以 10%水合氯
醛腹腔注射麻醉,于腹中线切开皮肤约 3 cm,分离下腔静
脉,于左肾静脉下方用粗线结扎下腔静脉,缝合腹壁。4 小
时后,重新打开腹腔,在结扎下方 2 cm 处夹闭管腔,将该段
管腔内血液吸尽,剖开管腔,取出血栓,放在滤纸上,吸干血
液,用微量电子天秤称取血栓湿重(mg)。以血栓重量为评
价指标,测定各给药组对静脉血栓形成的影响。实验期间各
组动物有死亡情况,予从剔除,剩余动物数见表 4。
表 4 各组大鼠体内静脉血栓湿重的比较(x ± s)
组别 n 血栓湿重(mg)
模型对照组 10 66. 87 ± 24. 04
复方丹参片组 12 24. 52 ± 11. 69**
山豆根总黄酮组 10 37. 16 ± 15. 54*
多叶越南槐总黄酮组( 低) 9 56. 96 ± 18. 16
多叶越南槐总黄酮组( 中) 10 44. 12 ± 14. 12*
多叶越南槐总黄酮组( 高) 10 33. 02 ± 12. 77*
与模型对照组比较* P < 0. 05,**P < 0. 01
2. 5 降血脂作用[7] 高脂乳剂制备:5%胆固醇、1%去氧胆
酸钠、0. 5%甲基硫氧嘧啶、10%猪油、吐温 - 80 和丙二醇各
20 mL助溶,加水至 100 mL 装瓶备用。
选取健康小鼠 70 只,随机分为正常对照组,模型组,阳
性药血脂康胶囊(54 mg /kg) 组,多叶越南槐总黄酮高、中、低
剂量组(200、100、50 mg /kg) 组,山豆根总黄酮(200 mg /kg)
组,每组 10 只。各组均灌胃相应药液,连续 14 天,正常对照
组给予等体积水。每天上午给药后,下午除正常对照组外,
其余各组小鼠均给予高脂乳剂 0. 5 mL /只,制备实验性高血
脂症。于第 14 天用药后禁食不禁水 16 小时,小鼠眼眶静脉
丛取血,按酶法检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高
密度脂蛋白胆固醇(HDL - C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL -
C) 含量。实验结果表明,与正常对照组比较,模型组大鼠的
血清 TC、TG、LDL - C水平均明显升高,HDL - C水平明显降
低,差异有统计学意义(P < 0. 05,P < 0. 01) ,表示小鼠高脂
血症模型建立成功。与模型对照组比较,多叶越南槐总黄酮
200 mg /kg、山豆根 200 mg /kg 和血脂康胶囊 54 mg /kg 组小
鼠血清 TC、TG、LDL - C 水平明显降低,HDL - C 水平升高,
差异有统计学意义(P < 0. 05,P < 0. 01) ;表明多叶越南槐总
黄酮和山豆根总黄酮均具有降血脂作用。多叶越南槐总黄
酮 100、50 mg /kg对大鼠血清 TC、TG、LDL - C、HDL - C无明
显影响。结果见表 5。
2. 6 急性毒性试验 取小鼠预试后,另选取 18 ~ 22 g 小鼠
40 只,分为对照组和给药组,雌雄各半。小鼠禁食 24 小时
不禁水,以多叶越南槐总黄酮的最大给药浓度和最大给药体
积给小鼠灌胃给药,24 小时内给药 3 次,对照组给予蒸馏
水,连续观察 14 天,记录动物体重、外观、食欲、行为活动、死
亡等毒副反应情况。结果小鼠体重正常增长,无明显毒副作
用。测出多叶越南槐总黄酮最大给药量为 612. 24 g生药 /kg
体重。
表 5 各组小鼠血脂水平的测定(x ± s,n = 10 )
组别
TC
(mmol·L - 1)
TG
(mmol·L - 1)
HDL - C
(mmol·L - 1)
LDL - C
(mmol·L - 1)
正常组 1. 81 ± 0. 72 0. 66 ± 0. 21 0. 91 ± 0. 32 0. 92 ± 0. 29
模型组 3. 29 ± 0. 91# 1. 67 ± 0. 64## 0. 52 ± 0. 24# 1. 54 ± 0. 33#
血脂康组 2. 18 ± 0. 66* 0. 73 ± 0. 45** 0. 64 ± 0. 32* 1. 01 ± 0. 28*
山豆根总黄酮组 2. 10 ± 0. 51* 1. 10 ± 0. 49* 0. 76 ± 0. 29* 1. 12 ± 0. 29*
多叶越南槐总黄酮组( 低) 2. 91 ± 0. 63 1. 48 ± 0. 63 0. 84 ± 0. 30 1. 45 ± 0. 34
多叶越南槐总黄酮组( 中) 2. 88 ± 0. 59 1. 38 ± 0. 53 0. 82 ± 0. 32 1. 33 ± 0. 29
多叶越南槐总黄酮组( 高) 2. 29 ± 0. 61* 1. 02 ± 0. 45* 0. 71 ± 0. 29* 1. 10 ± 0. 31*
与正常组比较 # P < 0. 05,##P < 0. 01; 与模型组比较* P <
0. 05,**P < 0. 01
3 讨论 目前对越南槐的研究和利用主要集中在山豆根
上,其它种类少有报道。加大对其它越南槐种类的研究,寻
找新的药源或发现新的有效成分,将会使越南槐的利用和开
发前景更加广阔。根据越南槐的临床功效及药理作用研究
报道,本次实验在药物的制备、剂量、给药途径平行的条件下
对多叶越南槐总黄酮和山豆根总黄酮进行抗溃疡、抗凝血、
抗脑缺血、抗血栓、降脂等药理作用研究。实验结果表明,多
叶越南槐总黄酮和山豆根总黄酮均能减轻小鼠胃溃疡指数,
延长小鼠凝血时间,延长小鼠脑缺血呼吸时间,降低大鼠静
脉血栓重量以及降低高脂血症小鼠血脂水平;多叶越南槐总
黄酮 200 mg /kg与山豆根总黄酮 200 mg /kg药效指标的作用
程度相当;证实多叶越南槐总黄酮与山豆根总黄酮具有相近
的药理作用。本文只是对多叶越南槐总黄酮和山豆根总黄
酮的生物活性进行初步研究,为多叶越南槐的开发利用奠定
了一定的药理学基础,但还不能断定其能完全替代山豆根入
药或开发产品。
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( 收稿日期:2014 - 06 - 11)
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