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川木香乙酸乙酯萃取物抗大鼠幽门结扎型胃溃疡作用机理的实验研究



全 文 :成都中医药大学学报
Journal of Chengdu University of TCM
2011 年 9 月第 34 卷第 3 期
Sept. 2011,Vol. 34,No. 3
川木香乙酸乙酯萃取物抗大鼠幽门结扎型
胃溃疡作用机理的实验研究
何瑶 胡慧玲 傅超美 瞿燕 章津铭 许丽佳
(成都中医药大学 药学院,四川 成都 611137)
摘 要:目的:研究川木香乙酸乙酯萃取物对幽门结扎型胃溃疡模型的影响,以探讨其作用机理。方
法:采用幽门结扎法制备大鼠胃溃疡模型,观察溃疡指数,测其胃液量、胃液总酸度、胃蛋白酶活性;制备
胃组织匀浆,测其一氧化氮 (NO)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性及丙二醛 (MDA)含量。结果:川
木香乙酸乙酯萃取物对幽门结扎型胃溃疡大鼠胃组织溃疡程度、胃液量、总酸度及胃蛋白酶活性均有明显的
抑制作用,且能显著增加其胃组织中 NO含量和 SOD活性,降低 MDA含量。结论:川木香乙酸乙酯萃取物
抗幽门结扎型胃溃疡的作用机理可能是通过抑制攻击因子与促进防御因子,提高机体抗氧化能力实现的。
关键词:川木香;幽门结扎;胃溃疡;机理
中图分类号:R285. 5;O655 文献标识码:A 文章编号:1004-0668 (2011)03-0072-03
基金项目:四川省科技厅课题 (编号:07JY029 - 093)
作者简介:何瑶,女,1985 年生,助教,研究方向:中药新制剂、新工艺、新技术研究;通讯作者:胡慧玲,女,1978 年
生,讲师,在读博士,研究方向:从事炮制制剂及中药质量研究。
Mechanism of Acetic Ether from Vlaimiria Souliei
on Pyloric-ligation Ulcet Model
HE Yao,HU Hui-Ling,FU Chao-mei,et al
(Chengdu Universify of Traditional Chinese Medicine,Chengdu,611137,China)
[Abstract]Objective:To research the therapeutic effect of Acetic ether extract from Vladimiria souliei on pyloric-ligation ulcer
model and discussion the mechanism. Method:rat gastric ulcer model was induced by pyloric ligation to observe Ulcer index of all
groups,measure the gastric juice volume、total acidity、the activity of pepsin;gastric tissue homogenates were prepared to determine
Nitric oxide (NO)content、Superoxide dismutase (SOD)activity and Malondialdehyde (MDA)content. Result:Acetic ether extract
from Vladimiria souliei have a significant inhibitory effect on the Ulcer level、gastric juice volume、total acidity、the activity of pepsin
in pyloric-ligation rats ulcer model,furthermore can significantly increase of NO content and SOD activity,and reduce to the MDA
content. Conclusion:The anti-Pyloro-ligation gastric ulcer mechanism of Acetic ether extract from Vladimiria souliei maybe achieved
by inhibiting attack factor and promoting defense factor,and improving the body's antioxidant capacity.
[Key word]:Vladimiria souliei;pyloric-ligation;gastric ulcer;mechanism
川木香为常用川产道地药材,为菊科植物川木
香 Vladimiria souliei (Franch. )Ling 或灰毛川木香
Vladimiria souliei (Franch. ) Ling var. cinaerea Ling
的干燥根,是治疗消化道疾病的常用药之一。《中
国药典》[1]2005 年版记载其功能为行气止痛,主要
用于治疗脘腹胀痛等症,适用于气机阻滞所致疼
痛、脘腹胀痛性胃脘痛等症状。《晶珠本草》已记
载有川木香功能清培根热,能使干瘦者生肌脂[2],
适宜于胃溃疡病的治疗。研究表明:川木香中成分
去氢木香内酯对多种实验性胃溃疡模型均有抑制溃
疡形成的作用,赖先荣等[3]研究发现川木香醋酸
乙酯提取物可作为抑制胃溃疡的作用部位,但目前
·27·
DOI:10.13593/j.cnki.51-1501/r.2011.03.026
第 3 期 何瑶 等 川木香乙酸乙酯萃取物抗大鼠幽门结扎型胃溃疡作用机理的实验研究
对其抗溃疡机理研究较少。本实验通过探讨川木香
乙酸乙酯萃取物对幽门结扎型胃溃疡大鼠胃液及胃
组织匀浆相关指标的影响,以阐明其作用机制。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 动物
清洁级 SD 大鼠 (200 g ± 20 g) ,雌雄各半,
合格证号:SCXK (川)2004 - 16,均由四川省医
学科学院实验动物所提供。
1. 1. 2 药物与试剂
川木香药材采集于四川省阿坝州,经成都中医
药大学鉴定教研室鉴定为菊科植物川木香 Vlad-
imiria souliei (Franch. )Ling 的根。川木香乙酸乙
酯萃取物 (Acetic ether extract from Vladimiria sou-
liei Roots,VRA)是由川木香粉碎过一号筛后,经
95%乙醇回流提取,回收乙醇后依次加入石油醚、
乙酸乙酯萃取,将乙酸乙酯萃取液回收有机溶剂,
真空干燥后备用;西咪替丁,海南制药厂有限公司
(批号:080602) ,加入 10%吐温-80 制得不同浓度
的混悬液;考马斯亮兰蛋白定量测试盒 (批号:
20090531)、一氧化氮 (NO)测定试剂盒 (批号:
20090518)、丙二醛 (MDA)测定试剂盒 (批号:
20090518)、超氧化物歧化酶 (SOD)测定试剂盒
(批号:20090518)均由南京建成生物工程研究所
提供。
1. 1. 3 仪器
TGL - 16C 离心机 (上海安亭科学仪器厂) ;
UV-1700 紫外-可见分光光度计 (日本岛津公司) ;
电子天平 (德国赛多利斯公司) ;游标卡尺 (上海
量具刃具厂) ;DY89-lI 型电动玻璃匀浆机 (宁波
新芝生物科技股份有限公司)。
1. 2 方法
1. 2. 1 实验分组与造模
将 60 只健康 SD 大鼠随机均分为空白组、模
型对照组、阳性组、川木香生品乙酸乙酯萃取物
(VRA)剂量组 (500 mg /kg、200 mg /kg、100 mg /
kg)。采用 Shay -大鼠幽门结扎法[4],即各实验组
按 10 mL /kg规格灌胃 (ig)给予相应药物,正常
对照组和溃疡模型组灌饲同等规格的 10%吐温–
80 溶液,阳性组灌饲同等规格的西咪替丁混悬液
(50 mg /kg) ,每天 1 次,共 7 d,末次给药完毕后
各组大鼠术前禁食不禁水 48 h,将各组大鼠在麻醉
状态下打开大鼠的腹腔,暴露胃,除空白组大鼠
外,均在幽门下穿线将幽门结扎。结扎后各组大鼠
均经十二指肠注射药液 1 次,正常对照组和溃疡模
型对照组注射同等容积的生理盐水,然后缝合腹壁
切口,常规消毒,放回饲养笼,禁食水,6 h 后打
开腹腔结扎贲门,处死各组大鼠。
1. 2. 2 实验指标测定
打开大鼠腹腔,将胃取出,沿胃大弯侧剪开后
展开倾出胃内容物于刻度离心管中,观察胃黏膜损
伤的程度和形态。将收集的胃液于离心机 1500r /
min离心 10 min,取上清液,采用滴定法[5]测定总
酸度及改良 Mett氏法[6]测定胃液胃蛋白酶活性。
胃黏膜溃疡指数 (ulcer index,UI)测定:用
游标卡尺量取通过溃疡中心的溃疡最大纵径和最大
横径,计算溃疡面积 (注:面积 <1 mm2 的溃疡点,
10 个相当于溃疡面积1 mm2)。按照Okabe法,将每
只大鼠溃疡面积的总和分为 5个等级作为溃疡指数,
即当溃疡面积 (mm2)为 1 ~ 12,13 ~ 25,26 ~ 37,
38 ~50,≥50或穿孔时,溃疡指数分别为 1,2,3,
4,5。溃疡抑制百分率 = (模型对 UI - 实验组
UI) /模型对 UI ×100%。
取 0. 3 ~0. 4g 胃壁组织加入生理盐水冲洗后滤
纸吸干,加入冰生理盐水用匀浆机制成 10%组织匀
浆,将其 3000 r /min 离心 20 min,取上清液 - 20℃
下保存,测定大鼠胃组织中一氧化氮 (硝酸还原酶
法)、丙二醛 (硫代巴比妥酸法)的含量,超氧化
物岐化酶 (羟氨法)的活性,胃组织蛋白含量采用
考马斯亮兰试剂盒测定,以上试剂盒均为南京建成
生物工程研究所提供,操作严格按照说明书进行。
1. 2. 3 数据处理
采用 SPSS 13. 0 统计软件,所有实验数据以均
值 ±标准差 (珋x ± s)表示,对各组数据进行Oneway-
ANOVA分析。
2 结果
2. 1 对胃溃疡指数及溃疡抑制率的影响
川木香乙酸乙酯萃取物高剂量组可降低溃疡指
数,与模型对照组相比具有显著性差异 (P <
0. 05) ,溃疡抑制率为 37. 1%,VRA 中、低剂量组
无显著性差异,但可一定程度上抑制胃溃疡,结果
见表 1。
表 1 川木香乙酸乙酯萃取物对幽门结扎型胃溃疡模型大鼠胃溃疡
指数及溃疡抑制率的影响 (珋x ± s,n =10)
组别
给药量 /
(mg /kg·d) 胃溃疡指数 (UI)
溃疡抑制百
分率 / (%)
空白组 - 0▲ 100
模型对照组 - 4. 72 ±0. 62 -
阳性组 50 2. 63 ±0. 29▲▲ 44. 3
川木香乙酸
乙酯部位
(VRA)组
500 2. 97 ±0. 75▲ 37. 1
200 3. 46 ±1. 16 25. 8
100 3. 93 ±0. 98 17. 2
与模型对照组相比,▲P <0. 05,▲▲P <0. 01
2. 2 对胃液量、胃液总酸度和胃蛋白酶的影响
川木香乙酸乙酯萃取物 (VRA)高剂量组对幽
门结扎型胃溃疡胃液量、总酸度及胃蛋白酶活性有
·37·
成都中医药大学学报 2011年第 34卷
明显的抑制作用,与模型对照组相比呈显著性差异 (P <0. 05) ,结果见表 2。
表 2 川木香乙酸乙酯萃取物对大鼠幽门结扎型胃溃疡模型胃液量、胃液总酸度和胃蛋白酶活性的影响 (珋x ± s,n =10)
组别 给药量 / (mg /kg·d) 胃液量 /mL 胃液总酸度 / (mmol /L) 胃蛋白酶活性 / (U/ml)
空白组 - 1. 92 ±0. 33▲▲ 39. 44 ±3. 48▲ 112. 6 ±9. 8▲
模型对照组 - 9. 55 ±1. 58 62. 34 ±7. 32 255. 8 ±18. 6
阳性组 50 6. 42 ±0. 97▲ 35. 23 ±3. 51▲ 170. 2 ±8. 76▲
川木香乙酸
乙酯部位
(VRA)组
500 6. 33 ±1. 14▲ 42. 35 ±4. 63▲ 173. 2 ±8. 37▲
200 7. 99 ±1. 36 52. 34 ±7. 42 215. 3 ±17. 1
100 8. 56 ±1. 17 56. 68 ±5. 26 234. 6 ±12. 6
与模型对照组相比,▲P <0. 05,▲▲P <0. 01
2. 3 对胃组织 (NO)、(SOD)、(MDA)的影响
川木香乙酸乙酯萃取物 (VRA)高剂量组明显
增加幽门结扎型胃溃疡大鼠胃组织 NO 含量及 SOD
活性,且抑制 MDA 含量,与模型对照组相比 P <
0. 05;VRA中剂量组仅对 NO 含量与模型对照组表
现出显著性差异 (P <0. 05) ,结果见表 3。
表 3 川木香乙酸乙酯萃取物对幽门结扎型胃溃疡模型大鼠胃组织 NO、SOD、MDA的影响 (珋x ± s,n =10)
组别 给药量 mg /kg·d) NO / (μmol /gprot) SOD/ (U/mgprot) MDA/ (nmol /mgprot)
空白组 - 50. 4 ±10. 4▲ 158 ±18. 5▲ 7. 3 ±3. 22▲
模型对照组 - 17. 8 ±6. 85 109 ±15. 4 16. 8 ±5. 56
阳性组 50 37. 8 ±5. 86▲ 138 ±11. 9▲ 10. 6 ±5. 32▲
川木香乙酸
乙酯部位
(VRA)组
500 29. 3 ±6. 37▲ 124 ±11. 3▲ 11. 5 ±4. 16▲
200 25. 2 ±9. 13▲ 118 ±19. 3 14. 9 ±7. 13
100 21. 5 ±6. 62 108 ±26. 8 17. 2 ±6. 85
与模型对照组相比,▲P <0. 05
3 讨论
胃溃疡的病因和发病机制复杂,目前尚未完全
阐明。中医认为胃溃疡属胃脘痛范畴,其病机多与
情志不舒引起气机不畅、疏泄失常有关, “不通则
痛”,故在本病辨证治疗上多用透邪解郁,疏肝理脾
法。川木香理气止痛,常用于气机不畅所致胃脘痛,
“脾喜燥而胃喜润”,川木香理气健脾而佐运化,故
从中医理论上对胃溃疡等胃脘痛症状具有较好疗效。
西医认为胃溃疡主要与胃黏膜的防御因子 (胃
黏液 -黏膜屏障、黏膜血流量等)和攻击因子 (胃
酸、胃蛋白酶、乙醇和药物等)失衡有关[7],研究
表明[8-9],氧自由基、脂质过氧化代谢产物、NO 等
舒血管因子在消化性溃疡的发病中有重要作用。
本研究应用幽门结扎法复制胃溃疡模型,结果
表明:川木香乙酸乙酯萃取物 (VRA)对幽门结扎
型胃溃疡大鼠胃液量、总酸度及胃蛋白酶活性有明
显的抑制作用,能明显增加大鼠胃液中 NO 含量,
提高胃组织中 SOD 活性并降低 MDA 含量,提示
VRA可通过多个环节实现抗胃溃疡作用。
研究提示我们,在传统用药经验的基础上辨证
施治,采用川木香乙酸乙酯提取物及其制剂,或配
合化学药物的治疗,可避免长期抑酸治疗后停药引
起胃酸分泌反弹性升高,降低溃疡病复发率,减少
不良反应,增加临床应用的有效性和科学性。
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(收稿日期:2010-12-29 责任编辑:薛红)
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