全 文 ：中 国 酿 造
2012年 第 31卷 第 7期
总第 244期
杜香，系杜鹃花科（Ericaceae）杜香属（Rhododendron）
的常绿灌木 [1]，又名喇叭茶、万年青、香草、矶掷镯、拌脚
丝。它是我国东北地区的主要资源植物，朝鲜、日本、西伯
利亚、北欧等地也有种植[2]。作为中国传统中药材，杜香有
化痰止咳平喘等功效，《全国中草药汇编》、《中国民族药志
要》、《蒙植药志》、《长白山植物药志》[3]中都有记载。杜香体
内含有多种有效成分，如单萜类、倍半萜类、三萜类、甾体
类、单酚与聚酚类，具有药用芳香等价值[4]。目前主要应用
于日用化工和医药领域[5]。据报道，从杜香中提取的挥发
物具有促进透皮吸收、解痛、脱敏、杀螨、驱虫、抗辐射、保
肝和戒毒等作用，不仅能有效的防护，且毒性低，有望开发
为新型食品功能因子[6]。大量资料证明，生物体内有氧代谢
产生的自由基积累过量容易导致机体多种疾病的发生[7]，
而体外检测抗氧化剂清除自由基方法中以清除DPPH最
为常见，如郑德勇等[8]研究了竹叶提取物清除DPPH的作
用，陈丛瑾等[9]对香椿叶提取物清除DPPH的活性进行了
阐述。近年来对杜香的研究主要集中在对其成分的提取
分离纯化和传统医药领域的应用上，而对杜香抗氧化能力
的研究还未见报道。因此，本文用DPPH法测定杜香叶抗
氧化能力，为其天然抗氧化剂的开发、应用提供重要的理
论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
杜香，购自吉林省长白山研究所。
DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）、VC、无水乙醇均
为分析纯；甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯为工业级。
1.2 试验仪器
DU-800型紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司；
冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司；TGL-20C型高
速台式冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；SHA-B型恒温振
收稿日期：2012-01-12
作者简介：郭芳言（1989-），女，江苏如东人，硕士，主要从事食品生物技术方面的研究工作；朴美子*，副教授，通讯作者。
杜香叶提取物清除DPPH能力的研究
郭芳言，朴美子*
（青岛农业大学 食品科学与工程学院，山东 青岛 266109）
摘 要：用DPPH法测定杜香叶不同溶剂提取物清除自由基的能力。分别以水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯为溶剂对杜香叶进行提取，
提取物得率分别为15.60%、28.30%、16.28%、9.13%、15.30%。其中杜香叶乙酸乙酯提取物DPPH清除率最高，可达93.19%，半抑制量
IC50为246.06μg/mL，自由基清除能力AE（1/IC50）为0.0041。研究表明，杜香叶有一定清除DPPH的能力。
关键词：杜香叶；提取物；DPPH
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：0254-5071（2012）07-0123-03
DPPH scavenging capability of Ledum palustre extract
GUO Fangyan, PIAO Meizi*
(College of Food Science and Engineering, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China)
Abstract: The DPPH scavenging capacity of Ledum palustre extracts by different solvents was studied in this paper using the clearance of DPPH as
the index. The extract rates of water, methanol, ethanol, ethyl acetate and acetone extracts from L. palustre reached 15.60%, 28.30%, 16.28%, 9.13%,
15.30%, respectively. The results indicated that acetone extract had high DPPH scavenging capability, which reached 93.19%. The median effective
dose (IC50) and the radical scavenging activity AE (1/IC50) reached 246.06μg/mL and 0.0041, respectively. This study provided an importantly theoret-
ical foundation for development and application of L. palustre as natural antioxidant.
Key words: Ledum palustre ; extract; DPPH
菌的生长情况，可得出结论：山梨酸钾在0.1g/kg时就能抑
制大部分菌A和菌B的生长；在山梨酸钾浓度为0.25g/kg时
能基本完全抑制菌C的生长，实际生产过程中建议采用防
腐剂山梨酸钾浓度为0.25g/kg来抑制腐败细菌的生长，也达
到山梨酸钾国标使用量不能超过0.5g/kg的要求。
参考文献：
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研究报告 123· ·
China Brewing
2012 Vol.31 No．7
Serial No．244
表2 杜香叶不同溶剂提取物的得率
Table 2 Different solvent extract rates of Ledum palustre
得率/%
水 15.60
甲醇 28.30
乙醇 16.28
丙酮 9.93
乙酸乙酯 15.30
荡器，常州国华电器有限公司；迷你磁力振荡器，广州仪科
实验室技术有限公司；RE-52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣
生化仪器厂。
1.3 试验方法
1.3.1 杜香叶不同溶剂提取物的制备
分别称取一定量的杜香叶，以水、甲醇、乙醇、丙酮、乙
酸乙酯为溶剂[10]，用索氏提取器对其进行回流提取（各自
提取5次），提取液经浓缩、冷冻干燥得干粉，备用。
1.3.2 杜香叶不同溶剂提取物得率的计算
分别对杜香叶不同溶剂提取物进行称重，计算得率。
得率（%）=M提取物 /M样品×100%
1.3.3 杜香叶不同溶剂提取物DPPH清除率的测定
分别称取杜香叶不同溶剂提取物，用其相应的溶剂都
配成浓度为1mg/mL样品，按表1的方法测定其DPPH清除率。
将上述各管充分混匀，室温下放于黑暗处反应30min，
517nm处测定各管的吸光度值A，计算DPPH清除率，以确
定DPPH清除率最高的提取溶剂。DPPH清除率计算公式
如下：
DPPH清除率（%）=[1-（A 样品 -A 样参比）/A 对照 ]×100%
1.3.4 杜香叶提取物DPPH半抑制量（IC50）的计算和DPPH
清除能力（AE）的评价
DPPH清除能力的动态分析：精确称取杜香叶乙酸乙
酯提取物0.0158g，分别配制浓度为62.5μg/mL、125μg/mL、
250μg/mL、500μg/mL的溶液，同时配制一定浓度梯度的VC
作为阳性对照。在40min内，每30s取值一次，分别计算不
同浓度样品及对照随时间的推移其DPPH清除率，绘制动
态曲线。
半抑制量（IC50）的计算和清除能力（AE）的评价：根据
中的测定结果，计算出反应完全时样品和阳性对照各浓
度所对应的DPPH清除率，并绘制曲线，以此曲线计算出
DPPH清除率为50%（稳定态）时样品的用量，即半抑制量
（IC50），以及自由基清除能力（AE）即AE=1/IC50，并根据AE
大小判断样品清除DPPH能力的大小，AE值越大其清除能
力越强。
1.3.5 数据处理方法
采用SPSS软件处理数据结果，进行标准差计算和显著
性分析。
2 结果分析
2.1 杜香叶不同溶剂提取物的得率
由表2可知，甲醇作为提取溶剂，提取的干物质的得率
最高，达28.30%。水、乙醇、乙酸乙酯作提取溶剂所提取的
干物质得率相近，丙酮提取的物质得率最少，为9.93%。
2.2 杜香叶不同溶剂提取物DPPH清除率的测定
由图1可知，杜香叶不同溶剂提取物均有抗氧化活性，
且DPPH清除率之间均有显著性差异（p<0.05），水、甲醇、
乙醇、丙酮、乙酸乙酯提取物清除率分别为47.11%、76.69%、
69.28%、55.03%、93.19%。杜香叶乙酸乙酯提取物DPPH清
除率最高，确定乙酸乙酯为最佳提取溶剂。
2.3 杜香叶提取物DPPH半抑制量（IC50）的计算和DPPH清
除能力（AE）的评价
2.3.1 不同浓度杜香叶乙酸乙酯提取物及VC清除DPPH的
动态分析
表1 DPPH清除率测定方法
Table 1 Determination of DPPH scavenging rate
试剂 空白管 对照管 样品管 样品参比管
去离子水/mL 4 2.8 2.3 2.3
样品/mL － － 0.5 0.5
无水乙醇/mL － － － 1.2
0.2mmol/L DPPH/mL － 1.2 1.2 －
图1 杜香叶不同溶剂提取物的DPPH清除率
Fig. 1 The DPPH scavenging rate of different solvent extracts of
Ledum palustre
图2 不同浓度VC清除DPPH能力的动态分析
Fig. 2 Dynamic analysis of DPPH scavenging ability by different
concentrations of VC
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2012年 第 31卷 第 7期
总第 244期
图3 不同浓度杜香叶乙酸乙酯提取物清除DPPH能力的动态分析
Fig. 3 Dynamic analysis of DPPH scavenging ability of different
concentrations of Ledum palustre extracted by ethylacetate
由图2、图3可知，杜香叶乙酸乙酯提取物和VC都有清
除DPPH的能力，且随其浓度的增加清除能力也随之增强。
但不同之处在于两者清除DPPH的速度有较大差异。添加
不同浓度的VC样品，其DPPH清除率均在1min内就趋于稳
定，且在30s内就能达到相应稳定清除率的70%，说明VC抗
氧化的速度较快，为快速抗氧化剂[11]。而杜香叶提取物清
除DPPH的速度与VC相比，各浓度样品的DPPH清除率均在
10min趋于稳定，且在5min左右才能达到相应稳定清除率
的70%，抗氧化速度较慢，为慢速抗氧化剂。
2.3.2 杜香叶提取物和VC的半抑制量及清除DPPH能力分析
半抑制量（IC50）为DPPH清除率为50%时抗氧化剂的
添加量，自由基清除能力AE=1/IC50。
由图4，表3可知，杜香叶乙酸乙酯提取物的DPPH清
除能力与VC相差约10倍，在浓度达到500μg/mL时，杜香叶
乙酸乙酯提取物清除DPPH的能力与VC（100μg/mL）接近，
说明杜香叶乙酸乙酯提取物有一定清除自由基的能力。
3 结论
本文研究了杜香叶不同溶剂提取物清除DPPH的能
力，结果表明：水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯不同溶剂杜
香叶提取物的得率分别为15.60%、28.30%、16.28%、9.13%、
15.30%，其中杜香叶乙酸乙酯提取物DPPH清除率最高，可
达93.19%，随着杜香叶乙酸乙酯提取物剂量的增加，DPPH
清除率也随之增强，成剂量依赖关系，比较分析杜香叶乙
酸乙酯提取物与Vc的DPPH清除能力，可知其DPPH的清
除能力与VC相差约10倍，在浓度达到500μg/mL时，其清
除DPPH的能力与VC接近，说明杜香叶乙酸乙酯提取物有
较强的抗氧化能力。试验结果为：杜香叶乙酸乙酯提取物
清除DPPH的半抑制量IC50为246.06μg/mL，自由基清除能力
AE（1/IC50）为0.0041，说明杜香叶有一定清除DPPH的能力。
其有效成分的确定还有待进一步研究。
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图4 不同浓度VC和杜香叶乙酸乙酯提取物清除DPPH效果
Fig. 4 DPPH scavenging effects of different concentrations of VC
and Ledum palustre extracted by Ethyl acetate
表3 杜香叶乙酸乙酯提取物和Vc清除DPPH能力的比较
Table 3 Comparison of DPPH scavenging abilities between
Ledum palustre extracted by ethyl acetate and VC
抗氧化剂类型 IC50/（μg·mL-1） AE
VC 24.92 0.0401
杜香叶乙酸乙酯提取物 246.06 0.0041
研究报告 125· ·