全 文 ：园林绿化　Ｇａｒｄｅｎ　＆Ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ
ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　 ４１　
二
○
一
三
年
第
四
期
　
林
业
实
用
技
术
羊踯躅高效植株再生技术＊
顾地周　陆　爽　巴春影　李媛媛
（通化师范学院生物系　吉林　通化　１３４００２）
［摘要］　本研究以羊踯躅新生嫩茎段为外植体，应用均匀设计
法对影响羊踯躅腋芽萌发、伸长、生长同时生根的各主要因素
及其水平的作用进行了实验探讨。结果表明，最适合羊踯躅嫩
茎段腋芽萌发、伸长、生长同时生根的培养基为：１／４ＤＲ＋
ＺＴ０．０６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ ＋ＧＡ３１．００ｍｇ／Ｌ。以再生
植株茎节为材料进行快繁的结果表明，在２８ｄ的培养周期内，
每段增殖倍数平均达５以上，植株再生率达９７．３％。再生植株
的炼苗栽培成活率达９９．０％以上。成功建立了高效植株再生
体系，所建立的高效植株再生体系可以满足羊踯躅工厂化育苗
的需要。
［关键词］　羊踯躅　植株再生　均匀设计
羊踯躅［Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｌｅ（Ｂｌｕｍｅ）Ｇ．Ｄｏｎ］
又名闹羊花、黄杜鹃、黄色映山红。隶属杜鹃花科杜
鹃花属羊踯躅亚属落叶灌木。主要分布江苏、浙江、
江西、福建、湖南、湖北、河南，四川、贵州等地的山坡、
石缝、灌木丛中。是珍稀濒危药用植物，羊踯躅花中
含毒性成分木毒素和石楠素，叶含黄酮类、杜鹃花毒
素、煤地衣酸甲酯。有镇痛、驱风、除湿、麻醉功效，可
治风湿顽痹，伤折疼痛，皮肤顽癣等症。对粮食害虫、
蔬菜害虫有一定的防治效果，可用于开发植物源农
药。是有待开发的优良的园林绿化树种，可引种驯化
成为露地栽培的园艺观赏植物，是杜鹃育种的重要种
质资源。羊踯躅种子萌发率较低，石登红进行了扦插
和种子发芽研究，扦插生根率最高达４６．３％，在低温
条件下处理羊踯躅种子后，再经培养皿法进行种子萌
发后转移至基质（腐质土）里萌发，尽管提高种子的萌
发率和出苗率［１－２］，但种子细小难采集、步骤复杂，可
操作性差，且种子苗生长缓慢，距开花结果的时间较
长。杨春江和孙绍芳采取压条和扦插繁殖，最高成活
率分别达８５％和２８％［３］。可见，羊踯躅种子和压条、
扦插等常规繁殖存在步骤复杂、可操作性差和生根率
低等缺点。２００６年顾宏辉等报道利用当年生茎尖或
茎段通过腋芽茎段增殖后，再进行生根的组织培养繁
＊吉林省科技厅资助项目（２００７０５Ｃ０５）
作者简介：顾地周（１９７３－），讲师，主要从事珍稀濒危、观赏和药用
植物研究。
殖并获得成功，但增殖周期较长，需要两步才能完
成［４］，并未建立高效的植株再生体系。而本研究以羊
踯躅嫩茎段为材料，直接筛选影响嫩茎段生根的激素
种类及其适宜浓度，并确定具体的生根培养基，然后
进一步在生根培养基的基础上探索节增殖的高效植
株再生体系，以开创一步成苗技术，提高增殖系数。
目前，与其同属的其他种植物离体培养研究已有报
道［５－９］，但通过本方法进行繁殖的研究在国内外尚未
见报道。
１　材料与方法
１．１　外植体材料的来源和处理
羊踯躅枝条由江苏省农业科学研究院提供，将枝
条茎尖剪除后在实验室内水培促其腋芽萌发。待腋
芽萌发长至３．００ｃｍ后将嫩枝剪下，在超净工作台上
用体积分数７５％酒精涮洗１０ｓ，再用３．０％次氯酸钠
（质量浓度）溶液浸泡１０ｍｉｎ，无菌水冲洗８次，无菌
滤纸吸干表面水分后作为外植体备用。
１．２　羊踯躅嫩茎的生根和高效植株再生
以ＤＲ为基本培养基［１０］，将１．１中处理好的嫩枝
切割成含有腋芽的茎段接种到培养基１／２ＤＲ＋ＮＡＡ
０．０４ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３　１．５０ｍｇ／Ｌ中再次进行腋芽萌发
和伸长生长培养（培养条件为温度２６℃、光照强度
１　２００ｌｘ、光照周期１０ｈ／ｄ），待腋芽长至３．００ｃｍ时切
下并切割成１叶１段，接种到附加不同浓度的玉米素
ＺＴ、吲哚乙酸ＩＡＡ和萘乙酸ＮＡＡ（由预试验确定各
激素 的 浓 度 范 围 分 别 为 ＺＴ０．０１～０．０５ ｍｇ／Ｌ、
ＩＡＡ０．１０～０．３０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．０５～０．２０ｍｇ／Ｌ）的
１／４ＤＲ培养基上进行生根培养，加入蔗糖１５ｇ／Ｌ，琼脂
７．５ｇ／Ｌ，调节ｐＨ值为５．４，茎段在温度（２０±２）℃、光
照强度８００ｌｘ、光照周期８ｈ／ｄ条件下培养。为了提
高羊踯躅茎段的生根速度和生根率，采用均匀设计
法［１１－１２］，选用Ｕ１０（１０３）均匀表，每个处理接种茎段数
为１０，重复３次取平均值，筛选最适合羊踯躅茎段生
根的玉米素、吲哚乙酸和萘乙酸浓度配比。培养３５ｄ
统计生根率。
采取节增殖方式对羊踯躅进行高效快繁［１３－１４］，待
DOI:10.13456/j.cnki.lykt.2013.04.012
园林绿化　Ｇａｒｄｅｎ　＆Ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ
４２　 ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
二
○
一
三
年
第
四
期
　
林
业
实
用
技
术
生根的苗伸长至３．００ｃｍ以上时，在超净工作台上打
开培养瓶，将生根的苗留１或２叶剪下苗干，并切割成
１或２叶１段转接到附加ＧＡ３１．００ｍｇ／Ｌ的生根培养
基中，进行腋芽萌发伸长同时生根培养，统计并计算
每瓶中每段茎节的增殖倍数和周期。
１．３　羊踯躅再生植株的炼苗移栽
待再生植株生出５～７条带有侧根的不定根，且
苗高达２．００～３．００ｃｍ 时，从培养瓶中取出再生植
株，在含有５ｍｇ／Ｌ高锰酸钾溶液中洗去根部残留的
琼脂，然后植入经１５０倍液的杀毒矾消毒过的草炭
土、河砂和腐烂松针（４∶１∶２）的混合基质中，用透光
好的塑料薄膜覆盖以保湿保温，相对湿度保持在
７５％，温度控制在（２１±２）℃，每天自然光照１４ｈ，每
天中午适当通风换气，每天早晚喷洒清水各１次。
１．４　数据处理与分析
通通过均匀设计法进行试验设计，数据经分析处
理后摸索出各主要因素对嫩茎段生根的影响，再经过
进一步验证实验筛选影响茎段生根的主要因素的适
宜浓度，确定生根培养基。在生根培养基的基础上探
索一步成苗的最佳培养基。均匀设计软件采用 Ｕｎｉ－
ｆｏｒｍ　Ｄｅｓｉｇｎ　３．０Ｖ。
２　结果与分析
２．１　１／４ＤＲ 培养基中不同质量浓度 ＺＴ、ＩＡＡ 和
ＮＡＡＡ配比对羊踯躅嫩茎段生根的影响
表１　影响羊踯躅嫩茎段生根因素的的
Ｕ１０（１０３）均匀设计试验安排与结果
处理号
因素（ｍｇ／Ｌ）
ＺＴＸ１ ＩＡＡＸ２ ＮＡＡＸ３
生根率／％
１　 ０．０１　 ０．３０　 ０．１０　 ８２．０
２　 ０．０２　 ０．３０　 ０．１５　 ８２．４
３　 ０．０３　 ０．２５　 ０．２０　 ８５．５
４　 ０．０４　 ０．２５　 ０．１５　 ８８．３
５　 ０．０５　 ０．２０　 ０．１０　 ９５．９
６　 ０．０５　 ０．２０　 ０．１５　 ９４．３
７　 ０．０４　 ０．１５　 ０．２０　 ８７．６
８　 ０．０３　 ０．１５　 ０．０５　 ８７．３
９　 ０．０２　 ０．１０　 ０．０５　 ８５．４
１０　 ０．０１　 ０．１０　 ０．２０　 ７７．０
实验所得数据（表１）经均匀设计软件分析处理后
可得回归方程Ｙ＝７９．６＋３６０Ｘ１－２８．２Ｘ３，显著性水平
α＝０．０５，样本容量Ｎ＝１０，复相关系数Ｒ＝０．９８０　０，检
验值Ｆｔ＝８５．００，临界值Ｆ（０．０５，２，７）＝４．７３７，检验值Ｆｔ
＞临界值Ｆ（０．０５，２，７），说明回归方程显著。对各方程项
进行显著性检验可知：仅Ｘ１ 和Ｘ３ 方程项对Ｙ影响均
显著，说明ＩＡＡ对生根率 Ｙ影响不显著。根据回归
方程求出Ｙ的最优组合为：Ｘ１＝０．０５，Ｘ３＝０．０５，在此
组合基础上求得最优解：ｙ＝９６．２，计算优化值区间估
计为Ｙ＝９６．２±２．９９，即９３．２１％～９９．１９％。通过表
３试验结果和回归分析结果可知，Ｘ１ 和Ｘ３ 方程项对
回归的贡献值和贡献率分别为：Ｕ１＝２５７，Ｕ１／Ｕ＝
９４．５％；Ｕ３＝２４．０，Ｕ３／Ｕ＝８．８２％，说明ＺＴ对再生
芽苗生根率 Ｙ的贡献远远大于 ＮＡＡ，因ＺＴ与生根
率呈正相关，ＮＡＡ与生根率呈负相关。避免ＺＴ质量
浓度在０．０５ｍｇ／Ｌ以上和 ＮＡＡ在０．０５ｍｇ／Ｌ以下
有较高的生根率，又以ＺＴ质量浓度为０．０５、０．０６、
０．０７、０．０８、０．０９和０．１０ｍｇ／Ｌ以及 ＮＡＡ质量浓度
为０．００、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４和０．０５ｍｇ／Ｌ做了１２个
处理的试验，重复３次。发现ＺＴ质量浓度为０．０６ｍｇ／Ｌ
和ＮＡＡ质量浓度为０．０２ｍｇ／Ｌ时芽苗生根率最高。
待外植体茎段上的腋芽长至２．００ｃｍ左右时（图１ａ），
按照１．２中的方法，将腋芽切下，切割成１叶１段转接
到附加ＺＴ　０．０６ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ　０．０２ｍｇ／Ｌ的１／４ＤＲ
培养基中验证，培养８ｄ在靠近茎段基部切口的茎部
有微小颗粒出现，继续培养２０ｄ微小颗粒逐渐变形为
锥状，培养至２７ｄ锥状颗粒伸长为不定根，３５ｄ后可
形成３～５条不定根，并有侧根出现（图１ｂ），生根率达
９９．０％以上，在估计区间内，且比表２所列１０个处理
的生根率均高。可见，羊踯躅再生芽苗生根的最佳培
养基为：１／４ＤＲ＋ＺＴ０．０６ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０２ｍｇ／Ｌ。
２．２　羊踯躅高效植株再生和炼苗
按照１．２中的方法，对生根培养基进行改良，即
为 １／４ＤＲ＋ＺＴ０．０６ ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ０．０２ ｍｇ／Ｌ ＋
ＧＡ３１．００ｍｇ／Ｌ。以达腋芽快速萌发生长和生根同时
进行的目的。快繁的结果表明，经过２８ｄ的培养后，
每节段平均增殖 ５ 倍以上 （图 １ｃ），植株再生率
达９７．３％。
根据１．３中的方法，待苗高达到２．００ｃｍ以上时
进行移栽炼苗，羊踯躅再生植株经过炼苗后，１０ｄ可
揭去薄膜，成活率达９９．０％以上（图１ｄ）。
３　结论与讨论
本实验结果表明，在添加玉米素０．０４ｍｇ／Ｌ和萘
乙酸０．０２ｍｇ／Ｌ的１／４ＤＲ培养基中对羊踯躅嫩茎段
进行生根培养的结果表明，生根速度快，平均生根率
高达９９．０％以上，吲哚乙酸对羊踯躅的生根影响不显
园林绿化　Ｇａｒｄｅｎ　＆Ｌａｎｄｓｃａｐｉｎｇ
ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ　ＦＯＲＥＳＴＲＹ　ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　 ４３　
二
○
一
三
年
第
四
期
　
林
业
实
用
技
术
ａ．嫩枝段腋芽试管内萌发生长培养；ｂ．生根培养；ｃ．植株再生；ｄ．移栽。
图１　羊踯躅高效植株再生各阶段的形态
著。当萘乙酸低于０．０２ｍｇ／Ｌ时，芽苗生根率仅为
４５．０％，高于０．２０ｍｇ／Ｌ时，芽苗基部膨胀并产生愈
伤组织，继续培养根从愈伤组织上产生，含有这样根
的苗在炼苗移栽时根随愈伤组织从苗基部脱落，成活
率极低，原因可能是根中和苗茎的疏导组织连接错位
导致的，Ｄａｎｉｅｌｅ等的研究也发现了这一缺点［１５］。高
效快繁采取再生植株茎节增殖的方式，在生根培养基
中附加１．００ｍｇ／Ｌ的赤霉素有利于腋芽快速萌发和
生长［１６］，从而缩短了茎节的增殖周期，提高了增殖倍
数，王雯雯等开展的大字杜鹃快繁研究也报道了该方
面方法［１７］。该方法成本低，简捷而可操作性强，可用
于工厂化育苗。
在羊踯躅再生芽苗生根过程中，通过显著性检验
可知，玉米素和萘乙酸两个因素对生根率影响显著，
而吲哚乙酸对生根率影响不显著，玉米素和萘乙酸对
生根的贡献率分别为９４．５％和８．８２％，表明玉米素对
再生芽苗的生根贡献远远大于萘乙酸，这说明羊踯躅
试管苗的生根对激素具有选择性，生根所需的生长素
主要依赖于萘乙酸，辅以适当浓度的玉米素有利于植
物细胞趋于根器官功能的分化，并且在羊踯躅生根中
玉米素起决定性作用。本实验结果同时说明了每种
植物对不同植物生长调节物质都具有不同程度的选
择性［１８］，这可能是由植物自身的基因型控制的，而基
因型不同又决定了细胞分裂、分化和器官重建所依赖
的植物生长调节物质种类及其浓度高低有所不同。
目前，国外有许多野生杜鹃优良品种已通过人工
繁殖并驯化为园艺栽培种。我国野生杜鹃品种众多，
但人工繁殖并开发利用极少。羊踯躅是我国珍稀野
生药用和园艺观赏的植物资源，至今未见推广应用。
本结果建立了羊踯躅高效植株再生体系。为羊踯躅
和其它野生杜鹃优良品种的开发利用和工厂化育苗
奠定基础和提供方法。
参考文献：
［１］　石登红 ．羊踯躅种子萌发与扦插繁殖技术研究［Ｄ］．贵
阳：贵州师范大学 ．
［２］　石登红 ．羊踯躅（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｍｏｌｅ）种子萌发试验
［Ｊ］．贵阳学院学报（自然科学版），２０１０，５（１）：３９－４１．
［３］　杨春江，孙绍芳 ．羊踯躅压条、扦插育苗技术初探［Ｊ］．林
业调查规划，２００６，３１（增刊）：８２－８５．
［４］　顾宏辉，袁群英，朱春艳，等 ．羊踯躅的组织培养与快速
繁殖［Ｊ］．植物生理学通讯，２００６，４２（４）：６８３．
［５］　汤桂钧，张建安，蒋建平，等 ．高山杜鹃的组织培养快速
繁殖技术研究［Ｊ］．上海农业学报，２００４，２０（３）：１５－１８．
［６］　宫汝淳，姜云天，顾地周，等 ．短果杜鹃的组织培养与快
速繁殖［Ｊ］．植物生理学通讯，２００８，４４（１）：１３３．
［７］　顾地周，邓志刚，綦茂伟，等 ．苞叶杜鹃离体培养及种质
试管保存体系的建立［Ｊ］．南京林业大学学报：自然科学
版，２００９，３３（３）：２０－２４．
［８］　顾地周，高捍东，郭玉昕，等 ．毛毡杜鹃离体培养及种质
试管保存体系的建立［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然
科学版，２００９，３７（４）：１５１－１５７．
［９］　顾地周，张琪，朱俊义 ．小叶杜鹃的离体快繁体系建立及
种质试管的保存［Ｊ］．东北林业大学学报，２００９，３７（１０）：
２６－２８．
［１０］　曹孜义，刘国民 ．实用植物组织培养技术教程［Ｍ］．兰
州：甘肃科学技术出版社，２００２．
［１１］　顾地周，罗微，曹逊，等 ．松毛翠的离体快繁体系建立及
种质试管保存研究 ［Ｊ］．林业科 学，２００９，４５（７）：
１４０－１４４．
［１２］　顾地周，朱俊义，冯颖，等 ．草莓试管内诱导匍匐茎和高
温处理结合茎尖培养脱毒技术研究［Ｊ］．西北农林科技
大学学报：自然科学版，２０１０，３８（１１）：８９－９４．
［１３］　顾地周，丛小力，姜云天，等 ．色木槭的组织培养与快速
繁殖［Ｊ］．植物生理学通讯，２００８，４４（２）：３１４．
［１４］　顾地周，丛小力，宋利丽，等 ．木通马兜铃的组织培养和
快速繁殖［Ｊ］．植物生理学通讯，２００８，４４（１）：１３６．
［１５］　ＤＡＮＩＥＬＬＥ　Ｊ　Ｄ，ＷＩＬＬＩＡＭ　Ｅ　Ｖ，ＫＷＡＩ　Ｙ　Ｌ．Ｔｈｅ　ａ－
ｎａｔｏｍｙ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｒｅｄ　ｒａｓｐｂｅｒｒｙ　ｐｒｉｏｒ　ｔｏ　ａｎｄ　ａｆ－
ｔｅｒ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｔｏ　ｓｏｉｌ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎ　ｃｕｌ－
ｔｕｒｅ，１９８５，（１）：４３－５０．
［１６］　李合生 ．现代植物生理学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，
２００２．
［１７］　王雯雯，马秋月，朱俊义，等 ．大字杜鹃离体快繁体系建
立及种质试管保存研究［Ｊ］．植物研究，２００９，２９（２）：
１９８－２０３．
［１８］　高新一，王玉英 ．植物无性繁殖实用技术［Ｍ］．北京：金
盾出版社，２００３．★