全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(3)∶274 ～ 276
基金项目:肇庆学院青年项目(No． 0927) ;森林植物生态学教育部重点实验室开放研究基金项目(No． KLP201101)
作者简介:段志芳(1973—) ，女，讲师，博士，从事天然产物开发应用研究工作。Email:wdzhifang@ yahoo． com． cn
溪黄草黄酮类化合物抑制亚硝化反应活性的研究
段志芳1，2，付 莉2，赵则海2
(1． 肇庆学院生物医药工程中心，广东 肇庆 526061;2． 肇庆学院生命科学学院，广东 肇庆 526061)
摘要:目的 研究溪黄草黄酮类化合物对亚硝化反应的抑制作用。方法 根据最佳提取工艺条件提取得到 3 个主要的黄酮
类化合物，研究其对亚硝化反应的抑制作用。结果 溪黄草总黄酮提取率可达 91． 98 %，水溶性部分阻断亚硝胺的合成及清
除亚硝酸盐作用较强，分离得到的 3 个黄酮类化合物中芦丁的抑制作用较强，对亚硝胺的合成的最大阻断率可达 91． 5%，对
亚硝酸盐的最大清除率可达 89． 2%。结论 溪黄草黄酮类化合物具有抑制亚硝化反应的活性。
关键词:溪黄草;黄酮;提取分离;抑制亚硝化
中图分类号:R284． 2 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)03 － 0274 － 03
Study on the inhibition activities on nitrosation of flavonoids from Rabdosia serra
DUAN Zhi － fang1，2，FU Li2，ZHAO Ze － hai2
(1． Biopharmaceutical Research and Development Center，Zhaoqing University，Zhaoqing，Guangdong，526061 P． R． China;2． College
of Life Science，Zhaoqing University，Zhaoqing，Guangdong，526061 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To study the nitrosation inhibition activities of flavonoids from Rabdosia serra Hara．METHODS The total
flavonoids in Rabdosia serra were extracted using the optimum extraction conditions and were further separated to lipid － soluble and
water － soluble parts by ethyl acetate． The structures of three flavonoids were identified and their inhibitions on nitrosation were studied．
RESULTS The extraction rate of the flavonoids was as high as 91． 98 % ． The lipid － soluble and water － soluble extracts had some
inhibition on nitrosation such as nitrosodimethylamine synthesis and sodium nitrite，in which the inhibition of the water － soluble extract
was stronger than the lipid － soluble extract． In the three flavonoids，the rutin had stronger inhibition than the orthers，and its the maxi-
mum blocking rate to nitrosodimethylamine synthesis was as high as 91． 5%，while the highest removal rate to sodium nitrite was
89. 2% ． CONCLUSION The flavonoids in Rabdosia serra Hara had inhibition on nitrosation．
Key words:Rabdosia serra Hara;Flavonoids;Extraction and isolation;Inhibition on nitrosation
CLC number:R284． 2 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2012)03 － 0274 － 03
唇形科香茶菜属植物溪黄草 Rabdosia serra Ha-
ra具有清热祛湿、凉血散淤、抗肿瘤、抗菌、消炎作用
及保肝脏作用，临床用于治疗乙型肝炎、急性黄疸型
肝炎、急性胆囊炎及跌打、痈肿等症［1］。近年来，溪
黄草在华南各地临床上应用广泛，并出现了一些以
其为主要原料的保健品，具有较大的开发应用前
景。亚硝胺是一类强致癌物质，正常情况下人们直
接从食物中摄入的亚硝胺量微乎其微，但形成亚硝
胺的前体物质亚硝酸盐和胺类却大量存在于食物中
并产生于食物在体内的代谢过程中，因此，阻断亚硝
胺合成或消除亚硝胺的前体是防治癌症的有效途径
之一［2］。现以芦丁为对照品，采用单因素和正交试
验法确定了提取溪黄草总黄酮的最佳工艺条件，依
此方法提取总黄酮并将其分为水溶性和脂溶性两部
分，通过对二甲基亚硝胺(NDMA)合成的阻断及对
亚硝酸钠的清除率的测定，研究其对亚硝化反应的
抑制作用。对活性较好的部分进一步分离纯化得到
溪黄草黄酮化合物，UV、IR、1HNMR 谱图解析鉴定
化合物的结构，并筛选得到抑制亚硝化作用较好的
化合物，以期为溪黄草的广泛开发和应用提供实验
依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
UV － 2550 型紫外可见分光光度计、FTIR －
8400S红外光谱仪(日本岛津) ;Avance AV 400 核磁
共振谱仪(瑞士 Bruker)。溪黄草(市售，经陈雄伟
副教授鉴定) ;芦丁对照品(上海生化试剂厂) ;所用
试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 溪黄草黄酮的提取 溪黄草总黄酮提取的
方法为:溪黄草→粉碎→过筛→溶剂法提取→离
心→过滤→定容→检测溪黄草黄酮含量。以乙醇 －
水作为提取试剂，分别进行提取剂浓度、料液比、提
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.03.018
取温度、提取时间单因素试验和正交试验及提取次
数等实验条件的选择。采用分光光度法测定溪黄草
总黄酮的含量［3］。依芦丁标准工作曲线，得出回归
方程为:Y = 9． 3129X + 0． 0265(r = 0． 9992)。最佳
提取条件为:80%乙醇、温度 90 ℃、料液比为 1∶10
条件下提取(1． 5 h × 2) ，黄酮提取率可达 91. 98%。
最优提取方法得到溪黄草总黄酮提取物 A;乙酸乙
酯多次萃取，将萃取液合并，减压浓缩并真空干燥得
到组分 B(酯溶性) ;剩余水溶液部分减压浓缩并真
空干燥得到组分 C(水溶性)。组分 A、B、C 的提取
率分别为 13． 76%、5． 57%、6． 58%，黄酮含量分别为
91. 98%、35． 84%、55． 10%。实验结果是以原料为比
较标准计算所得，从中可以看出溪黄草黄酮含量较
高，其中，水溶性黄酮含量高于脂溶性黄酮。
1． 2． 2 溪黄草黄酮的分离纯化 将 B 组分拌入硅
胶，经石油醚 －乙酸乙酯柱层析梯度洗脱，分别收集
不同部位，浓缩，进一步薄层分离，得到主要黄酮化
合物 I和 II。水溶性部分 C采用 DA201 大孔吸附树
脂分离纯化，对分离条件进行优化，控制上样浓度为
0． 17 mg·mL －1、上柱液 pH5、流速 2 mL·min －1、上样
体积 4 BV、洗脱剂浓度 90%、洗脱剂用量 8 倍体积，
洗脱液减压浓缩有沉淀析出，经水多次重结晶得到
黄酮化合物 III。观察得到的溪黄草黄酮化合物的
外观、颜色，测熔点，进行化学鉴定反应，经 UV、
IR、1HNMR谱图解析，与文献对照，确定化合物的结
构。化合物 I 为淡黄色针状结晶，mp250 ～ 251 ℃;
UV λmax /nm:210，267，324。IR(KBr)/ cm
－1:3430，
1659，1605，1511，1247，1181，1076，834。1HNMR
(DMSO － d6) :δ3． 92(3H，s) ，6． 49(1H，d，J = 1． 95
Hz，H － 6) ，6. 84(1H，d，J = 2． 05 Hz，H － 8) ，6． 90
(1H，s) ，7． 12(2H，d，J = 8． 9 Hz，H － 3，5) ，8． 03
(2H，d，J = 7. 15 Hz，H － 2，6)。根据谱图数据并
与文献［4］对照，确定化合物 I 为 5 －羟基 － 4’－甲
氧基黄酮 － 7 － 葡萄糖苷。化合物 II为黄色粉末;
1HNMR(DMSO － d6) :δ8． 63(1H，d，J = 2． 0 Hz，
H －2) ，8． 12(1H，d，J = 8． 5 Hz，H － 5) ，7． 57(1H，
dd，J = 2． 0、8． 5 Hz，H － 6) ，6． 78(1H，d，J = 2． 0
Hz，H －8) ，6. 74(1H，d，J = 2． 0 Hz，H － 6)。以上
数据与文献［5］中槲皮素的数据一致，故化合物Ⅱ鉴
定为槲皮素。化合物 Ⅲ 为黄色粉末;1HNMR
(DMSO － d6) :δ7． 57(1H，s，H － 2) ，7． 55(1H，d，
J = 8． 5 Hz，H － 6) ，6． 85(1H，d，J = 8. 5 Hz，H －
5) ，6． 40(1H，brs，H － 8) ，6． 22(1H，brs，H － 6) ，
5. 37(1H，d，J = 7． 5 Hz，H － 1″) ，4． 39(1H，brs，H －
1) ，1． 00(3H，d，J = 6． 2 Hz，H － 6)。根据谱图数据
并与文献［6］对照，确定化合物Ⅲ为芦丁。
1． 2． 3 溪黄草黄酮类物质抑制亚硝化反应的研究
溪黄草黄酮类物质阻断亚硝胺合成及清除 NaNO2
的试验具体操作参照文献［7 － 8］。实验首先比较总黄
酮提取物 A、酯溶性组分 B 和水溶性组分 C 对亚硝
化反应的抑制作用，根据结果对活性较好的部分进
一步分离纯化后再测定单个黄酮化合物对亚硝化反
应的抑制作用，以期获得纯的抑制亚硝化反应效果
较好的单一黄酮成分。溪黄草黄酮提取物部分及 3
个黄酮化合物在 0． 01 ～ 1． 0 mg·mL －1时对二甲基
亚硝胺合成的阻断作用及对 NaNO2 的清除作用见
图 1。从图 1 可看出:3 个提取物部分对亚硝化反应
均有抑制作用，其中水溶性部分 C 作用较强。对酯
溶性部分 B和水溶性部分 C进一步分离纯化得到 3
个黄酮化合物，当化合物浓度小于 0． 01 mg·mL －1
时，其对二甲基亚硝胺的阻断率较小、对 NaNO2 清
除作用较弱;当浓度为 0． 01 ～ 1． 0 mg·mL －1时，随着
化合物浓度的增加，其对二甲基亚硝胺的阻断率及
对 NaNO2 清除率呈现出明显梯度变化;当溪黄草黄
酮化合物浓度大于 1． 0 mg·mL －1时，由于溶液饱和
有沉淀析出而影响测定。在相同浓度下，芦丁对二
甲基亚硝胺的阻断率及对 NaNO2 的清除率略大于
其他两个黄酮化合物。
图 1 溪黄草黄酮对亚硝胺合成的阻断率(A)及对亚硝酸钠的清除率(B)
Fig 1 The blocking rates of flavonoids to nitrosodimethylamine synthesis(A)and the removal rates of flavonoids to sodium nitrite(B)
572第 3 期 段志芳，等。溪黄草黄酮类化合物抑制亚硝化反应活性的研究
华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(3)∶276 ～ 278
2 讨论
采用最佳提取工艺条件提取溪黄草总黄酮，经
乙酸乙酯萃取后分为脂溶性和水溶性两部分，各萃
取部分都含有黄酮，其中，水溶性部位黄酮的含量及
抑制亚硝化作用均较强。在体外模拟胃液的条件
下，溪黄草黄酮化合物能有效地阻断二甲基亚硝胺
的合成和清除亚硝酸盐，芦丁对亚硝化反应的抑制
作用略强，在 1． 0 mg·mL －1时，对亚硝胺合成的最大
阻断率可达 91． 5%，对亚硝酸盐的最大清除率可达
89． 2%。溪黄草是广东特产药材，黄酮提取率高，是
溪黄草的主要化学成分之一，有可能成为一种经济、
有效的具有防癌作用的天然植物新资源。
参考文献:
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收稿日期:2011 － 07 － 02
基金项目:四川省科技厅应用基础研究项目(No． 2008JY0008)
作者简介:冯俭(1963—) ，教授，主任药师，从事中药有效成份筛选及新药开发研究工作。Email:fengjan222@ 126． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:fxp1024@ 126． com
丹参联合放疗对小鼠 Lewis肺癌肿瘤组织微血管的影响
冯 俭1，谢 萍1* ，孙 川2，秦银花2，李 煌2，莫小宇2
(1．成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072;2．成都中医药大学，四川 成都 610072)
摘要:目的 探讨丹参联合放疗对小鼠 Lewis肺癌肿瘤组织微血管密度(MVD)的影响。方法 建立 Lewis 肺癌荷瘤鼠模型
后，60 只荷瘤鼠随机均分为模型组、丹参组(低、高剂量)、放疗组、丹参低剂量 +放疗组(联合 1 组)、丹参高剂量 +放疗组(联
合 2 组)。各组于接种第二日起每天 ip给药，连续 12 d，放疗组及联合 1、2 组于接种第 7 日起给予钴 － 60 照射肿瘤局部，剂量
2 Gy·d －1，连续 5 d。末次给药 24 h后处死动物，剥离肿瘤组织称重，计算抑瘤率;免疫组化法检测肿瘤组织 MVD。结果 联
合 1 组的 MVD较放疗组和丹参低剂量组明显降低(P ＜ 0． 05)。结论 丹参联合放疗对 Lewis肺癌小鼠肿瘤血管的生成有明
显的抑制作用。
关键词:丹参;放疗;抑瘤率;微血管密度
中图分类号:R96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)03 － 0276 － 03
Influence of Danshen combined with radiotherapy on micro － vascular of tumor tissue in mice
with Lewis lung carcinoma
FENG Jian1，XIE Ping1* ，SUN Chuan2，QING Yin － hua2，LI Huang2，MO Xiao － yu2
(1． Hospital of Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan，610072 P． R． China;2． Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan，
610072 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To investigate generating impacts of microvessel density in mice with Lewis lung carcinoma through using
herb Danshen combined with radiotherapy． METHODS Holland Lewis lung carcinoma mice were taken as the model and randomly
divided into control group，low dose of Danshen group，high dose of Danshen group，radiotherapy group，low dose of Danshen and radio-
therapy group，high dose of Danshen and radiotherapy group，there were 10 mice in each group． Each group was inoculated by intraper-
itoneal and injected Danshen injection since the second day of inoculation for 12 days． Radiotherapy group，low dose of Danshen and
radiotherapy group，high doses of Danshen and radiotherapy group were irradiated with cobalt － 60，2 Gy·d －1 for 5 days since 7th of