全 文 ：粮油食品科技 第 2 3 卷 2 0 1 5 年 第 4 期

生物工程
白花丹参多 酶法提取条件的
响应面优化及其抗氧化活性研究
巩 健
（ 淄博职业学院 制 药与 生物工程 系 ， 山 东 淄博 2 5 5 3 1 4 ）
摘 要 ：研究响应面优化复合酶法提取 白花丹参 多糖的 工艺 ，并评价其抗氧化活性 。 以 白花丹参多
糖提取率为响应值 ，液料比 、酶解温度 、酶解时间 、复合酶 （木瓜蛋 白 酶 ： 纤维素酶 ： 果胶酶 ＝ 2 ： 2 ： 1 ）
添加量为 实验因 素 ，釆用 响应面法建立数学模型 ，优化提取条件 ，并初步探讨 白花丹参 多 糖的理化
性质 ，考察 白花丹参 多糖对 ＤＰＰＨ 和 ？ＯＨ 自 由基的 清除能力 。 结果表明 ，通过二 次回 归模型响应
面分析 ，液料比 、酶解时间 、温度 、复合酶添加量四 因 素对白 花丹参多 糖提取率的影响依次减弱 ； 最
佳工艺条件 为酶解温度 5 2 Ｔ 、时间 7 0 ｍｉｎ 、复合酶添加量 8 ． 0 ｍｇ／ｍＬ、液料比例 为 4 5 ： 1ｍｌ／ｇ ，在此
条件下 多糖提取率为 1 3 ． 3 6 ％ ，模型 方程理论预测值为 1 3 ． 7 0％ ， 两者相对误差 小 于 5 ％ 。 白 花丹
参 多糖为左旋型 、酸性多糖 ， 易溶于水 ，并具有较 强的抗氧化活性 ， 对 ＤＰＰＨ 和 ？ＯＨ 自 由基的半数
抑制浓度分别 为 0 ． 9 6 9ｍｇ／ｍＬ 和 3 ． 1 1 4 ｍｇ／ｍＬ ，但抗氧化活性小 于 Ｖｃ 。 采用 响应 面法优化得到 了
白花丹参 多糖的最佳复合醉提取工 艺 ，得到 的 多糖具有较强 的抗氧化活性 。
关键词 ： 白 花丹参多 糖 ；复合酶 ； 响应 面 ；提取 ；抗氧化
中图分类号 ：Ｒ 2 8 2  ； Ｑ 5 3 9 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： 1 0 0 7 － 7 5 6 1 （ 2 0 1 5 ） 0 4 － 0 0 9 3 － 0 5
Ｓｔｕｄｙｏｎｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｓａｌｖｉａ
ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ／？ａｌｂａｂｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆｉａｃｃｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙａｎｄｉｔｓａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙ
ＧＯＮＧＪｉａｎ
（ Ｄｅｐａｒ ｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔ ｉｃａｌａｎｄＢ ｉｏ ｌｏｇｉ ｃａ ｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ，ＺｉｂｏＶｏｃ ａｔｉｏｎａｌＩｎｓ ｔｉｔｕｔｅ ，ＺｉｂｏＳｈａｎｄｏｎｇ 2 5 5 3 1 4 ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ ： Ｔｈｅｅｘｔｒａｃ ｔ ｉｏｎｔｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙｏｆｐｏ ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｓａｌｖ ｉａｍ ｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｆ．ａｌｂａｂｙｏｐｔｉｍｉｚｅｄｃｏｍ？
ｐｌｅｘｅｎｚｙｍｅｍｅ ｔｈｏｄｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｉ ｔｓａｎｔｉｏｘ ｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉ ｔｙ ．Ｔａｋｉｎｇｐｏ ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｓｅｘｔｒａｃｔ ｉｏｎ
ｒａｔｅａｓｒｅｓｐｏｎｓｅｖａｌｕｅ ， ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｗａ ｔｅｒｔｏｍ ａｔｅｒｉａｌ ， ｅｎｚｙｍｏ ｌｙｓｉｓｔｅｍｐｅｒａ ｔｕ ｒｅａｎｄｔｉｍｅ ， ａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｅｎ？
ｚｙｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａ ｔｉｏｎ（ｐａｐａｉｎ  ：ｃｅ ｌｌｕｌａｓｅ  ：ｐｅｃ ｔｉｎａｓｅ＝ 2 ： 2 ： 1 ）ａｓｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓ ， ｔｈｅｍａｔｈｅｍａ ｔｉｃａｌ
ｍｏｄ ｅｌｗａｓｅｓ ｔａｂ ｌｉｓｈｅｄｂｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕ ｒｆａｃｅｍｅ ｔｈｏｄ ．Ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉ ｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｐｔｉｍ ｉｚｅｄ ．Ｔｈｅ ｐｈｙｓｉ－
ｃｏ＿ｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅ ｒｉ ｓｔｉｃ ｓｏ ｆｔｈ ｅｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅａｎｄｔｈｅｆｒｅｅｒａｄ ｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｉ ｔｙ ｔｏＤＰＰＨａｎｄ
？ＯＨｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ ．Ｔｈ ｅｒｅｓｕｌ ｔｓｈｏｗｅｄｔｈａ ｔａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏｑｕａｄｒａｔ ｉｃｒｅｇｒｅ ｓｓ ｉｏｎｍ ｏｄｅ ｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅａ－
ｎａｌｙｓｉｓｔｈｅｅｆｆｅｃ ｔｏｆｔｈ ｅ 4 ｆａｃｔｏ ｒｓｏｎｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄ ｅｙｉｅ ｌｄｗａ ｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎ ｔｈｅｏｒｄｅｒｏｆｒａｔｉｏｏｆｗａｔｅｒｔｏ
ｍａｔｅｒｉａｌ ，ｅｘｔｒａｃ ｔｉｏｎｔｉｍｅ ，ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｃ ｏｍｐｌｅｘｅｎｚｙｍｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄ ｉ？
ｔｉｏｎｓｗｅｒｅｔｈａｔｔｈｅｃ ｏｎｃ ｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ ｃｏｍｐｌｅｘｅｎｚｙｍｅｗａｓ 8 ． 0 ｍｇ／ｍＬ ，ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅｗａｓ  7 0 ｍｉｎ ，ｔｈｅｒａ？
ｔｉｏｏｆ ｗａｔｅ ｒｔｏｍａｔｅ ｒｉａｌｗａ ｓ 4 5 ： 1ｍＬ／ｇ ，ａｎｄｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍ ｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ 5 2 Ｔ ｌ ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅ ｏｐｔｉｍａ ｌｃｏｎｄｉ？
ｔｉｏｎｓ
 ，
ｔｈｅｅｘｐ ｅｒｉｍ ｅｎｔａｌｅｘｔｒａｃ ｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓ 1 3 ． 3 6 ％ ， ｔｈ ｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｅｘｔｒａｃｔ ｉｏｎｒａ ｔｅｂｙｍａｔｈｅｍａｔｉｃ ａｌｍｏｄｅｌ
ｗａｓ1 3 ． 7 0 ％ ．Ｔｈｅｄｉ ｆｆｅ ｒｅｎｃｅｂｅ ｔｗｅｅｎｔｈｅｍｗａｓｌｅｓｓｔｈａｎ 5 ％ ．Ｔｈｅｓａｍ ｐｌ ｅｗａｓｌｅｖｏｇｙｒａｔｉｏｎａｎｄａｃ ｉｄｉ ｔｙ
ｐｏ ｌｙ ｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅ ， ａｎｄｓｏ ｌｕｂｌｅｉｎｗａ ｔｅ ｒｅａｓ ｉｌｙｗｉ ｔｈ ｒｅｌａ ｔｉｖｅｌｙｓｔｒｏｎｇａｎｔ ｉｏｘ ｉｄａｎ ｔａｃｔ ｉｖ ｉｔｙ ， ｔｈｅ ＩＣ 5 0 ｆｏｒＤＰＰＨ
ａｎｄ？ＯＨｗｅ ｒｅ  0 ． 9 6 9 ｍｇ／ｍＬａｎｄ 3 ． 1 1 4 ｍｇ／ｍＬ ，ｒｅｓｐｅｃｔ ｉｖｅ ｌｙ ，ｗｈｉｃｈｗａｓｗｅａｋｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｖｉ ｔａｍｉｎ
Ｃ ．Ｔｈｅｐｏｌｙ ｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅ ｓ ｆｒｏｍｓａｌｖｉａｍ ｉｌｔ ｉｏｒｒｈｉｚａ ｆ．ａｌｂａｅｘ ｔｒａｃｔｅｄｂｙｏｐｔ ｉｍ ａｌｃｏｍｐｌｅｘｅｎｚｙｍａ ｔｉｃ ｅｘ ｔｒａｃ ｔｉｏｎ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｐｔｉｍｉｚｅｄｂｙｒｅ ｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃ ｅｍｅ ｔｈｏｄｏ ｌｏｇｙｓｈｏｗｅｄｒｅｌａｔ ｉｖｅ ｌｙｓ ｔｒｏｎｇａｎ ｔ ｉｏｘ ｉｄａｎｔａｃｔ ｉｖ ｉｔｙ ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ： ｓａｌｖｉａｍ ｉｌｔ ｉｏｒｒｈ ｉｚａｆ．ａｌｂａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ；ｃ ｏｍｐｌｅ ｘｅｎｚｙｍｅ ；ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃ ｅｍ ｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ ；
ｅｘｔｒａｃｔ ｉ ｏｎ
；
ａｎｔ ｉｏ ｘｉｄａ ｔｉｏｎ
收稿 日期 ＝ 2 0 1 5 － 0 3 － 0 7
作者简介 ： 巩健 ， 1 9 6 7 年出 生 ， 女 ， 山东桓台人 ，副教授 ．
睡
DOI牶10牣16210牤j牣cnki牣1007牠7561牣2015牣04牣022
生物工程

粮油食品科技 第 2 3 卷 2 0 1 5 年 第 4 期
多糖具有多种药理活 性 ， 如抗氧化 、抗炎性反品溶液 中有无淀粉的存在 ， 以 1 ｍｇ／ｍＬ 淀粉溶液作
应 、抗肿瘤 、增强免疫等 ，且副作用小 ［ Ｕ ， 天然产物为对照 ；用 自 动旋光仪测 1ｍｇ／ｍＬ 样品 多糖 2 0 Ｔ
如铁棍山药 ［ 2 ］ 、紫苏ｍ 、梔子 ［ 4 ］ 、啤酒酵母 ［ 5 ］ 等都含时的旋光度 ；粘度测定具体方法参照文献 ［ 9 ］ ，使用
有多糖成分 。 白花丹参 （ ｓａｆｏｉａｍｉｔｏｗｒ／ ｉｉｚａ ／？ａｌｂａ ）旋转流变仪 （ 安东帕 ＭＣＲ3 0 2 ，奥地利 ） 测定不同温
属稀有名贵食药材 ， 富含多种有效活性成分 。 研究度下 （ 2 0 Ｔ 、 5 0 Ｔ ） 样品溶液表观粘度随剪切速率
表明 ， 白花丹参提取物通过保护细胞周期与抑制细变化的 曲线 。
胞凋亡对脂多糖 （ ＬＰＳ ）损伤的血管内皮祖细胞发挥 1 ． 5 响应面优化设计
保护作用 ［ 6 ］ ； 此外 ， 白 花丹参水溶性部位可能通过酶解 ＰＨ  4 ． 5 、摇床转速 2 0 0 ｒ／ｍｉｎ 及复合酶比
调节细胞氧化应激抑制 由 ＬＰＳ 导致的血管 内皮细例 （木瓜蛋 白酶 、纤维素酶 、果胶酶的质量 比为 2 ： 2
胞凋亡 ［ 7 ］ 。 本研究拟通过响应面法优化 白花丹参： 1 ） ［ 1 Ｑ ］三个条件不变 ， 因素水平设计及数据分析方
多糖的复合酶提取工艺 ，并探讨其体外抗氧化作用 。 法参考文献 ［ ｕ ］ ，具体因素水平见表 1 。 数据分析采
1材料与方法用Ｄｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐ ｅｒｔ软件 （ Ｓｔａ ｔ－Ｅａｓｅ ，Ｉｎｃ ． ） 。
1 ． 1材料与试齐Ｈ 表 1 白花丹参 多糖提取条件优化的因素水平值
白花丹参 ：购 自 山东泰联中药饮片公司 ，烘干至 ｇｆ
恒重备用 ； ＤＰＰＨ （ 1 ， 1－二苯基 － 2 － 三硝基苯肼 ）水平ＡＢｃｈ
：北兄 中生瑞泰科技 ；木瓜蛋 白酶 、果胶醇 、纤维素 ／ （ ｍＬ／ｇ） 温度／＂Ｃ时 间／ｍｉ ｎ ／（ ｍｇ／ｍＬ ）
酶 ：上海士锋生物科技 ； Ｄ （＋ ） ＿ 无水葡萄糖 （标准—＾＾ 3 0 6
品 ） ：大连美仓生物技术 ；维生素 Ｃ ： Ｓ ｉｇｍａ（ 美国 ） ； 无丨 5 89 0 ，ｏ
水乙醇等常用化学试剂均为国产分析纯。 ：
1 ． 2 白花丹参多糖的提取1 ． 6 自花丹参多糖抗氧活性研究
白花丹参药材粉碎后过 1 0 0 目筛 ，称取筛后粉白花丹参多糖对 自 由基 ＤＰＰＨ 的清除能力测
末 5 ． 0 ｇ ，按具体实验需要的酶解条件 ，在摇床上进定 ： 0 ． 2 ｍｍｏｌ／ＬＤＰＰＨ 溶液与待测样液等体积 （各 2
行酶解提取多糖成分 ， 摇床转速为 2 0 0 ｒ／ｍｉｎ ， 酶解ｍＬ ）混合反应 0 ． 5 ｈ 后 ，测其在 5 1 7ｎｍ 处的吸光度
完成得到多糖浸提液 ，浓缩 ， Ｓｅｖａｇ 法去除蛋白 ，上清值 ，标记为 Ｃ， ，测 ＤＰＰＨ 溶液与蒸馏水在 5 1 7 ｎｍ 处的
乙醇沉淀 ，离心 ，沉淀用乙醇 、丙酮 、 乙醚依次清洗 ， 吸光度值 ，标记为 Ｃ 0 ，测乙醇与样液在 5 1 7 ｎｍ 处的吸
真空冷冻干燥 。光度值 ，标记为 Ｃ 2 ， 同法测定对照 Ｖ ｃ的吸光度值 ［ 1 2 ］ 。
1 ． 3 多糖测定 白花丹参多糖对 自 由￥ ？ＯＨ 的清除能力泖 1
通过苯酷－硫酸法测定多糖含量 ，还原糖测定 定 ：详细步骤参考娜 ［ 1 2 ］ ，测娜长为 5 1 0 ｎｍ 賺
采用 3 ，5 － 二硝基水杨酸法、 以 Ｄ （＋） － 无水 光度值 ，标记为 蒸溜水替代样品溶液后的 吸光
葡萄糖作为标准品 ，得到标准曲线为 ｒ＝ 0 ． 0 1 5  1 ， － 度值为 Ｑ ，蒸馆水代替水杨酸后的吸光雌为 ｃ 2 ’同法测定对照 Ｖｃ的吸光度值 ，并进行比较。
0 ． 0 3 9 2
：
Ｒ＝ 0 ． 9 9，擁式 中 ＾ 为葡萄麵量浓对两种 自 由基的清除率计算公式均为 ：度 ’单位为ｍｇ／ｍＬ ， ｙ为吸光度 ＯＤ值。ｙ／％＝［ 1 －（ Ｃ ！ － Ｃ 2 ）／Ｃ。 ］ｘ ｌＯＯ 。
多糖提取率计算公式为 …／％＝ ［ （ ｗ ｘ ｒ ）／ｚ ］ 2 结果与分析
ｘ  1 0 0 ，式 中々 为多糖提取率 （ ％ ） ； Ｔ 为多糖浸提液 2 ． ｘ 』响应面优化
的体积 （ ｍＬ ） ； ｙＶ 为 由 回归 方程求得 的多糖浓度」 实验结果
（ ｍｇ／ｍＬ ） ；Ｚ 为药材白花丹参粉末质量 （ ｇ ） 。具体结果见表 2 ￣ 表 3 。
还原糖提取率计算公式 ： Ｈ／％＝ 提取液中还原表 2 实验方案及结果
糖质量／白花丹参粉末质里 Ｘ 1 0 0 。实验号ａＢＣＤ 多糖提取率
1 ． 4 理化性质分析￣ｉ 0 0＾Ｉ 8＾ 5￣
将样品多糖分别溶于水 、丙酮 、 乙醚 、乙醇 、正丁丨ｉ 1Ｉ 1ｎ9Ｚ
醇 、二 甲基亚砜有机溶剂 ， 观察溶解情况 ； 用 ｐｉｎｔ 4… 0 － 1 07 ： 1 5
测定样品溶液 ＰＨ 值 ； 采用碘一碘化钾反应检测样 5 0 1 0－ 1 9  3 5
Ｍ
粮油食品科技 第 2 3 卷 2 0 1 5 年 第 4 期

生物工程
  （？＝ 1 3 ．  3 7 ＋1 ． 1 5 Ａ－ 0 ． 1 3 Ｂ ＋ 1 ． 1 0 Ｃ一 0 ． 0 3 4 Ｊ 5＋
务验号
   
多糖提取率／％ 0  0 7 5 ／1 5 ＋  0 ．Ａ 2 Ａ Ｃ＋ 0 ． 0 8 2 ／ 1Ｄ＋ 0 ．  2 9ＢＣ＋ 0 ． 1 8 ＢＤ－
6 0 01－ 1 1 0 ． 8 6
7＿ ！ ，ｏｏ 7 ． 2 3 0 ．  5 2 ＣＤ－ 2 ． 5 4 Ａ 2－ 1 ． 4 3 Ｓ 2－ 1 ．  8 7 Ｃ 2 － 2 ． 2 8 Ｄ 2
8 0－ 1－ 1 0 9 ． 2 4 由表 3 方差分析结果可知 ，模型方程达到极显
1
1 °° ‘ 0 ＇ 8 3著 （ Ｐ＜ 0 ． 0 0 0 1 ） ， 失拟项不显著 （ Ｐ＝ 0 ． 2 1 8 0 ＞
1
0－
1－ 1 0 0 8 ． 3 5
Ｈ！ 0 0 1 9 ． 8 3 0 ． 0 5 ） ， 调整决定系数 ＝ 0 ． 9 0 1 8 ， 总决定系数尺 2
1 2 0 0 001 2 ． 6 3 ＝ 0 ． 9 5 0  9 ，这些值表 明此 回 归方程模型成立 ，拟合
1 3 0“ 1 1 0 1 0 ＇ 4 1程度好 ，实验误差小 ，可用于白 花丹参多糖酶法提取
1 4 0
1－ 1 0 9 ． 1 2
！ 5！0 0－ 1 9 ． 4 7工艺的优化 。 此外 ， 液料比Ｍ） 、酶解时间 （ Ｃ ） 、酶
1 6 10－ 1 0 7 ． 5 7解温度 （ Ｂ ） 、复合酶添加量 （ Ｄ ） 对 白花丹参多糖提
1 7 0 0“ 1“ 1 7  9 8取率的影响依次 减弱 ， 其中 Ａ 、 ｃ 达到极显著水平
1 8 0 0 0 0 1 3 ． 8 5
1 9 0 0， 9 ． 4
1
（ Ｐ ＜ 0 ． 0 0 0 1 ） ，两 因素 间交互作用均 不显著 ＞
2 0 0 00 0 1 3 ． 4 7 0 ． 0 5 ） 。回归模型方程求解得到 的最佳工艺参数为 ：
2 1“ ‘ 0 0 1 7 4 6复合酶酶解温度 5 1 ． 9酶添加量 7 ． 9 ｍ ｇ／ｍＬ ， 酶
2 2 0－ 1 0－ 1 1 0 ． 0 1
， ， ，… ，
2 3 0 0 0 0 1 3 ． 5 3解时间为 6 9 ． 8 1＾ 1 1 ， 液料比为 4 5 ． 1 ： 1 1 1 1以 1 此时 白
2 4－ 1 0 1 0 9 ． 3 1花丹参多糖提取率达到 1 3 ． 7 0％ 。
2 5 0 1 1 0 1 1 ． 4 5 2 ． 1 ． 3 交互作用分析
＾ＪＩ等高线的形状可反映出 交互效应的强弱 ，椭圆
2 8 0 0 11 9 ． 6 6形表示两因素间交互作用显著 ，而圆形则与之相反 。
2 9 1 0

1 0

‘ 1 － 4 1图 1 表明各因素间交互作用等高线 图均近似圆形 ’
说明交互作用对 白花丹参多糖提取率 的 影响不显

表 3 纖■纖析
著 ，与方差分析结果一致 。
参数平方和 自 由 度 均方Ｆ Ｐ显著性
模型 1 0 6 ． 8 0 1 4 7 ． 6 3 1 9 ． 3 8＜ 0 ． 0 0 0  1＊ ＊ ＊
Ａ
1 5 ． 9 41 1 5 ． 9 4 4 0 ． 4 8＜ 0 ． 0 0 0  1＊ ＊ ＊
Ｂ 0 ． 2 2 1 0 ． 2 2 0 ． 5 5 0 ． 4 7 1 1 1 4 ． 0
Ｃ 1 4 ． 5 0 1 1 4 ． 5 0 3 6 ． 8 2＜ 0 ． 0 0 0  1＊＊＊
Ｄ 0 ． 0 1 41 0 ． 0 1 4 0 ． 0 3 6 0 ． 8 5 3  1＾ ｎ ． Ｏ
ＡＢ 0 ． 0 2 3 Ｉ 0 ． 0 2 3 0 ． 0 5 7 0 ． 8 1 4  5 ￥Ｊ 0 °
ＡＣ 0 ． 7 11 0 ． 7 1 1 ． 7 9 0 ． 2 0 2  0 ＿ｇ ｏ
ＡＤ 0 ． 0 2 71 0 ． 0 2 7 0 ． 0 6 9 0 ． 7 9 6  4城 7 ． 0
｜
ＢＣ 0 ． 3 4 1 0 ． 3 4 0 ． 8 5 0 ． 3 7 1 0
＼＾＜＼
5 8 ． 0Ｖ）＂＞ 6 0  0ＢＤ 0 ． 1 3 1 0 ． 1 3 0 ． 3 4 0 ． 5 7 0  0 ＾乂＾＾ 5 2 ． 0 ‘
ｃ° 1 0 1 1Ｌ 0 7 2 ． 7 2° － 1 2 1 3
Ａ 2 4 1 ． 8 01 4 1 ． 8 0 1 0 6 ． 1 8＜ 0 ． 0 0 0  1＊ ＊ ＊七 4 6 ． 0 2 0 ． 0＾
Ｂｌ 1 3 ． 3 31 1 3 ． 3 3 3 3 ． 8 6＜ 0  0 0 ° 1＊ ＊ ＊ ａ 酶解温度与液料比交互作用图
Ｃ 2 2 2 ． 7 7 1 2 2 ． 7 7 5 7 ． 8 4＜ 0 ． 0 0 0 1 ＊ ＊ ＊
Ｄ 2 3 3 ． 6 11 3 3 ． 6 1 8 5 ． 3 6＜ 0 ． 0 0 0 1＊ ＊ ＊
残差 5 ． 5 1 1 4 0 ． 3 9
1 4 ． 0＾
失拟项 4 ． 7 0 1 0 0 ． 4 7 2 ． 3 1 0 ． 2 1 8 0。 1 3 ． 0 ＂
纯误差 0 ． 8 1 4 0 ． 2 0 ｉ
＼
2
｛
0
0
总误差Ｕ 2 ． 3 丨 2 8 ｇ
注 ： 变异系数ＣＶ值为 6 ． 2 7 ， ／？ 2 ＝ 0 ． 9 5 0  9 ， ／？ 2Ａ ＜ Ｊ
ｊ
＝ 0 ． 9 0 1  8 ； … 麗表示差异紐著⑷請 丨 ） ， ＊ ＊表示 差鮮常贿 （ Ｐ ＜ Ｇ ． Ｇ 1 ） ， ＊￥ 7 0 ， °表示差异藤 （ Ｐ ＜  0 ． 0 5 ） 。
＿＾ 2＾  0 0 Ｘ）
2 ．
1
． 2 方雖立与棘侧
多糖提取率 （ ＜？ ）与 自 变量的二次多项 回归拟合句、 ．狐 2 0 0Ｋ：＃
方程 ： 丨＞酶解时间与液料 比交互作用图
囫
生物工程

粮油食品科技 第 2 3 卷 2 0 1 5 年 第 4 期
2 ． 2 验证优化后工艺
将白花丹参多糖提取的最佳工艺参数微调为 ：
1 3 ． 0
1 ｜复合酶酶解温度 5 2 ｔ ， 酶添加量 8 ．  0 ｍ ｇ／ｍＬ ， 酶解
Ｊ1 2 ． 0
‘‘
时间 为 7 0 ｍ ｉｎ ，液料比为 4 5 ： 1ｍＬ／ｇ ， 为检验响应面
｜
‘
｜、法优化后的工艺可靠性 ，此条件下平行进行 3 组实城 验 ， 白花丹参多糖 、还原糖提取率的平均值分别 为
1 0 ＇ °
1 3 ． 3 6 ％ 、 6 ． 1 7 ％ ，此多糖提取率值与 回归方程理论
预测值 1 3 ．  7 0 ％的相对误差为 2 ．  4 8 ％ 。
6 ． （Ｔ ！ 0 ． 0－． 0 ＂？Ｊ 2 ． 3 理化性质
ｃ？ 酶添加量与液料 比交互作用 图二 …白花丹参多糖易溶于水 ，难裕于 乙醚 、丙酮等有
＾＾ 机溶剂 ； ｐＨ 值等于 6 ． 0 3 ， 表 明其为酸性多糖 ； 碘一
1
4 ． 0 ｜Ｊ
1 3 ． 0
［ 碘化 钾 ｉ式剂 反 应为 阴 性 ， 无 淀 粉存在 ； 在 波 长承1 2 ． 0
5 8 9 ｎｍ处的旋光度值为 － 0 ． 1 0 1 ，计算 比旋光度 为
｜
‘
9 ．ｏ
｜
－
5 0 ． 5
，提示 白花丹参多糖为左旋型 。 粘度特性结
城 7 －°果见图 2 ，样 品多糖溶液粘度随温度 的提高而下降 ，
9 0
8
°
0＾＼ＣＬ＿＾＾ 5＞ｑ5 8 － 0随着剪切速度的增大而下降 ，表现为剪切稀化现象 ，
白花丹参多糖水溶液为假塑性流体 。芍？ｎ＇ 3 0 ． 0 4 6 ． 0
ｄ 酶解时间与酶解温度交互作用图 1 8  ■
！
十 2 0 Ｔ
＿Ｈ￣＾ 5 0 Ｘ
ｉ ＾＼
ｌ｜ｒ＾＾ ． 疆 丨＾ 7 ． 0° 1 5 9 1 3 1 7
剪憾度／ｍ ｉ ， ， ＇
1 0 ． 0 ＜Ｚ ／）ｒ＞ 5 8 ． 0
图 2 温 度与剪切速度对样品溶液粘度特性的影响
2 ． 4 錯颇随 ｉｔ甜 石贼
ｅ ＰＢ添加量与酶解温度效作用 Ｉｆ！结果如图 3￣ 图 4 所 7Ｋ ， 白花丹参多糖浓度 力
8ｍ ｇ／ｍＬ 时 ， 其对 ＤＰＰＨ 自 由 基 的 清 除 率 达 到
8 8 ．  5 1 ％ ，但小于 Ｖｃ 。 白 花丹参多糖清除 ＤＰＰＨ 的
半数抑制浓度 （ ＩＣ 5 0 ） 为 0 ． 9 6 9ｍｇ／ｍＬ ，Ｖｃ 的ＩＣ 5 ｆｌ为
＾ｊ ｑ ｑ ， 0 ． 6 9 7 ｍｇ／ｍＬ。 白 花丹参多糖浓度达到 1 0ｍ ｇ／ｍＬ
1 时 ，对 自 由基 ？ 0 Ｈ 的清除率达到 8 8 ． 5 7 ％ ，細同
＾ 7 ＇ ° 浓度的 Ｖｃ对 ？ 0 Ｈ 的清除率高达 9 8 ． 0 4％ ， 因此与
￣ Ｖ ｅ Ｋ较 ， 白花丹参多糖清除 ？ 0 Ｈ 的能力较 弱 。 白＾花丹参多糖对 自 由 基 ？ 0 Ｈ 的 ＩＣ 5 。为 3 ． 1 1 4 ｍｇ／ｍＬ ，
Ｖｃ 的 1 （：
5 。为 0 ． 4 0 3ｍｇ／ｍＬ。
ｆ ＿添加量与酶解时间交互作用 图
3 结论
图 1 交互作用的响应面图
孟国良等采用正交实验法分别研究了 白 花丹参
＿
粮油食品科技 第 2 3 卷 2 0 1 5 年 第 4 期
 生物工程
营养品 、美容护肤品 、 中药复方的添加剂等 ， 下一步
1 0 0
－
1
Ｄｎｉ ｌ研究将重点探讨白花丹参多糖的化学组成 、相对分
8 0
－□Ｖ
，
； ｒｈＩ
｜ 6 ｏ｜ ｌ ｜子质量分布 、单糖组 成 、波谱分析及其体 内 药理活
｜
0ｆ ｜ ｜ ｜ 性 ’ 为其研发应用提供更多信息 。： ＾1 1ＩＩ｜参考文献 ：
［ 1 ］ 安晓娟 ， 冯琳 ， 宋红平 ， 等 ． 植物多糖的结构分析及药理活性研
° 0 ． 2 5 0 ． 5 1 2 4 8 究进展 ［ Ｊ ］ ． 中国药学杂志 ， 2 0 1 2 ， 4 7 （1 6 ） ：1 2 7 1 － 1 2 7 5 ．
［ 2 ］ 杨君 ． 铁棍山药粗多糖提取工艺 条件研究 ［ Ｊ ］ ． 粮油食品科技 ，
图 3 白 花丹参 多糖对 ＤＰ ＰＨ 清除能力 的测定 2 0 1 4 ， 2 2 （ 6 ） ：  2 0 ＿ 2 2 ．
［ 3 ］ 吕长鑫 ， 李 萌萌 ， 徐晓明 ， 等 ． 响应面分析法优化纤维 素酶提取
1
0 0
－0 样 品浴液了 山 出Ｊ紫苏多糖工艺 ［ Ｊ ］ ． 食品科学 ， 2 0 1 3 ， 3 4 （ 2 ） ： 6 － 1 0 ．Ｄ Ｖ
‘ ：Ｈｒ／ｉ
8 0
－‘ ｌ± ［ 4 ］郑文诚 ， 官波 ， 刘军海 ， 等 ． 响应面分析法优化梔子多糖提取工
碑 6 0 －内［ｉ艺 ［ Ｊ ］ ？ 粮油食品科技 ， 2 0 1 3 ， 2 1 （ 6 ） ：  5 8 － 6 1 ．
ｉ
4 0
．｜：1，Ｓｊ｜［ 5 ］ 游庆红 ， 尹 秀莲 ． 响应面法优化 酶辅助提取 啤酒酵母多糖工 艺
［ Ｊ ］ ． 食 品科技 ， 2 0 1 2 ，  3 7 （ 7 ） ： 1 9 1－ 1 9 5 ．
9 0 
－Ｐ
ｎ ［＊） Ｊ［ 6 ］ 焦鹏 ， 杨娜娜 ， 唐瑜菁 ， 等 ． 白花丹参提取物对脂 多糖损伤内皮
° 0 ． 2 0 ． 4 0 ． 8 1 2 4 8 1 0 祖细胞周期与凋亡 的影响 ［ Ｊ ］ ． 中成药 ， 2 0 1 4 ， 3 6 （ 丨 ） ： 2 2 － 2 5 ．
／  （ｍｇ ／ｍＬ ）［ 7 ］ 赵启韬 ， 王鹏 ， 杨红 ， 等 ． 白花丹参水溶性部位抑制脂多糖诱导
图 4 白花丹参多糖对 自 由基 ？ＯＨ 清除能力 的测定的血管 内皮 细胞 凋亡 ［ Ｊ ］ ． 中 药药 理与 临床 ， 2 0 1 1 ， 2 6 （ 6 ） ：
多糖微波 ［ 1 3 ］ 和超声波 ［ 1 4 ］ 萃取的工艺条件 ， 得率均 5 6 － 5 8 ．
小于 1 0 ％ 。 刘振亮等通过水浴 回流法提取 白 花丹［ 8 ］ 李粉玲 ， 蔡汉权 ， 严赞开 ， 等 ． 酶法提取芦根多糖 的研究 ［ Ｊ ］ ．
参多糖 ， 多糖提取率为 8 ．5 3 6 ％ ； 当 多 糖浓 度 为 1 5 6 － 1 5 9 ．
1ｍｇ／ｍＬ时 ， 白花丹参多糖对亚油酸过氧化抑制率 ［ 9 ］ 纵伟 ， 王会 晓 ’ 闻婉平 ， 等 ． 红率多糖黏度 特性 的研究 ［ 】 ］ ． 食
品科技 ， 2 0 1 1 ， 3 6 （ 2 ）  ： 6 9 － 7 1 ．为 2 3 ． 0 5 ％ ［ 1 5 ］ 。 文献查新 未见酶法及 响应面优 化
［ 1 0 ］ 刘红梅 ， 李栋 ， 樊梦丹 ， 等 ． 灰树花多糖的复合酶 － 微波提取 ，
法针对 白花丹参多糖提取的工ｉ优化 。 本研丸 3 1 过超滤纯化及生物学评价 ［ 〗 ］ ． ＋＾ 1 5 ， 2 0 1 1 ， 3 3 （ 4 ） ： 5 9 4 － 5 9 9 ．
响应面优化得到 白花丹参多糖复合酶提取的最优工［ 1 1 ］ 蒋德旗 ， 黄 利敏 ， 王艳 ， 等 ． 响应面优化纤维素酶法提取桂花
艺参数如下 ： 复合酶添加量 8 ． 0 ｍｇ／ｍ Ｌ 、 酶解时间多糖工艺及其抗氧活 性研究 ［ Ｊ ］ ． 食品 工业科技 ， Ｍｌ 5 ， 3 5
7 0 ｍ ｉｎ 、酶解温度 5 2 Ｔ 、液料 比 4 5 ： 1ｍＬ／ｇ ， 此时多（ 2 ） ：  2 7 1 － 2 7 5 ， 2 8 1 ．
糖提取率实 际实验值为 1 3 ． 3 6％ ， 与 理论预测 值［ 1 2 ］ 郑林龙 ’ 蒋剑平 ’ 许海顺 ’ 等 ． 响应面法优化土获苳多糖的提
…作 4 ＿口 4 、 口 必 ， －ｒ－取工艺及抗 氧化 活性研 究 ［ Ｊ ］ ． 中 华 中 医药杂 志 ’ 2 0 1 4 ’ 2 9
1 3 ．  7 0％ 相对误差小于 5 ％ ， 表明通过响应面法优化
（ 3 ） ：  9 1 8 
－
9 2 2 ．
得到的模型参数准确可靠 ， 且多糖提取率高于超声
［ 1 3 ］ 孟国 良 ． 白花丹参多糖的微波提取工艺研究 ［ Ｊ ］ ． 中 国现代中
波和水浴回流提取法 ；此外 ， 白花丹参多糖对 自 由 基药 ， 2 0 0 9 ． 1 1 （ 2 ） ： 3 9 ＿ 4 0 ．
？ＯＨ 和 ＤＰＰＨ 均有 除效 应 ， 表明具有一 体［ 1 4 ］ 孟国 良 ， 王峰祥 ． 白 花丹参 多糖的超声提取工艺研究 ［ Ｊ ］ ． 现
外抗氧化活性 ，但与 Ｖ ｃ 比较 ，其清除这两种 自 由基代中药研究与实践 ， 2 0 0 9  ，  2 3 （ 1 ） ： 6 7 ＿ 6 8 ．
力 ［ 1 5 ］ 刘振亮 ， 张 昌军 ， 刘克 ， 等 ． 白 花丹参多糖含量测定及其抗氧
研究结果提示 白花丹参多糖在功能食品或药 口口口化性研究ｍ ． 山 东农业大学学报 ： 自然科学版 ’ 2 0 1 3  ， 4 4 （ 3 ） ：
添加剂的开发中具有一定的应用价值 ，如作为保健 3 5 7 ＃
Ｗ＼