全 文 ：收稿日期:2007-02-19
基金项目:国家“863”计划重点资助项目(2002AA2Z3217)
作者简介:邹盛勤(1970-),男,江西奉新人,副教授,主要从事天然药物成分提取与分析研究,(电话)0795-3201280
(电子信箱)zsqycxy@sohu.com;通讯作者,陈 武,男,教授,(电话)0795-3201996。
文章编号:0439-8114(2007)04-0643-02
第46卷第4期
2007年7月
湖北农业科学
HubeiAgriculturalSciences
Vol.46No.4
Jul.,2007
白马骨 (SerissaserissoidesDruce),又名六月
雪,属茜草科白马骨属植物,具有祛风利湿、清热解
毒等功效,主治感冒、黄疸型肝炎、肾盂肾炎、风湿
性关节炎、妇女闭经、白带等症[1]。药理研究表明,白
马骨乙酸乙酯提取物有抑菌作用[2],根水提物和甲
醇提取物对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的表达有抑
制作用[3],水煎剂和酒精煎剂对大鼠蛋白性和甲醛
性关节炎均有抑制作用[4],全草的甲醇提取物具有
良好的抗肿瘤活性[5]。白马骨主要含有胡萝卜苷、牡
荆素、β-谷甾醇、乌索酸、齐墩果酸及其乙酰化物等
成分[6],其三萜酸含量测定未见文献报道。
为进一步开发利用该植物资源,寻找其药理作
用的物质基础,本研究建立反相高效液相色谱法测
定了白马骨中三萜酸类化合物乌索酸和齐墩果酸
的含量。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Waters高效液相色谱仪 (515泵,2996光电二
极管矩阵检测器,7725I进样阀,Empower中文色谱
工作站),RO-MB-10D高纯水机 (杭州永洁达膜分
离设备厂),CP225D分析天平 (德国 Sartorius公
司),FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器
有限公司),202-26A型数显电热恒温干燥箱(上海
阳光实验仪器有限公司),KS-1500超声提取仪器
(宁波科盛仪器厂)。
1.2 材料与试剂
甲醇为色谱纯(色谱纯,上海陆忠试剂厂);水
为高纯水;95%乙醇 (分析纯,江西同盟试剂化工
厂);乌索酸和齐墩果酸对照品(中国药品生物制品
检定所提供);白马骨(市售)。
2 方法与结果
2.1 检测波长的确定
取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液进样,在
190~500nm波长范围进行光谱扫描,其在流动相中
的最大吸收波长均为 203.4nm,但由于流动相在短
波长处有末端吸收,为了减少干扰,提高信噪比,提
取不同波长的色谱图进行比较,选择 210nm为检
测波长信噪比高,峰形好,基线平稳。
2.2 色谱条件
色谱柱为 NUCLEODURC18RP柱 (4.6mm×
250mm,5μm);流动相为甲醇-水(87:13),V/V);流
速0.8mL·min-1;检测波长 210nm;柱温 25°C,进样
量 10μL。乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于
10000,分离度大于1.5。乌索酸和齐墩果酸对照品
混合溶液及白马骨样品溶液的HPLC色谱见图1。
2.3 溶液的制备
2.3.1 对照品混合溶液的配制 称取乌索酸和齐
墩果酸对照品 9.2mg和 5.0mg,置 10mL容量瓶
中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成对照
品混合溶液,备用。
RP-HPLC法测定白马骨中乌索酸和
齐墩果酸的含量
邹盛勤,王 霏,陈 武
(江西省天然药物活性成分研究重点实验室/宜春学院生物工程研究所,江西 宜春 336000)
摘要:建立反相高效液相色谱法并测定了白马骨中乌索酸和齐墩果酸的含量。结果表明,在选定色谱条
件下线性范围良好,乌索酸和齐墩果酸的样品加样回收率分别为 100.6%和 98.9%,RSD为 1.8%和
1.2%,此法快速、准确、可靠。
关键词:白马骨;乌索酸;齐墩果酸;HPLC;测定
中图分类号:S759.82 文献标识码:B
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2007.04.058
2.3.2 样品溶液的配制 取白马骨样品于 60℃恒
温干燥 8h,粉碎,称取 3g,加入 95%乙醇溶液 40
mL,超声提取120min,冷却至室温,过滤,滤渣洗涤
2次,合并滤液于50mL容量瓶中,乙醇定容,摇匀,
经0.45μm微孔滤膜过滤,得样品溶液。
2.4 线性关系试验
分别吸取对照品混合溶液 1.0、2.0、6.0、10.0、
14.0、18.0μL,按选定的色谱条件进样并测定峰面
积。以峰面积(μV·s)对进样量(μg)进行线性回归,
乌索酸(Ursolicacid)和齐墩果酸(Oleanolicacid)
回归方程分别为:yUA=5.37×105x+5.52×104,r=0.99930,
yOLA=6.19×105x+3.47×104,r=0.99938。表明当乌索酸
进样量在0.92~16.56μg,齐墩果酸进样量在0.50～
9.00μg时,线性关系良好。
2.5 仪器精密度试验
精确吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液
10μL进样,重复 5次,测得乌索酸峰面积的相对
标准偏差(RSD)为 0.6%(n=5),齐墩果酸为 0.9%
(n=5),表明仪器精密度良好。
2.6 方法重复性试验
精确称取白马骨样品5份,按上述方法配制样
品溶液,吸取 10μL进样分析,测得乌索酸含量的
RSD为1.3%(n=5),齐墩果酸含量的 RSD为 1.6%
(n=5),表明方法重现性好。
2.7 加样回收率试验
精确称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的白马
骨药材 6份,每组 2份,按高、中、低 3种浓度分别
加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品,制备样品溶
液,进样分析,乌索酸和齐墩果酸平均加样回收率
分别为100.6%和98.9%,RSD分别为1.8%和1.2%。
2.8 样品中乌索酸和齐墩果酸含量测定
精确称取不同批次的白马骨样品 3g,制备样
品溶液。吸取样品溶液10μL,分别进样,平行试验
3次,测定乌索酸和齐墩果酸峰面积,外标法计算平
均含量。测定结果见表1。
3 讨论
1)用 Empower软件系统适应性模块对样品的
乌索酸色谱峰积分,分析纯度,乌索酸峰纯度图中
纯度线位于自动阈值线下方,色谱峰纯度角值小于
阈值,其紫外吸收光谱经归一化后与乌索酸对照品
完全一致,表明乌索酸色谱峰为单一组分吸收峰。
2)测定结果表明,白马骨中乌索酸的含量远高
于齐墩果酸,为五环三萜酸类主要成分。乌索酸具
有抗肝炎、抗肿瘤及抗炎抑菌等广泛的生物学效
应,这与白马骨抗肝炎、抗肿瘤的药理活性相一致。
3)由于乌索酸和齐墩果酸同为三萜酸且为同
分异构体,极性几乎无差别,因而很难用薄层扫描
法分离定量,选用RP-HPLC法对其分离定量,对于
控制质量具有重要意义。此方法准确,快速,灵敏,
重现性好,可用于白马骨中乌索酸和齐墩果酸的含
量测定。
参考文献:
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表1 样品中乌索酸和齐墩果酸的测定结果
样品
1
2
3
4
乌索酸/mg·g-1
1.292
1.451
0.986
1.223
RSD/%
0.7
1.6
1.2
0.7
齐墩果酸/mg·g-1
0.225
0.319
0.201
0.306
RSD/%
1.1
1.0
1.3
1.2
(责任编辑 万景辉)
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