全 文 ： 2006, Vol. 27, No. 11 食品科学 ※分析检验438
高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定
野山楂中两组分的含量
邹盛勤，陈 武
(宜春学院生物工程研究所，江西省天然药物活性成分研究重点实验室，江西 宜春 336000)
摘 要：建立高效液相色谱法测定了野山楂中乌索酸和齐墩果酸的含量，同时采用光电二极管阵列检测器检测两
组分的紫外光谱。色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-水 (87:13，V/V)，流速
0.8ml/min，检测波长210nm，柱温26℃。乌索酸在0.1244～2.488μg范围内线性关系良好(r=0.9996)，平均回收率
为98.1%。齐墩果酸在0.1192～2.384μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为101.2%。方法简便、准
确、重现性好、线性范围宽，适用于测定野山楂中乌索酸和齐墩果酸的含量。
关键词：野山楂；乌索酸；齐墩果酸；光电二极管阵列检测器；高效液相色谱；含量测定
Determination of Two Components in Crataegus cuneata Sieb. et Zucc. by HPLC-PAD
ZOU Sheng-qin，CHEN Wu
(Bioengineering Research Institute, Yichun University, Key Laboratory of Jiangxi Province for Research on Active
Ingredients in Natural Medicines, Yichun 336000, China)
Abstract ：Adetermination method of ursolic acid and oleanolic acid in Crataegus cuneata Sieb. et Zucc. by reversed-phase high
performance liquid chromatography was established and at the time UV spectrum of two components was detected by means
of photodiode array detector(PAD). The chromatographic column, Nucleosil C18 (4.6mm×300m , 5μm), methanol- water (87:
13,V/V) mobile phase with 0.8ml/min flow rate, the detected wavelength (210nm), and the column temperature(26℃) wer
adopted. The calibration curve of ursolic acid was linear under the content of 0.1244～2.488μg, the correlation coefficie was
over 0.9996.The average recovery of ursolic acid was 98.1%. The calibration curve of oleanolic acid was linear under the content
of 0.1192～2.384μg, the correlation coefficient was over 0.9999. The average recovery of oleanolic acid was 101.2%. The method
is simple, accurate, reproducible and has wider linear range. The method can be used to determine ursolic acid and oleanolic acid
in Crataegus cuneata Sieb. et Zucc.
Key words：Crataegus cuneata Sieb.et Zucc；ursolic acid；oleanolic acid；photodiode array detector；HPLC；
content determination
中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)11-0438-03
收稿日期：2006-08-19
基金项目：国家“863”计划重点资助项目(2002AA2Z3217)
作者简介：邹盛勤(1970-)，男，副教授，在读硕士，主要从事天然药物成分提取与分析研究。
野山楂Crataegus cuneata Sieb. et Zucc.为蔷薇科山
楂属植物，又名小叶山楂、山果子。我国山楂属植物
资源丰富，分布甚广。商品山楂为“北山楂”，野
山楂为“南山楂”。2 0 0 5年版《中国药典》只收载
入山里红C. pinnatifida Bge. Var Major N. E. Br.和山楂C.
pinnatifida Bge.两种[1]。南山楂为野生植物的果实，主
要产于江苏、浙江、云南、四川等地。虞人荣[2]认为
野山楂的治疗作用优于正品山楂，有消食积、散瘀血、
驱绦虫、治肉积、痰饮、吞酸等功用[3]，开发利用这
一天然资源具有重要的经济价值和社会效益。对野山楂
中的主要有效成分进行定性和定量测定，可综合评价其
内在质量[4]。本研究建立高效液相色谱法测定了野山楂
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中两种五环三萜酸的含量，为药材的质量控制提供依
据 。
1 仪器与试剂
1.1仪器
高效液相色谱仪(515型泵、2996光电二极管矩阵检
测器(PAD)、柱温箱、Empower中文色谱工作站) 美
国；CP225D分析天平 德国Sartorius公司；TG16-WS
高速离心机 湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司；
UPWS-I-10T高纯水机 杭州永洁达膜分离设备厂。
1.2药品
甲醇(色谱纯) 上海陆忠试剂厂；乙醇(分析纯)95 %
江西同盟试剂厂；高纯水；乌索酸、齐墩果酸对照品
中国药品生物制品检定所。野山楂(市售) 经宜春学院
生物工程研究所天然药物实验室鉴定为野山楂Crataegus
cuneata Sieb.et Zucc.的果实。
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Nucleosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，
带保护柱；流动相：甲醇-水(87:13)； 检测波长：
210nm；流速：0.8ml/min；柱温：26℃；进样量：
10μl。外标法定量分析，乌索酸和齐墩果酸理论塔板
数均大于10000。乌索酸和齐墩果酸对照品色谱见图1。
2.2标准对照品溶液配制
精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品6.22mg、齐墩
果酸对照品5.96mg置10ml容量瓶中，加入适量甲醇超
声溶解，并稀释至刻度线，作为乌索酸和齐墩果酸混
合储备溶液。用移液管精密吸取乌索酸和齐墩果酸混合
储备溶液1至5ml容量瓶中，加甲醇稀释，定容，制
成含乌索酸0.1244μg/μl和齐墩果酸0.1192μg/μl的对照
品混合溶液。
2.3野山楂样品溶液的配制
精密称取约4g烘干的野山楂果实(全果，粉碎过80
目筛)，分别加入10倍量乙醇超声提取60min，过滤，
滤渣用乙醇反复洗涤，合并滤液，定容至50ml容量瓶
中。滤液离心后用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液作
为样品溶液，进样10μl分析。野山楂样品溶液的HPLC
色谱见图2。
2.4线性关系的考察
精密吸取对照品混合液1、5、10、15、20μl分
别进样分析，按上述优化的色谱条件测定峰面积，平
行3次，以峰面积平均积分值(μV·s)为纵坐标，以
对照品进样量(μg)为横坐标进行线性回归，得乌索酸
回归方程为Y=3.15×105X－1.43×104，r=0.9996；齐
墩果酸回归方程为Y=3.56×105X－2.59×104，r=0.9999，
表明当乌索酸进样量在0.1244～2.488μg，齐墩果酸进样
量在0.1192～2.384μg之间时，呈良好线性关系。
2.5精密度实验
精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照品混合液10μl，
平行进样5次，在2.1色谱条件下，测得乌索酸峰面积
相对标准偏差(RSD)为0.9%(n=5)，齐墩果酸峰面积RSD
为0.6%(n=5)。表明进样方法和仪器系统精密度良好。
2.6重现性实验
精密称取同一批野山楂样品5份，按2.3条件制备
样品溶液，吸取10μl进样分析。乌索酸峰面积RSD为
1.5%(n=5)，齐墩果酸峰面积RSD为1.1%(n=5)，方法重
现性良好。
2.7加样回收率实验
精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的野山楂，分
别加入乌索酸和齐墩果酸对照品适量，5份样品同时处
理，制备野山楂加样样品溶液，微孔滤膜(0.45μm)过滤
后，精密吸取10μl进样分析，测定样品中乌索酸和齐
墩果酸的含量，计算回收率。乌索酸和齐墩果酸的平
均加样回收率分别为98.1%和101.2%。
2.8样品含量的测定
取不同批次野山楂样品超声醇提溶液在上述的色谱
条件下进样，平行3次，测定峰面积，按外标法计算
乌索酸和齐墩果酸平均含量，结果见表1。
3 讨 论
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3.1超声提取法具有不需加热，节省时间，提取效率
高等优点。对照实验表明，采用超声提取法，常温下
60min内样品中的乌索酸和齐墩果酸即被提取完全，且
样品 乌索酸含量(%)RSD(%)齐墩果酸含量(%) RSD(%)
1 0.223 0.9 0.019 1.0
2 0.247 1.1 0.025 1.5
3 0.249 0.7 0.022 1.3
表1 野山楂中乌索酸和齐墩果酸的含量(n=5)
Table 1 Results of content determination of ursolic acid and
oleanolic acid in the samples(n=5)
提取率较乙醇回流法为高。
3.2采用PAD扫描分离组分的紫外吸收光谱快速、简
便，可快速确定被检测组分在色谱流动相中的最大吸收
波长。由紫外光谱图可知，乌索酸和齐墩果酸在流动相
中的最大吸收波长均为203.4nm(图3)，但在低波长处，
流动相有较强的末端吸收。本实验选取210nm为检测波
长，可在有效消除背景干扰时保证检测的灵敏度[5]。
3.3齐墩果酸和乌索酸为同分异构体，属五环三萜类
化合物，结构和极性相似，文献[6]报道的方法均难以
使两组分有效地分离，测定的结果为两组分的总含量。
采用HPLC-PAD法，流动相为甲醇-水(87:13)，柱温26
℃时可以较好地将二者分离。方法简单易行，定量准
确，适用于测定野山楂中乌索酸和齐墩果酸的含量。
参考文献：
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信 息
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f 老年性痴呆与β淀粉样肽
两项新研究调查了老年性痴呆和其它神经退化性疾病患者大脑中的被称为“β淀粉样肽”的蛋白块。
其中一项研究给治疗老年性痴呆的药物带来一个警告，另一项显示人的β淀粉样肽能感染转基因小鼠。
作为可能的治疗老年性痴呆药物靶标的β分泌酶一直引人注目，因为该酶是生产β淀粉样肽的关键。但
是，人们一直不知道这个酶在健康大脑中的作用，所以这类药物可能的副作用也一直是个迷。Michael
Willem与他在德国、美国、和比利时的同事报告说，β分泌酶与髓鞘形成有关,髓鞘形成是用脂肪物质髓磷
脂包住从而保护新生神经细胞的过程。该过程通过一个叫neuregulin的蛋白质调解，研究人员发现，β分
泌酶对小鼠的neuregulin有作用。他们还报告说，缺少β分泌酶基因的小鼠的髓鞘形成有类似于neuregulin突
变的小鼠的缺陷。作者指出，药物研究人员应该认真考虑β分泌酶的这一重要作用，以及任何阻碍该酶的
药物的可能副作用。
另一项研究的作者报告说，将来自老年性痴呆患者尸体解剖的β淀粉样肽提取物注射到转基因小鼠的大
脑中，在小鼠上引起了类似老年性痴呆的损害。科学家对这些与老年性痴呆和其它神经退化性疾病有关的
蛋白块如何错误折叠以及粘在一起有不少的了解，新发现为β淀粉样肽如何在活体中集结提供了线索。
Melanie Meyer-Lühmann与她在欧洲和美国的同事报告说，注射到表达人淀粉样肽前导蛋白的转基因小鼠大
脑中的人淀粉样肽提取物，给病灶形成提供了“种子”。这一结果还提示，有不同的β淀粉样肽，它们
的行为不同。淀粉样肽提取物与导致疯牛病的错误折叠的蛋白朊类似，但是迄今为止还没有证据表明β淀
粉样肽真像朊那样有传染性。