全 文 ：白花丹参对小鼠血小板粘附功能及血液流变学的影响
韩纪举 1 ,赵晓民1 ,焦　鹏 1 ,蔡洪信 1 ,吴亚平1, 2 ,夏作理 1＊
(1.泰山医学院基础医学研究所 ,山东泰安 271000;2.荷兰乌德勒兹大学医学中心血液学系)
　　摘要　目的:探讨白花丹参对血小板的粘附及血液流变学的作用。方法:用不同浓度的白花丹参给予小鼠灌
胃 , 以生理盐水做对照 ,采用体外血液灌流的方法 ,在低切变率(300S-1)下观察血小板在胶原蛋白表面上的粘附面
积。利用血液流变仪测定高切 、低切变率下全血粘度。结果:浓度为 0.5、 1.0、2.0 g/ml白花丹参组血小板的粘附
面积分别是 7.48±3.43, 6.83±1.11, 4.39±0.93;生理盐水组 20.66 ±1.10。白花丹参血小板粘附面积与生理盐
水对照组比较均有显著性差异 , P<0.001;且白花丹参与生理盐水对照比较血小板粘附的形态发生的显著较化 ,实
验组血小板粘附较疏松 ,并有较伸展的单个散在;而对照组血小板的粘附聚集成块 , 单个粘附少见。不同浓度白花
丹参组的高切 、低切全血粘度 、红细胞压积均显著于生理盐水对照组 , P<0.01。结论:利用胶原蛋白包被的玻片进
行体外灌流实验 , 具有方便 、直观的研究血小板的体外粘附的优点。白花丹参具有明显的抗血液凝集作用 , 是良好
的抗凝血的药材。
关键词　白花丹参;血小板;血液灌流;胶原蛋白;血液流变学
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)06-0699-03
作者简介:韩纪举(1963-),男(回族),高级实验师 ,长期从事血液学实验研究。 Tel:0538-6225275-8500, E-mail:jjhan@tsmc.edu.cn。
　　白花丹参(SalviamiltiorhizaBungef.albaC.
Y.Wu)属唇型科植物 ,是唇型科植物丹参的变型 ,
为山东特有珍奇物种 。多年来 ,人们将白花丹参广
泛应用于临床 ,如防治心脑缺血 、高血压 、高血糖 、高
血脂及许多妇科疾病 。生理情况下 ,血小板与机体
的凝血和止血机能密切相关。而在病理状态下 ,血
小板参与冠状动脉粥样硬化及血栓性疾病的发生和
发展。本研究采用体外血液灌流方法 ,对白花丹参
在血小板粘附方面的作用及机理进行探讨 ,结果如
下 。
1 　材料与方法
1.1 　材料
1.1.1　试剂与药品:鼠胶原蛋白 (colagen购自
sigama公司);肝素钠(heparinsodium, HS天津市生
物化学制药厂);牛血清白蛋白 (bovineserumalbu-
min, BSA,上海伯奥生物科技有限公司);乙醇和甲
醇均为分析纯。白花丹参产自泰山。昆明系雄性小
鼠 80只 ,体重 25±2克 ,购自山东米歇尔生物制品
有限公司。
1.1.2　设备:体外灌流池由荷兰乌特勒兹大学血
栓与止血实验室提供;恒温水浴箱(宁波新芝生物
科技股份有限公司);BT-100B数显恒流泵(上海沪
西分析仪器厂);循环水式多用真空泵(郑州长城科
工贸有限公司 SHB-Ⅲ);BX51型显微镜(OLYMPUS
BX51)及 Image-ProPlus-Versin4.0 forwindowsTM图
像处理系统;喷雾器 (Badgermodel100;gadger
brush, Franklinpark, IL)。使用 Lowshear30流变仪
测定全血粘度 。
1.2　方法
1.2.1 　白花丹参浸出液的制备:取自然干燥的白
花丹参根 200g,剪切成碎块 ,以温水浸泡过夜。文
火煎 2h,过滤去渣 ,取滤出液蒸馏至 100ml,使生药
浓度为 2.0 g/ml, 4℃冰箱储存备用。
1.2.2 　实验分组:实验组:0.5 g/ml, 1.0 g/ml, 2.0
g/ml白花丹参;对照组:以生理盐水替代白花丹参
灌胃 , 每组 10只小鼠 , 0.5 ml/只 /天 ,连续灌胃 7
天。
1.2.3 　防凝血制备:顺畅抽取实验组及对照组小
鼠心脏血 2 ml,立即注入预先加有肝素的试管中充
分混匀 ,使肝素在血液中的浓度为 10U/ml。
1.2.4 　胶原蛋白表面玻片的制备:用 50 mmol/L
的冰乙酸充分溶解鼠胶原蛋白粉剂 , 使浓度为 1
mg/ml,用喷雾器将其均匀喷洒在洁净的 18 mm×
18 mm的盖玻片上 , 50 μl/片 ,晾干后用 1%的 BSA/
HEPES封闭 10 min,备用 。
1.2.5 　血液灌注实验 〔1〕:模拟体内血管 ,设计体积
固定的灌流池 。将包被有某种黏附性蛋白(鼠胶原
蛋白)的盖玻片覆盖在灌注池上面 ,灌注池与上方
的盖玻片围成一个密封管腔 ,在恒定温度下(37℃)
使血液在一定切应力作用下通过管腔 ,观察血小板
在盖玻片上粘附与凝集的面积 。本实验切应力
300 /s,血液流速为 3 ml/h。实验用的防凝血液标本
置于 37℃预温 5min后 ,由外接管道单向注入灌注
池 ,灌注时间 5min。每组实验至少重复 3次 。灌注
·699·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 6期 2007年 6月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.06.033
完毕 ,取下盖玻片用 HEPES冲洗后 ,即刻用 0.5%
戊二醛 /HEPES固定 ,室温 10 min,或 4℃过夜 , PBS
漂洗玻片 ,甲醇脱水 /固定 5 min, May-Grǜnwald-Gi-
emsa染色;以水漂洗干净 ,凉干 ,常规封片;用 IX51
型显微镜观察血小板在盖玻片胶原膜表面的附着情
况 ,高倍镜下(100×)采图 ,每张盖玻片连续采图 10
幅 ,用 Image-Pro Plus-Version4.0 forwindowsTM图
像处理系统测量视野内血小板的粘附面积所占百分
比 ,以评价血小板粘附功能 。
1.2.6　血液流变学指标检测:将三个浓度白花丹
参组及对照组小鼠于第 7天 ,心脏取血 ,四组小鼠各
采血 1.5 ml左右 ,抗凝后测量其血液流变学指标 。
全血粘度使用 Lowshear30流变仪测定 ,血细胞压积
(Hct)使用微量高速离心机测量 , 全血高切粘度
(HBV)和全血切粘度 (LBV)分别选择剪切率
118.2S-1和 0.87S-1测量分析。
1.2.7　统计学处理:采用均数 ±标准差 ,实验组与
对照组比较 ,采用单因素方差分析。应用 Graphpad
Prism4.0和 GraphpadInstatv3.0统计软件处理 。
2 　结果
2.1 　血小板粘附面积比较　利用浓度为 0.5 g/ml
(白花丹参 Ⅰ ), 1.0 g/ml(白花丹参 Ⅱ)、2.0 g/ml
(白花丹参Ⅲ)泰山白花丹参根的浸出液 ,生理盐水
分别给小鼠灌胃 , 0.5 ml/天 /只 ,连续 7天。取心脏
血 ,以肝素抗凝 ,用鼠胶原蛋白包被的盖玻片覆盖灌
流池后 ,进行血液灌流 ,对盖玻片进行染色后 ,观察
并计算血小板的粘附面积 ,结果见表 1。
　表 1　　　不同浓度白花丹参作用后小鼠血小板
粘附面积的比较( x±s, n=10)
组别 药物浓度(g/ml) 血小板面积
白花丹参Ⅰ 0.5 7.48±3.43＊★
白花丹参Ⅱ 1.0 6.83±1.11＊
白花丹参Ⅲ 2.0 4.39±0.93＊
生理盐水组 0 20.66±1.10
　　注:与生理盐水组比较 , ＊P<0.001;与白花丹参Ⅲ比较 , ★ P<
0.01。
　表 2　　　　不同浓度白花丹参作用后小鼠
血液流变学的比较( x±s, n=10)
组别 红细胞压积(HCT) 全血高切粘度(HBV) 全血低切粘度(LBV)
白花丹参Ⅰ 0.39±0.03＊＊ 4.87±0.45＊＊＊ 22.72±1.19＊
白花丹参Ⅱ 0.35±0.03＊＊# 4.32±0.28＊＊＊## 19.93±1.32＊#
白花丹参Ⅲ 0.34±0.03＊＊# 3.97±0.33＊＊＊## 19.02±1.56＊#
生理盐水组 0.45±0.02 5.57±0.28 26.27±3.06
　　注:与生理盐水组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001;
与白花丹参Ⅰ组比较 , #P<0.05, ##P<0.01, ###P<0.001
2.2　不同浓度白花丹参作用后血小板在体外灌流
时的粘附情况　不同浓度的白花丹参血小板的形态
呈较疏松的粘附 ,并有较舒展的单个散在血小板粘
附与玻片上。生理盐水对照组血小板粘附聚集成块
状 ,单个血小板粘附少见 。
2.3　不同浓度白花丹参作用后小鼠血液流变学的
变化　见表 2。不同浓度的白花丹参对于小鼠的血
液粘度均具有明显的作用 ,三种浓度的白花丹参
HCT, HBV, LBV与生理盐水对照组比较均有显著性
差异 (P<0.01, 0.001), 白花丹参 Ⅱ 、Ⅲ与 Ⅰ间
HCT, HBV, LBV亦明显的差异(P<0.05, 0.001)。
3　讨论
丹参(白花丹参)的化学成分主要可分为水溶
性成分和脂溶性成分两大部分 。 20世纪 80年代初
我国药研究人员对水溶性成分进行了研究 ,证明丹
参水溶性有效成分主要是酚酸类化合物 ,命名为丹
酚酸如丹酚酸 A、丹酚酸 B等 〔2〕。因白花丹参水提
物富含丹酚酸 ,用于临床多年 ,证实具有良好活血化
瘀作用。采用富含丹酚酸 B的丹参治疗血管成形
术模型的家兔 ,发现其可导致新内膜细胞凋亡 ,进而
阻止新内膜的增厚 ,来发挥防治冠状动脉粥样硬化
的作用〔3〕。复方丹参对肾上腺素血瘀模型大鼠血
小板粘聚性的增高具有明显抑制作用 〔4〕。
血小板是有一种具有粘附 、聚集 、释放等多项功
能的细胞 。血小板的粘附 、聚集是引起血栓形成的
主要原因 。血小板粘附于表面而被激活 , 释放
ADP、凝血酶 、血栓烷 A2(TXA2)等物质。这些释放
出来的物质进而刺激周围的血小板 ,使之激活。被
激活的血小板具有与细胞粘附性蛋白的结合活性 ,
在其存在下 ,可形成牢固的粘附和聚集块 ,导致血栓
形成 〔5〕。我们利用国内首创的 (最新引进的)体外
血液灌流系统 ,模拟体内血液在血管内的流动 ,能够
非常直观的观测到在包被有胶原蛋白盖玻片上的血
小板的流动及粘附情况 。借助该方法观察不同浓度
的白花丹参浸出液给予小鼠灌胃后对小鼠血液在体
外灌流时血小板粘附功能的变化 。结果显示不同浓
度的白花丹参实验组血小板的粘附面积均显著低于
生理盐水对照组 , P<0.001;2.0g/ml白花丹参组与
浓度 0.5g/ml白花丹参组对于血小板的粘附抑制
作用具有显著的差异性 , P<0.01。提示用白花丹参
浸提液具有抑制血小板粘附的作用 ,且随着白花丹
参浓度的增加 ,抑制血小板粘附的作用显著加强。
血小板的形态有明显的变化 ,生理盐水对照组血小
板粘附聚集成块 ,单个血小板粘附少见;白花丹参组
血小板呈较疏松的粘附 ,并有较伸展的单个散在血
·700· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 6期 2007年 6月
小板粘附于玻片上。推测血小板形态的变化与白花
丹参等药物作用有关 。
血小板聚集性和粘附性机理是非常复杂的过
程 ,体内有环核苷酸系统 、前列腺系统和钙-钙调素
三个系统相互作用 ,共同调节血小板的功能 。研究
证实 ,血小板膜上含有许多糖蛋白 ,如 GP(Ⅰ 、Ⅱ 、
Ⅲ 、Ⅳ、Ⅴ)等 。在一定情况下它们均通过与不同的
配基结合 ,其中整合素(B1)GPⅠa/Ⅱa的配基是胶
原蛋白 ,使血小板粘附聚集 ,进而形成血栓 。本研究
采用胶原蛋白包被 ,观察体外血小板的粘附情况 ,即
GPⅠa/Ⅱa与胶原蛋白的结合情况。推测血小板通
过 GPⅠ a/Ⅱ a与表面的胶原蛋白结合 ,进而激活血
小板 ,释放 ADP、TXA2、Fbg、TSP、vWF等 ,从而进一
步使其它血小板激活 。当血小板处于活化状态时因
其表面受体构象发生变化 ,从而使其与配基结合能
力或部位发生改变。白花丹参水提物及复方丹参抑
制血小板的粘附聚集的可能原因是:(1)导致血小
板表面受体变化;(2)促进血小板呀内皮细胞释放
多种抗凝血因子 。秦彩玲等报告 ,复方丹参全方对
正常家兔血小板粘聚性有明显抑制作用 ,可以明显
升高正常家兔血浆中 PGI2的水平 〔6〕。对于血小板
受体及抗凝血因子的变化情况 ,有待进一步实验证
实 。
本研究通过白花丹参对小鼠作用后 ,无论高切
变率 、低切变率时小鼠的全血粘度均比对照组显著
降低 ,白花丹参各实验组的红细胞压积亦与对照组
具有显著的差异性 , P<0.01。不同浓度的白花丹参
组间也有差异 , 1.0g/L、2.0g/L组各项指标的显著
低于 0.5 g/L组 ,表明白花丹参对于小鼠的血液流
变学作用明显。血液流变学可反映由于血液成分变
化而带来的血液流动性 、凝滞性和血液粘度的变化 。
当血液粘度变大时 ,血液流动性就变差 ,也就是最容
易发生心脑血管系统疾病 。全血粘度是反映血液粘
性的指标之一 ,低切变率下的全血粘度能反映血细
胞的聚集情况 ,其数值愈大 ,则聚集性愈强 ,血细胞
愈易形成叠连;高切变率下的全血粘度可反映血细
胞的可塑变形性 ,其数值越大 ,则变形性越差 ,可在
微循环中造成一系列的损害 。
本研究利用胶原蛋白包被的玻片进行体外灌流
实验 ,具有方便 ,直观的研究血小板的体外粘附的优
点。实验结果表明泰山白花丹参具有明显的抗血小
板的粘附凝集作用 ,并且具有降低血液粘度的功能 ,
是一种良好的抗血液凝集的药材 。
参 考 文 献
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·701·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 6期 2007年 6月