全 文 ：·实验研究·
半边旗提取物 5F － Na盐溶液对
三种肝细胞癌细胞株的增殖抑制作用
吴科锋1，刘 义1，吕应年1，George G． Chen2，梁念慈3
(1．广东天然药物研究与开发实验室，广东 湛江 524023;2．香港中文大学外科学系，香港;
3．广东医学院生物化学与分子生物学研究所研究所，广东 湛江 524023)
摘 要:目的:评估半边旗提取物 5F － Na盐溶液对肝细胞癌细胞株的增殖抑制作用。方法:采用 MTT法，观察不同
浓度的半边旗提取物物 5F － Na盐溶液分别作 24、48、72h对三种不同类型肝细胞癌细胞株(HepG2，Hep3B，BEL － 7402)
生长增殖的影响。结果:不同浓度的半边旗提取物 5F － Na盐溶液分别对 3 种肝癌细胞作用 24、48、72 h后，所有的肝癌
细胞株生长增殖均受到不同程度的抑制(P ＜ 0. 05) ，5F － Na盐溶液对 HepG2，Hep3B，BEL － 7402 作用 72h后的 IC50分别
是 20. 67，16. 74，16. 09 mg /L。结论:半边旗提取物 5F － Na盐溶液能有效抑制肝细胞癌细胞株的体外增殖。
关键词:半边旗提取物 5F － Na盐溶液;肝细胞癌
中图分类号:R285. 1 文献标识码:A 文章编号:1000 － 1719(2010)09 － 1814 － 02
Inhibition of Proliferation by 5F －Na Solutions from
Pteris Semipinnata L in Hepatocellular Carcinoma Cell Lines
WU Ke-feng1，LIU Yi1，LV Ying-nian1，George G． Chen2，LIANG Nian － ci3
(1． Guangdong Key Lab for Research and Development of Natural Drugs，Zhanjiang 524023，Guangdong，China;
2． Department of Surgey，The Chinese University of Hong Kong，Shatin，NT，HK，China;
3． Institute of Biochemistry and Molecular Biology，Guangdong Medical College，Zhanjiang 524023，Guangdong，China)
Abstract:Objective:To evaluate the inhibitory effect of Psl5F － Na solutions on proliferation of hepatocellular carcinoma cell
lines in vitro． Methods:After treatment of hepatocellular carcinoma(HCC)cell lines(HepG2，Hep3B，BEL － 7402)with various
concentration Psl5F － Na solutions for 24，48，and 72 hours，the proliferation capacity of cells was observed by MTT assay． Results:
After treated with Psl5F － Na solutions，the proliferation of these hepatocellular carcinoma cell lines were inhibited differently(P
＜ 0. 05)． The IC50 for 72h treatment of HepG2，Hep3B，BEL － 7402 were 20． 67，16． 74，16． 09mg /L respectively． Conclusion:
Psl5F － Na solutions could inhibit the proliferation of hepatocellular carcinoma cell lines in vitro effectively．
Key words:Psl5F － Na solutions;hepatocellular carcinoma(HCC)
收稿日期:2010 － 01 － 07
基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870900) ;香港科技创新署粤
港合作计划项目(GHP /022 /06)
作者简介:吴科锋(1980 －) ，男，助理研究员，硕士，研究方向:抗肿瘤生
化药理研究。
民间草药半边旗(Pteris Semipinnata L)系凤尾蕨
科植物，始载于《岭南采药录》，为南方民间常用于治
疗菌痢、肝炎、肠炎、结膜炎等生药之一。本课题组经
研究发现半边旗的水提物和醇提物均能有效抑制肿瘤
细胞的生长，对小鼠移植瘤有明显抑制作用［1 － 2］，通过
进一步分离纯化出二萜类化合物 5F(化学结构为 11α
－羟基 － 15 －氧 － 16 －烯 －对映贝壳杉烷 － 19 －酸，
简称 PsL5F) ，发现其对多种癌细胞均有不同程度杀伤
作用［3］。但由于该化合物难溶于水，进行应用研究较
为困难，因此评估其 Na 盐溶液对严重危害人类生命
健康肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC，简称肝
癌)的杀伤作用有更现实的意义。
1 材料与方法
1. 1 材料 HepG2，Hep3B，BEL － 7402(实验室保
存) ;半边旗提取物物 5F － Na 盐溶液(实验室制备) ;
RPMI － 1640 培养基(Gibco) ;小牛血清(杭州四季青
工程有限公司) ;酶标仪(Bio － rad) ;MTT(sigma)。
1. 2 方法 MTT 法测定半边旗提取物 5F － Na 盐溶
液分别作用 24、48、72h 对三种 HCC 细胞株 HepG2，
Hep3B，BEL －7402 增殖的影响:分别选取对数生长期
HepG2，Hep3B，BEL － 7402 细胞，经胰酶消化、台盼蓝
染色后在血细胞计数板上计数，确保活细胞在 97%以
上。调整细胞浓度以 3000 个 /孔(90μL /孔)加到 96
孔培养板中。将培养板放入 37℃、5% CO2 孵箱中培
养。待细胞贴壁后取出培养板，加入测试的药物，用药
组加入 10μL不同浓度药物，使其生药的终浓度分别
为 5、10、20、40、80mg /L，每个浓度设 4 个平行孔，同时
设置空白对照组、溶剂对照组和调零孔。培养板放回
培养箱中分别继续培养 24、48、72h，取出培养板，每孔
加入 20μLMTT(5g /L) ，孵育 4h。吸出上清液，加入
150μLDMSO，在平板摇床振摇 10min，使甲臜完全溶
解。于酶标仪上以测定波长为 570nm，参考波长为
490nm，测定其吸光度 A 值。实验重复 3 次。计算细
胞增殖抑制率。
·4181· 辽宁中医杂志 2010 年第 37 卷第 9 期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2010.09.186.wukf.071
1. 3 统计学分析 实验数据以(珋x ± s)表示，采用
SPSS 13. 0 统计软件包 OneWayAnova 进行统计学处
理。P ＜ 0. 05 表示差异有统计学意义。
2 结 果
2. 1 半边旗提取物 5F － Na 盐溶液对 BEL － 7402 增
殖的抑制作用 不同浓度半边旗提取物 5F － Na 盐溶
液(5 ～ 80mg /L)分别作用于 BEL － 7402 细胞后 24、
48、72h，抑制率呈明显的时间 － 剂量依赖性(P ＜
0. 05)。其作用 72h后 IC50为 20. 67mg /L，见图 1。
图 1 半边旗提取物 5F － Na盐溶液对 BEL － 7402 增殖的抑制作用
2. 2 半边旗提取物 5F － Na 盐溶液对 HepG2 增殖的
抑制作用 不同浓度半边旗提取物 5F － Na 盐溶液
(5 ～ 80mg /L)分别作用于 HepG2 细胞后 24、48、72h，
抑制率呈明显的时间 －剂量依赖性(P ＜ 0. 05)。其作
用 72h后 IC50为 16. 74mg /L，见图 2。
图 2 半边旗提取物 5F － Na盐溶液对 HepG － 2 增殖的抑制作用
2. 3 半边旗提取物 5F － Na 盐溶液对 Hep3B 增殖的
抑制作用 不同浓度半边旗提取物 5F － Na 盐溶液
(5 ～ 80mg /L)分别作用于 Hep － 3B 细胞后 24、48、
72h，抑制率呈明显的时间 －剂量依赖性(P ＜ 0. 05)。
其作用 72h后 IC50为 16. 09mg /L，见图 3。
图 3 半边旗提取物 5F － Na盐溶液对 Hep3B增殖的抑制作用
3 讨 论
目前对于肝癌的发病机理的认知主要三种因素密
切相关:(1)病毒性肝炎。亚洲肝癌患者 70% ～ 90%
为 HBV 携带者，而国内肝癌患者中 HBV 携带者超过
85%。(2)肝硬化。70% ～ 85%的肝癌发生于在肝硬
化时肝细胞代偿增生的基础上。(3)化学致癌剂。特
别是由黄曲霉素引起的肝癌，黄曲霉素 B1(AFB1)能
导致肝细胞损害，肝细胞修复、增生过程中可能发生癌
变。尽管肝癌发生发展的分子机制仍不明确，但近年
研究发现 HBV病毒基因组中的 X 区基因是肝细胞癌
变的主要因素之一［4］。同时多个基因或多条信号传导
通路的失调，如 p53、TGF － β、VEGF、EGFR /HER － 1、
MAPK /ERK、PI3K /AKT、WNT、NF － kappaB 等［5 － 7］，都
直接或间接促使肝癌的形成和发展。
从我们已发现 Psl5F 的抗肿瘤机制途径来看，
Psl5F能抑制转录因子 NF － kappaB 活性，从而抑制
Bcl － 2 和 Bcl － xL 的表达，促进 iNOS 的表达有关，同
时还发现下调 NF － kappaB 及血管内皮生长因子
(VEGF)的表达，能抑制高转移卵巢癌细胞的侵袭转
移能力［8 － 10］。这些都提示了对能增加 Psl5F 水溶性的
Na盐溶液对肝细胞癌(HCC)也可能有良好的疗效，通
过本实验发现当 5F － Na 盐溶液的作用浓度达到一定
值时，其抗肿瘤活性显著增强，但阈值浓度的大小可能
与细胞的类型密切相关，需要进一步的实验证实。
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