全 文 ：第 22 卷第 2 期
2010 年 5 月
宁德师专学报(自然科学版)
Journal of Ningde Teachers College （Natural Science)
Vol.22 No.2
May 2010
收稿日期： 2010-05-10
作者简介： 王皓翔（1985-），男，硕士研究生，现从事分子生物学与细胞信号转导研究.
E-mail： haoxiangwang@163.com
尖叶木犀榄叶片的石蜡切片制作
王皓翔
（华南师范大学生命科学学院，广东省植物发育生物工程重点实验室, 广东 广州 510631）
摘要：对尖叶木犀榄叶片进行取材、固定、染色、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片、脱蜡、封片等一系列过
程的研究，掌握了尖叶木犀榄石蜡切片制作方法，为进一步从解剖学上观察和研究尖叶木犀榄的叶片细胞结
构和组成提供了基础.
关键词：尖叶木犀榄;叶片;石蜡切片
中图分类号： Q-336 文献标码：A 文章编号： 1004－2911（2010）02－0183－03
尖叶木犀榄（Olea cuspidata Wall.），木犀科木犀榄属，自然状态下为常绿小乔木，高 3～10m；小枝近
四角形，叶对生，革质，狭披针形至矩圆形，长 4～8.5cm，全缘，叶面光亮；圆锥花序腋生，花两性；核果椭
圆状或近球状，长 6～8mm，于 11 月份开始成熟，暗褐色.据资料记载，该树种原分布于云南省及四川西
部，近几年来因其茵绿亮丽、耐修可塑，成为优秀的绿化树种[1].
石蜡切片法是用石蜡包埋组织块，再进行切片和染色的制片方法[2]，通过研究尖叶木犀榄叶片石蜡
切片制作过程，获得永久装片，以便从解剖学上显微观察和探索叶片的细胞结构与组成.
1 材料和方法
1.1 材料
尖叶木犀榄取自华南师范大学校园内，从当天采集的新鲜尖叶木犀榄中选取绿色完整的材料，不同
熔点石蜡和蜂蜡，皆为广东省植物发育生物工程重点实验室自存.
1.2 方法
1.2.1 载玻片、盖玻片的处理 载玻片和盖玻片在一当量的盐酸中浸泡一周，再在 70％乙醇中浸泡 24h，
接着在蒸馏水中浸泡 48h，期间更换 2～3 次蒸馏水，将杂质充分洗净.用干净稠布擦拭干净，擦片时手指
不可接触玻片的两个平面，以免造成污染.
1.2.2 叶片的取材与固定 尖叶木犀榄叶片洗净，在载玻片上切成 0.5cm3包含维管束的小块，立即投入盛有
固定液的小玻璃瓶中，用针筒抽真空，再在固定液中固定 3d，活水冲洗一夜，保存于 70%酒精中待用.
1.2.3 叶片的染色 采用番红整体染色法，于 50％酒精配制的 1％番红染液中染色 5h.
1.2.4 脱水 采用梯度浓度法脱水.酒精配制成 30％、50％、70％、85％、95％的体积分数梯度，最后到无水乙
醇.材料从低体积分数酒精开始，依次而上，每一级停留约 1h.为保证脱水干净，脱水时更换 100％酒精 2次.
1.2.5 透明 将材料在 2/3 纯酒精＋1/3 生物制片透明剂、1/2 纯酒精＋1/2 生物制片透明剂、 纯生物制片
透明剂中依次停留 1h.
1.2.6 浸蜡 将材料倒入小瓷碗内，取等量低熔点石蜡（52～54℃）用解剖刀切成小块，放入小瓷碗内，放
在 40℃恒温箱中，经过 10h 渗透，再放入 52℃恒温箱中 2h.然后倒去石蜡，换为 54～56℃的石蜡，2h 后倒
去石蜡，再换新的同样熔点的石蜡.2h后，倒去石蜡，换为 56～58℃的石蜡，再经 2h即可.
1.2.7 包埋 采用纸盒包埋法.折好适宜大小的盛蜡的纸盒，然后将已熔化的 56～58℃石蜡（含有 3～5％
蜂蜡）倒入纸盒中，用温热的镊子迅速将材料移至石蜡中，同时按所需切面排列整齐.把纸盒平放入冷水
宁德师专学报（自然科学版） 2010 年 5 月
中，使石蜡迅速凝固.
1.2.8 切片 将做好的蜡块用刀片修成正六面体，材料周围保留 2mm 左右的石蜡，接着把小蜡块粘到
台木上.粘贴时先把小蜡块的一端涂上一层熔化的蜡，然后把小蜡块粘到小台木上，再用解剖刀取少量
的熔蜡封于小蜡块基部周围.将粘好蜡块的台木夹在手摇旋转切片机的夹物部位，把切片刀装在切片机
的夹刀部位，调整台木，使材料的切面与刀口平行.切取厚度为 10 μm的蜡带，放入蜡带盘中.
1.2.9 展片 载玻片中央滴少许蛋清，涂抹均匀，在上面滴少许蒸馏水.用解剖刀把蜡带挑起，粗糙面朝
上放在水滴中，在 35～40℃展片台上展片，干燥.
1.2.10 脱蜡与封片 染色缸中倒入生物制片透明剂，将载玻片放入染色缸中，2h 后取出.用棉棍将少量
加拿大树胶滴在材料上，并加盖玻片，制成永久装片.
2 结果与讨论
2.1 关于叶片的取材、固定与染色
叶片应尽量就地取材，动作要快，避免空气进入组织中.尖叶木犀榄叶片的固定使用 FAA 固定液，
组成为 70%酒精 90mL＋冰醋酸 5mL＋甲醇 5mL.FAA 能使组织和细胞保持原来的形态与结构特点，接近
生活时的状态，且固定结束时固定液的洗除较方便，酸性物质不会残留在材料中使细胞壁破碎.在固定
时，需要对材料进行抽真空，使固定液能迅速渗入叶片内.脱水将材料中的水分除去，一方面为了更好的
包埋在石蜡中，另一方面可以使材料变硬，更稳定而便于切片.常规的染色方法是在脱蜡后进行染色，需
要逐级复水，然后再逐级脱水，步骤繁多，且经脱蜡后的切片很薄且透明，不易操作.因此为了使材料清
晰可见，方便观察，采用整体染色法[3].
2.2 关于脱水、透明、浸蜡与包埋
生物制片透明剂与水互不相溶，因此必须通过酒精脱去材料中的水分.透明的目的是增强材料的折
光系数便于观察，同时可以将材料中的酒精置换出来，使石蜡更容易进入组织.石蜡中加入一定量的蜂
蜡，可提高蜡块的韧度，切片时手感好，易连片.浸蜡通常在恒温箱中进行，恒温箱温度应严格控制，温度
过高会引起材料变硬变脆而收缩，造成切片质量不高甚至失败.如果温度过低，石蜡不能够完全熔化，难
以均匀地渗透到材料内部，造成材料与石蜡脱离，蜡块中出现气泡、裂隙，切片时维管束细胞容易碎裂.
包埋使用纸盒包埋法，包埋时要控制好溶解的石蜡的温度，若石蜡温度过高，纸盒放入冰水中冷却时，
外层石蜡凝固收缩过快，则内层石蜡与材料接触面易形成小空隙，且过高的温度易损坏材料.溶解的石
蜡倒入纸盒后，表面较快冷却形成薄膜，需用加热的镊子尖部熔去薄膜后放入材料.否则，薄膜易包在材
料外围，材料与石蜡接触面易形成裂层，影响随后的切片效果.
2.3 关于叶片的切片、展片、脱蜡与封片
切取蜡片时，除了确保切片刀锋利外，材料切削面与切片刀内侧面之间的切削角度十分关键，同时
注意组织块切削面保持垂直.当切片上卷且不能形成连续蜡带时，可用棉球蘸取少量生物制片透明剂擦
去刀口处的碎蜡，以保切片刀口干净亮洁.待生物制片透明剂挥发后，以 40-60 次/min 连续旋转转轮，切
出互相衔接的连续蜡片带，用毛笔托住蜡带，放入蜡带盘中展平.蜡片的厚度需要适宜，以使细胞和组织
完整，染色观察清晰，无皱折，又不至于太厚而影响观察效果.展片是使切片时皱缩、卷曲的蜡带受热展
开，温度不宜过高，以免材料变形.脱蜡是除去切片内石蜡的过程，当载玻片从生物制片透明剂中取出
时，立即在切片的中央滴一滴树胶封片，盖上洁净盖玻片，切不可待生物制片透明剂挥发后再进行滴树
胶封片，否则制成的切片模糊，同时封片时不应留有气泡.制成的永久装片即可观察尖叶木犀榄叶片纵
切面的维管束与薄壁细胞的结构、组成、排列及着色情况.此外，在包埋和展片过程中，需特别小心避免
损伤和缺失材料的上表皮，因为包埋过程中用镊子调整材料位置时，如镊子的温度过高，极易导致上表
皮细胞破碎；展片过程中蛋清粘贴剂涂抹不均匀，也容易导致上表皮脱落.
·184·
参考文献：
[1] 柯存祥,马庆奎,王峻鹏.木犀科几种植物的木材解剖学研究[J]. 福建师大福清分校学报,2007(2):84-87.
[2] 杨捷频. 常规石蜡切片方法的改良[J]. 生物学杂志,2006,23(1):45-46.
[3] 叶祖云,阮少江. 绿竹笋石蜡切片制作[J]. 宁德师专学报(自然科学版),2005,17(2):140-141.
Manufacture of paraffin section on Olea cuspidata Wall leaf
WANG Hao-xiang
（Guangdong Provincial Key Laboratory of Biotechnology for Plant Development, College of Life Science, South China Normal
University, Guangzhou Guangdong 510631，China）
Abstract: Based on the series of studies of the material selection, fixation, dye, dehydration, saturated
paraffin, bundle, section of Olea cuspidata Wall leaf, the paper presents the method of making the paraffin
section on the Olea cuspidata Wall leaf and provides the basis for further micro-observation anatomy of Olea
cuspidata Wall leaf.
Key words: olea cuspidata Wall; leaf; paraffin section
王皓翔： 尖叶木犀榄叶片的石蜡切片制作第 2 期 ·185·