全 文 ：《现代食品科技》 Modern Food Science and Technology Vol.21 No.2(总 84)
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中图分类号：R284.2；文献标识码：A；文章篇号:1007-2764(2005)02-0153-056
溪黄草不同溶剂提取物中总二萜含量的测定
邓韵，蔡妙颜，田野，胡松青，李琳
（华南理工大学轻工与食品学院, 广东广州 510640 ）
摘要：对映-贝壳杉烷型二萜化合物是溪黄草中具有抗癌活性的主要功效成分。本文提出了测定溪黄草不同溶剂提取物总二萜含
量的一种简单可行的方法，即紫外-分光光度法。该法以冬凌草甲素为标准品，检测波长为 237nm，线性范围 5.05-50.50 mg/l，线性关
系良好(r = 0.999)，相对标准偏差<2%。该法操作简便稳定，能够准确测定溪黄草原料药和制剂中总二萜含量。实验结果显示，乙醇
提取率最高，达 2.07%。
关键词：溪黄草；二萜；紫外-分光光度法；含量测定
Determination of Diterpenoids in Different Solvent Extraction from
Rabdosia serra(Maxim.)Hara
Deng Yun, Cai Miao-yan, Tian Ye, Hu Song-qing, Li Lin
(College of Light Industry and Food Technology , South China University of Technology, Guangzhou 510640,China)
Abstract: Ent-kaurane diterpenoids are the main efficacious anti-tumor ingredients in Rabdosia serra (Maxim.)Hara. In this paper, we
establish a simple and reliable method to determine the content of diterpenoids in different solvent extraction from Rabdosia serra
(Maxim.)Hara by UV-spectrophotometry. Determining wavelength of 237nm and oridonin as a standard are adopted. Moreover, the linear
ranging from 5.05 to 50.50 mg/l, the favorable linear relation having r=0.999 and the relative standard deviation that is lower than that of 2%, are
observed. This analyzing method has the features of easy operation and stability, which is suitable to measure accurately the content of
diterpenoids from the material drug and the preparation. The investigations show that ethanol extraction has the highest extracting ratio, adding
up to 2.07%.
Keywords: Rabdosia serra(Maxim.)Hara; Diterpenoids; UV-spectrophotometry; Determination
化学成分研究表明，溪黄草含萜类、黄酮类、酚
类、氨基酸等多种化学成分。文献报道[3,4]，溪黄草的
二萜类主要为对映-贝壳杉烷型二萜化合物，分别为
radoserrinA（溪黄草甲素），rabdoserrinB（溪黄草乙素），
excisaninA（溪黄草丁素）和 kamebakaurin，它们都是
具有抗癌活性的化合物，前三者分子结构式都存在一
个环外α-亚甲基环戊酮结构，即 A 环区。据报道这
种结构具有较大的内应力，是一个抗癌活性区[5]。椐
文献[6]报道，冬凌草甲素的结构式含对映-贝壳杉烷型
二萜化合物,其分子结构式以及分子量与溪黄草的四
种二萜基本相似，也存在一个α-亚甲基环戊酮结构,
即Ａ环抗癌活性区。这说明冬凌草甲素与溪黄草二萜
类化合物在同一波长处具有相似的紫外吸收特征峰。
收稿日期：2005-03-04
支持项目：广东省科技攻关项目（2003C104025）,华南理工大学百步梯攀登
计划研究项目
作者简介：邓韵，硕士研究生，从事天然产物化学与工程的研究
由于现在分离获得高纯度具有代表性的溪黄草
二萜类化合物标准品的技术难度大，至今对于溪黄草
二萜成分含量的测定未有报道。本文以冬凌草甲素为
标准品，采用紫外-分光光度法，并利用该法对溪黄草
六种不同溶剂提取物的总二萜含量进行测定,可望建
立一种可靠的测定溪黄草原料药和制剂中总二萜含量
的方法。
1 仪器和材料
1.1 仪器
RE-52AAA 型旋转蒸发器（上海嘉鹏科技有限公
司），DZF-6050 型真空干燥箱（上海一恒科技有限公
司），Fabr-Nr 型电子分析天平（德国 Sartorius 公司），
Unico-UV2102PC 型紫外扫描分光光度计（上海 Unico
公司）。
1.2 材料和试剂
溪黄草全草[Rabdosia serra(Maxim.)Hara]，由广东
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2005.02.056
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省翁源市青云山药厂提供；冬凌草甲素标准品由陕西
琳静科工贸有限公司提供；无水乙醇、正丁醇、石油
醚、乙酸乙酯和苯等均为国产分析纯；实验用水（18M
Ω·cm）由 Millipore Milli-Q 超纯水系统制备。
2 实验方法和测定结果
2.1 溪黄草六种不同溶剂的提取物
称取经真空干燥后的溪黄草原料 100g 各六份，分
别置于盛有 500ml 的蒸馏水、无水乙醇、正丁醇、石
油醚、乙酸乙酯和苯的广口瓶中，密封浸泡一个星期，
每天充分搅拌两次。然后分别对六种浓缩液进行过滤，
残渣再以 100ml 相应的溶剂洗涤过滤三次，在 50℃下
对总滤液减压旋转蒸发浓缩至 10ml，挥干溶剂，得褐
色溪黄草浸膏，最后均以无水乙醇溶解定容至 500ml，
密封冷藏待测。
2.2 标准曲线的绘制
2.2.1 标准品溶液的制备
精密称取冬凌草甲素（60℃下减压干燥 6h）标准
品 5.05mg ，用 95%乙醇溶解，定容至 50ml 容量瓶中，
即得对照品溶液；分别量取 0.5，1，2，3，4，5 ml
置于 10ml 容量瓶中用 95%乙醇定容至刻度，获浓度
分别为 5.05，10.10，20.20，30.30，40.40，50.50 mg/l
的冬凌草甲素标准液。
2.2.2 测定波长的选择
取浓度为 30.30mg/l 标准品溶液，以 95%乙醇为
空白溶媒，在 200-700nm 范围内扫描，237nm 处有最
高吸收峰，测定其吸光度 A，并确定测试波长为
237nm。
2.2.3 标准曲线的绘制
取系列浓度标准品溶液，以 95%乙醇为空白溶
媒，在 237nm 处测定其吸光度 A。结果见表 1。
表1 标准曲线测定值
浓度 C(mg/l) 5.05 10.10 20.20 30.30 40.40 50.50
吸光度 A 0.090 0.183 0.382 0.573 0.770 0.983
浓度 C (mg/l)和吸光度 A 之间关系的标准曲线如
图 1 所示。
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
0 10 20 30 40 50C(mg/l)
A
图1 标准曲线图
可看出浓度在 5.05-50.50 mg/l 范围内吸光度和浓
度呈良好线形关系，回归方程为：A=0.0198C-0.0136，
r=0.999。
2.3 样品含量的测定
2.3.1 样品溶液的制备及其含量的测定
取 2.1 中六种溶剂的溪黄草提取液经膜孔直径为
0.45µm 的微孔膜过滤，分别精密量取 1ml 用 95%乙
醇定容至 10ml，以同样方法在 237nm 处测定其吸光
度 A，按回归方程计算提取物总二萜含量，结果见表
2。
表2 六种溶剂的溪黄草提取物中总二萜的含量
溶剂 水 乙醇 正丁醇 石油醚 乙酸乙脂 苯
百分含量 1.02% 2.07% 1.61% 0.87% 1.42% 1.23%
2.3.2 稳定性试验
将乙醇提取样样品液每隔 10min 测定 1 次，连续
测定 1ｈ，稳定性试验测定结果为 2.07±0.03)%，
RSD=0.77%，表明样品溶液在 1ｈ内较稳定。结果见
表 3。
表3 精密度试验结果(ｎ=5) %
样号 1 2 3 4 5
总二萜含量(%) 2.05 2.10 2.08 2.07 2.05
平均含量(%) 2.07
RSD(%) 0.77%
2.3.3 加样回收实验
精密称取已知总二萜含量的溪黄草 6 份不同溶剂
提取物样品溶液，加入一定量的冬凌草甲素标准品，
同法制得样品液，总二萜的含量测定同“标准曲线的
绘制”项下进行，计算回收率。回收率结果见表 4。
表4 回收率试验结果
编号
加入标准
品(mg)
回收标准
品(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD(%)
1 3.04 2.95 97.04
2 3.04 3.03 99.67
3 3.04 3.11 100.30
4 3.04 2.98 98.03
5 3.04 3.08 101.32
6 3.04 2.97 97.70
99.01 1.43
3 结语与讨论
回收率试验、精密度试验和稳定性试验结果表
明，用紫外-分光光度法测定溪黄草总二萜含量，结果
标准偏差较小，重现性好，确度较高，试验条件容易
控制，简单方便，是测定溪黄草提取物中总二萜含量
的一种容易操作、稳定可靠的方法。
（下转第157页）
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方法的检出限为 2.07 ×10-9 mol/L。
3.3 样品测定及回收率实验
按上述实验方法测定了显齿蛇葡萄中总黄酮的
含量，对样品溶液进行了平行测定（n=5 次）其结果
见表1。
表1 显齿蛇葡萄中总黄酮含量及精密度
样品名称 测定含量（%） 平均含量% RSD%
显齿蛇葡萄 3.86 4.10 3.90 4.11 4.05 4.00 1.62
为验证实验准确性，在样品溶液中加芦丁对照后计
算回收率，结果如表 2，实验结果表明荧光分析测定
茅岩霉茶总黄酮的平均回收率为 98.5%~105.4 %，说
明本方法可行，具有良好的分析应用前景。
表2 样品回收率实验结果
样品编
号
原含量
（ug.ml-）
加入量
（ug.ml-）
测定值
（ug.ml-）
回收率
（%）
1 2.03 1.50 3.50 98.5
2 1.44 2.30 3.82 105.5
3 2.00 2.00 4.05 102.4
4 0.55 1.50 2.08 105.4
4 结论
紫外分光光度法（铝盐显色法）广泛用于实际生
产科研过程中的总黄酮的测定，但茅岩霉中的天然组
成复杂，分光光度法在测定过程，吸光值将随放置时
间一直衰减。而且试剂配制繁琐，测定时间短，其准
确性，重现性，稳定性，线性关系，添加回收率均能
满足生产生科研要求，具有良好的分析应用前景。
参考文献
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（上接第154页）
实验表明，用单一溶剂浸取，浸取效果强弱次序
为:乙醇 >正丁醇>乙酸乙脂>苯> 水>石油醚。乙醇浸
取效果最好，表明乙醇是提取溪黄草中二萜类化合物
较适宜的有机溶剂。 正丁醇、乙酸乙脂和苯也有较好
的浸取效果。而极性最低的石油醚浸取效果最差，甚
至低于强极性非有机溶剂水的浸取效果，这说明极性
较大的有机溶剂有利于溪黄草二萜成分的浸取和溶
解，根据相似相溶原理，这与溪黄草二萜成分属于极
性物质[7]是相符合的。
参考文献
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