全 文 ：— 13 —现代中药研究与实践2015年第29卷第3期Chin. Med. J. Res. Prac., 2015 Vol. 29 No.3
基金项目： 黔科合重大专项字（2012）6010 号；筑科合同 [2011204]8 号
作者简介：徐东升（1988-），男，在读硕士，主要从事中药质量控制及新药研究工作。
通讯作者： 高言明 （1956-），男，学士，教授，硕士生导师，主要从事中药质量控制及新药研究工作。E-mail: 2538932831@qq.com
毛钩藤不同采收期总生物碱含量变化研究
徐东升 1，高言明 1*，杨　春 2，林昌虎 3，吴明花 1，唐才林 1
（1. 贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002 ；2. 贵州理工学院，贵州 贵阳 550003 ；
3. 贵州科学院，贵州 贵阳 550001）
摘　要： 目的　通过测定不同采收期毛钩藤中总生物碱含量的变化，研究毛钩藤的最佳采收期。方法
　以 pH=3.4 的醋酸 -醋酸钠缓冲溶液条件下用溴甲酚绿与生物碱显色后在 410 nm 波长处用紫外 -可见分
光光度计进行测定 [1]。结果　毛钩藤中的总生物碱在全年气温相对较高时段呈现含量相对较低，而在气温
相对较低时段呈现含量相对较高现象。结论　毛钩藤药材的采收期应选择在每年气温相对较低的时段采收，
质量相对较好。
关键词：毛钩藤；总生物碱；不同采收期；紫外 -可见分光光度法
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2015)03-13-03
doi:10.13728/j.1673-6427.2015.03.005
The Study of the Total Alkaloid Content Changes in Different Harvest
Time of Uncaria hirsute
XU Dong-Sheng1, GAO Yan-Ming1*, YANG Chun2, LIN Chang-Hu3, WU Ming-hua1, TANG Cai-ling1
（1.GuiYang College of Traditional Chinese Medicine Experiment Center,GuiYang 550002；2.Guizhou Institute
of Technology, GuiYang 550003, China；3.Guizhou Academy of Sciences, GuiYang 550001, China）
Abstract: Objective Through the determination of total alkaloids in different harvest time Uncaria
hirsute content changes, research the best harvest time Uncaria hirsute. Methods Used the UV - visible
spectrophotometer determination of pH = 3.4 - acetic acid sodium acetate buffer solution under the condition of
using bromocresol green and alkaloids after developing in 410 nm. Results The total alkaloid content in Uncaria
hirsute in relatively high temperatures throughout the year period showed relatively low levels, and in the period
of relatively low temperatures showed a relatively high content of phenomena. Conclusion Uncaria hirsute
medicinal material harvest time should choose in the annual temperature is lower during the harvest, the quality is
relatively good.
Key words: Uncaria hirsute；total alkaloid；different harvest time；UV - visible spectrophotometry
在目前使用的《中国药典》2010 版上没有采用
某个有效成分含量测定指标作为中药钩藤质量评价
的标准 [2]，因此钩藤药材的采收期是根据民间习惯于
秋、冬二季采收。钩藤在临床上主要用于降压，钩
藤药材中的药效成分主要为生物碱类，虽然钩藤碱、
异钩藤碱、去氢钩藤碱和去氢异钩藤碱等具有降压作
用 [3]，但在钩藤中含量均普遍较低 [4, 5]，采用钩藤中
的总生物碱含量来研究中药钩藤不同采收期的质量
就有一定的现实意义。
1　材料与仪器
紫外 - 可见分光光度计（岛津 UV-2501PC）；
AE-240 双量程电子分析天平，量程：万分之一和
十万分之一两档（梅特勒 -托利多上海有限公司）；
超声波清洗器；异钩藤碱对照品（批号：111927-
201102），购于中国食品药品检定研究院；甲醇，氨水，
三氯甲烷，醋酸，醋酸钠，溴甲酚绿，盐酸，氢氧化
钠均为分析纯，水为蒸馏水，药材样品采自贵州省开
阳县翁昭村钩藤种植基地人工种植五年生毛钩藤，采
样于 2012 年 1 ～ 12 月，按每月 1 至 10 号之内在同
一毛钩藤种植区域中采取带钩老茎枝作为样品，经
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贵阳中医学院讲师付志明鉴定为茜草科植物毛钩藤
（Uncaria hirsute Havil），药材样品在室内阴干经粉碎
后于 45℃烘至恒重并置于干燥器中备用。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备　　取异钩藤碱对照品
10.30mg，精密称定，置 100 ml 量瓶中，加甲醇溶解
并定容至刻度，摇匀，即得浓度为 103.00μg· ml-1
的对照品溶液。
2.1.2　供试品溶液的制备 [6]　　取钩藤样品粉末约
0.16g，精密称定，置于 50 ml 具塞的锥形瓶中，加
入 1%盐酸甲醇 10 ml，放入 4℃冰箱中冷浸 12 h 后
取出，室温超声 45 min，滤过，再加入 1%盐酸甲醇
10 ml，室温超声 45 min，滤过，合并滤液于蒸发皿中，
置 60℃水浴中挥干滤液，残渣加 10 ml 稀氨水溶解，
使溶液呈碱性，转移至分液漏斗中，加 10 ml 氯仿，
充分振摇萃取 3 min，静置分层，收集氯仿层，反复
萃取 3次，将合并的氯仿层于蒸发皿中， 60℃水浴挥
干，残渣加 pH = 3.4 的缓冲液和酸性染料各 5 ml，溶
解后转移至分液漏斗中，精密加入 10 ml 氯仿，充分
振摇萃取 3 min，静置分层，收集氯仿层，反复萃取
3次，合并氯仿层溶液，即得显色后的供试品溶液。
2.1.3　醋酸 - 醋酸钠缓冲溶液的制备　　配制 0.2
mol·L-1 的醋酸钠溶液 250 ml，0.2 mol·L-1 的醋酸溶
液 500 ml-1，备用，使用之前按醋酸钠溶液约 0.88 ml
和醋酸溶液约 24.12 ml-1 混匀，用 pH计精密调至 pH
=3.4。
2.1.4　溴甲酚绿酸性染料溶液的制备　　称取溴甲
酚绿 0.25 g，加 0.05 mol·L-1 的氢氧化钠溶液 5 ml 研
磨，再加水配成 500 ml，用三氯甲烷洗弃脂溶性杂质
至三氯甲烷层不显色，储存于 500 ml 容量瓶中备用。
2.2　检测波长的确定
取供试品溶液和对照品溶液，显色后，且同法作
试剂空白，利用 UV-2501PC 紫外 - 可见分光光度计
进行扫描，根据光谱图知：样品及对照品在 410 nm
处均有最大吸收峰，故本实验选择 410 nm 作为总生
物碱的测定波长。
2.3　线性关系考察
分别精密吸取浓度为 103.00 μg·ml-1 的异钩藤
碱对照品 2.0，4.0，5.0，7.0，9.0 ml 于 5 个 10 ml 的
容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得一系列浓度
梯度的对照品溶液。分别精密吸取上述各浓度的对照
品溶液 5 ml 于蒸发皿中，于 60℃水浴上挥干，残渣
按“2.1.2”项下 “残渣加 pH = 3.4 的缓冲液和酸性染
料各 5 ml” 起同法操作，以相应试剂为空白，用紫外-
可见分光光度计在 410 nm波长处测定吸光度，以对照
品的浓度（μg·ml-1）为横坐标（X），吸光度为纵坐
标（Y）进行回归计算，得总生物碱的回归方程为：Y
= 0.053X + 0.042 2，r = 0.999 7。结果表明总生物碱在
3.43 ～ 15.45μg·ml-1 的范围内线性关系良好。
2.4 　精密度试验
精密吸取按上述方法制备的浓度为 41.20
μg·ml-1 的对照品溶液 5 ml，显色后，分别测定 6
次吸光度，以 6次测得的吸光度计算RSD 为 2.41%，
表明仪器精密度良好。
2.5　稳定性试验
精密吸取按“2.1.2”项下制备的供试品溶液，分
别在 0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h 进行吸光度测定，
以测得的吸光度计算RSD 为 1.38%，表明供试品溶
液在 3h 内稳定性良好。
2.6　重复性试验
取3月份采收的毛钩藤样品粉末6份，每份约0.16
g，精密称定，分别置于 6 个 50 ml 具塞锥形瓶中，
按“2.1.2”项下“供试品溶液的制备”方法制备供
试液，同法作试剂空白，用紫外 -可见分光光度计
在 410 nm 处测定吸光度，计算出该钩藤药材的总生
物碱（以异钩藤碱计）的平均含量为 0.17%，RSD 为
1.81%，
2.7　加样回收率试验
精密称取已知总生物碱平均含量为 0.17% 的
毛钩藤样品粉末 6 份，每份约 0.08 g，分别置 6 个
50 ml 具塞锥形瓶中，每份分别精密加入浓度为
144.00μg·ml-1 的异钩藤碱对照品 1 ml，按“2.1.2”
项下“供试品溶液的制备”方法制备供试液，同法作
试剂空白，用紫外 -可见分光光度计在 410 nm 处测
定吸光度，结果见表 1。
表 1回收率测定结果
Tab. 1 Result of recovery experiment
序号 称样量(g)
样品含
量 (μg)
对照品
加入量
(μg)
吸光度
(A)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回
收率
(%)
RSD
(%)
1 0.080 5 136.85 144.00 0.547 285.74 103.39
100.78 2.81
2 0.080 0 136.00 144.00 0.529 275.55 96.91
3 0.080 0 136.00 144.00 0.537 280.08 100.05
4 0.080 1 136.17 144.00 0.543 283.47 102.29
5 0.080 2 136.34 144.00 0.533 277.81 98.24
6 0.080 5 136.85 144.00 0.548 286.30 103.79
2.8 　样品含量测定
（下转第 17 页）
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3 　讨论
植物多倍体的诱导方法有化学诱导法，物理诱导
法（辐射法）等，其中诱导多倍体的化学药剂中，应
用最为广泛的诱变剂是秋水仙素 [6]，在很多植物多倍
体的诱变中起到很好的效果 [7]。其作用机理在于抑制
或妨碍细胞纺锤丝形成，使分裂的染色体停留在赤道
板，不向两极移动，而细胞质不分裂，导致染色体数
目增加[8, 9]。气孔保卫细胞叶绿体观测也是直接简便，
相对准确的多倍体鉴定手段 [10]。三七染色体数目为
n = 24，是天然的二倍体植株 [11]，其倍性育种的潜力
比同属的人参大。本试验中，未经过加倍处理的三七
植株，其气孔保卫细胞叶绿体数目变化幅度有规律，
而用秋水仙素溶液处理过的三七植株保卫细胞叶绿
体数目变化不规则，很可能是体细胞加倍所致 [12]，
而用秋水仙素处理种子后所长成的植株，以浓度为
0.3% 的秋水仙素溶液处理 48h 为诱导多倍体最有效
的方法，与西洋参诱导多倍体的秋水仙素浓度范围吻
合 [13]。
三七是多年生植物，人工栽培的生产周期多为 3
年，繁殖系数低，育种工作具有周期长、难度大、不
易大量繁殖和推广等不利因素。开展三七倍性育种研
究，是三七新品种选育的一个有效方法，但是许多问
题需要进一步的深入研究。本文对秋水仙素诱导三七
多倍体的气孔保卫细胞叶绿体鉴定的方法做了初步
研究，为今后的工作提供理论基础。
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收稿日期：2014-07-07
按“2.1.2”项下制备方法，对各钩藤样品进行供
试溶液制备，每份样平行 3份，同法作试剂空白，用
紫外 -可见分光光度计在 410 nm 处测定吸光度，计
算出总生物碱（以异钩藤碱计）的含量，结果见表 2。
表 2 毛钩藤不同采收期总生物碱含量测定结果（n=3）
Tab. 2 The result of total alkaloids in different harvest time Uncaria hirsute
（n = 3）
采收月份 平均含量(%)
RSD
(%) 采收月份
平均含量
(%)
RSD
(%)
1 0.18
（n=6）
7 0.10 1.41
2 0.14 8 0.07 2.69
3 0.17 9 0.05 2.78
4 0.20 10 0.07 3.00
5 0.09 11 0.10 2.30
6 0.05 12 0.10 1.70
3 　讨论
通过表 2可以看出，毛钩藤中的总生物碱在全年
通常气温相对较高的5到 10月份时段含量相对较低，
而在当年 11月到次年 4月份气温相对较低时段含量
相对较高，说明气温的高低对毛钩藤中总生物碱含量
有明显的影响。因此贵州开阳县翁昭村毛钩藤种植基
地种植的毛钩藤采收期应选择气温相对较低的时段采
收为宜，与《中华人民共和国药典》2010 年版对钩藤
采收期于“秋、冬二季采收”叙述有一定差异，这或
许与特定地点的地理环境和气候有密切关系所致。
参考文献
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收稿日期：2014-07-07
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