全 文 ：鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠血糖、糖耐量和胰岛素分泌的影响
王绍军1，吴 闯2，赵 赶1*
( 1广西壮族自治区妇幼保健院药剂科，南宁 530003; 2广西医科大学药学院，南宁 530021)
摘 要 目的:研究鸡矢藤提取物对糖尿病模型小鼠血糖、糖耐量和血清胰岛的影响。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素建立
糖尿病小鼠模型，糖尿病模型小鼠随机分为链脲佐菌素对照组、二甲双胍组、鸡矢藤提取物 2． 5g、5g、10g /kg剂量组，另设 10 只正常
小鼠作为空白对照组。各给药组小鼠灌胃给药每天一次，连续给药 14 天，空白组和链脲佐菌素对照组给予等量生理盐水。药前、药
后 7 天和 14 天测定小鼠空腹血糖。末次给药 1 小时后进行糖耐量试验，测定小鼠血清中胰岛素的含量，并计算胰岛素敏感指数。
采用苏木精-伊红染色法观察胰腺组织的病理变化，免疫组化染色观察胰腺组织胰岛素的表达情况。结果:与空白组比较，链脲佐菌
素对照组的空腹血糖( 26． 58 ± 4． 53) 明显较正常组高，血糖曲线下面积( 115． 30 ± 8． 35) 增大，血清胰岛素浓度( 13． 19 ± 4． 24) 明显
下降。与链脲佐菌素对照组相比，鸡矢藤提取物 10g /kg治疗组的空腹血糖( 17． 47 ± 5． 00) 有不同程度的下降，血糖曲线下面积( 84．
86 ± 9． 56) 减少，血清胰岛素浓度( 18． 29 ± 3． 77) 明显升高，且鸡矢藤提取物也可以使胰腺组织中胰岛素表达显著增加，胰岛素敏感
指数( -5． 71 ± 0． 26) 有所提升，但无统计学差异。结论:鸡矢藤提取物通过提高糖尿病小鼠的糖耐量，促进胰岛素释放，增加其胰岛
素敏感指数，并改善胰腺组织的形态结构，使糖尿病小鼠空腹血糖下降。
关键词 鸡矢藤提取物;糖尿病;糖耐量;胰岛素
糖尿病( DM) 是一种由多种病因引起的以慢性高血糖为特
征的代谢紊乱疾病，与此同时还被广泛认为是一种慢性炎症性
疾病［1］。华人是糖尿病的高危种族，故研究糖尿病的防治策略
对我国具有重大意义［2，3］。
现糖尿病的治疗方案主要是通过药物控制血糖，并以饮食
控制，加上动态血糖监测进行辅助［4］。在糖尿病治疗中主要还
是通过药物进行控制，目前临床用于治疗 DM 的药物有胰岛素
和口服降糖药，这些药物疗效高，但对人体有一定的副作用，故
开发高效低副作用的中医药有重大的实际意义［5］。在我们的
前期研究中发现鸡矢藤提取物具有降低糖尿病小鼠血糖、提高
糖尿病小鼠的抗氧化等作用。现在我们将进一步研究鸡矢藤
提取物对糖尿病小鼠血糖、空腹血清胰岛素、糖耐量和胰腺组
织病理学变化等的影响，为发掘抗糖尿病药物提供依据。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 鸡矢藤购自广西玉林市药材市场，经广西中医
药研究院鉴定所够鸡矢藤( Paederia scandens ( Lour． ) Merr． ) 为
茜草科多年生草质藤本植物。鸡矢藤提取物由本实验室采用
乙醇提取法制备所得，取 500g鸡矢藤干燥药材于 8 倍量 60%乙
醇中浸泡 30 分钟，加热回流提取两次，每次 1 小时，过滤并合并
滤液，滤液在 65 ± 5℃条件下减压回收乙醇，浓缩液在真空条件
下低温干燥，粉碎，即得 40． 2g 鸡矢藤提取物。盐酸二甲双胍
片，北京京丰制药有限公司，批号 131019。
1． 2 动物 SPF 级 KM 小鼠，雌雄各半，体重( 20 ± 2 ) g，购于
广西医科大学实验动物中心。动物分笼饲养，自由摄食、饮水。
饲养环境通风良好，室温 18 ～ 25℃，相对湿度 40% ～ 70%，12 h
光照昼夜循环。合格证号 SCXK( 桂) 2009-0002。
1． 3 试剂 链脲佐菌素，STZ 美国 Sigma 公司，批号: SO130 ～
100mg;碘［125I］胰岛素放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研
究所，批号: 140102。
1． 4 仪器 罗氏卓越型血糖仪，ACCU-CHEK Performa; DFM-96
众成 γ计数仪，中国合肥。
1． 5 方法 小鼠造模前禁食 12 h，取链脲佐菌素溶解于 0．
1mol /L柠檬酸缓冲液中，低温避光保存，现配现用。小鼠按照
180 mg /kg腹腔注射链脲佐菌素柠檬酸缓冲液，注射 72 小时后
尾巴取血测空腹血糖，空腹血糖≥11． mmol /L 的选为糖尿病模
型小鼠。将造模成功的小鼠随机分为链脲佐菌素对照组、二甲
双胍组、鸡矢藤提取物 2． 5g、5g、10g /kg 剂量组，每组 10 只动
物。另设 10 只正常小鼠作为空白对照组。灌胃给药，每天一
次，连续 14 天。第 14 天末次给药前禁食不禁水 12 小时，给药
后 1 小时尾巴取血，测定血糖，拔眼球取血，以 3500 rpm离心 10
分钟，取血清待测。摘取胰腺组织于 4%甲醛固定，常规石蜡包
埋，进行苏木精-伊红染色法和免疫组化染色。
1． 5． 1 一般状态的观察 观察小鼠的精神活动，毛发和饮食
情况，记录体重变化和死亡情况等。
1． 5． 2 血糖的测定 小鼠尾静脉取血，用血糖仪和试纸测
定。
1． 5． 3 糖耐量实验 实验第 14 天，小鼠禁食 12 小时，一次性
灌胃葡萄糖 2． 0g /kg，在 0、30、60、120 分钟尾静脉取血测血糖，
按以下公式计算血糖变化曲线下面积:血糖曲线下面积 = 0． 5 ×
0h血糖 + 0． 5h血糖 + 1． 5 × 1h血糖 + 2h血糖
1． 5． 4 空腹血清胰岛素的测定 小鼠眼球取血，离心获取血
清，按照试剂盒说明测定血清中胰岛素浓度。并按照公式:胰岛
素敏感指数( ISI) = ln［1 ÷ ( 血清空腹胰岛素 ×血清空腹血糖］
计算胰岛素敏感指数。
1． 5． 5 胰腺组织的病理学检测 小鼠胰腺组织常规石蜡包
埋，进行苏木精-伊红染色，光镜下观察其形态学改变。
1． 5． 6 胰腺组织免疫组化观察 小鼠胰腺组织固定后进行
常规免疫组化染色，观察组织中胰岛素表达的改变情况。
2 结果
741中药药理与临床 2015; 31( 4)
* 通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.04.046
2． 1 小鼠一般状态的观察 正常组小鼠精神状态活跃，饮食正
常，便尿量正常，体重稳定增长。STZ 组小鼠未经药物干预，饮
食明显增多，尿量多，体重显著下降。糖尿病小鼠经二甲双胍和
鸡矢藤提取物治疗后精神和饮食状态有所改善，体重程缓慢升
高状态。
2． 2 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠空腹血糖的影响 由试验结
果可看出，与空白组比较，各组小鼠腹腔注射链脲佐菌素后空
腹血糖明显升高。与链脲佐菌素对照组比较，二甲双胍组和鸡
矢藤提取物给药组经 14d给药后，二甲双胍组小鼠空腹血糖显
著下降，鸡矢藤提取物 5、10 g /kg 剂量组空腹血糖也有不同程
度的下降，结果见表 1。
2． 3 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠糖耐量的影响 与空白组比
较，各组给予葡萄糖后 30 分钟血糖显著升高，并在给予葡萄糖
60、120 分钟后血糖值缓慢下降。与链脲佐菌素对照组比较，二
甲双胍组和鸡矢藤提取物组的糖耐量曲线下面积显著降低，结
果见表 2。
表 1 鸡矢藤提取物对链脲佐菌素致糖尿病小鼠空腹血糖的影响
( 珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
( g /kg)
血糖( nmol /mg)
给药前 药后 7 天 药后 14 天
空白对照 6． 3 ± 0． 7＊＊ 5． 9 ± 1． 4＊＊ 7． 1 ± 0． 9＊＊
链脲佐菌素 20． 8 ± 5． 8 23． 5 ± 5． 5 26． 6 ± 4． 5
二甲双胍 0． 28 20． 4 ± 4． 7 17． 2 ± 4． 4* 17． 5 ± 4． 5＊＊
鸡矢藤提取物 2． 5 21． 5 ± 4． 5 21． 3 ± 5． 3 22． 8 ± 6． 3
鸡矢藤提取物 5 19． 8 ± 5． 6 19． 9 ± 5． 4 18． 5 ± 8． 4*
鸡矢藤提取物 10 20． 2 ± 5． 4 19． 4 ± 4． 5 17． 5 ± 5． 1＊＊
与链脲佐菌素组比较 * P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01( 下同)
表 2 鸡矢藤提取物对链脲佐菌素致糖尿病小鼠糖耐量的影响( 珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
( g /kg)
血糖( mmol /L)
0min 30min 60min 120min
AUC
( mmol /h /L)
空白对照 7． 1 ± 0． 9＊＊ 7． 6 ± 1． 3＊＊ 6． 5 ± 1． 1＊＊ 7． 3 ± 1． 0＊＊ 28． 3 ± 2． 8＊＊
链脲佐菌素 26． 5 ± 4． 3 31． 1 ± 2． 6 29． 2 ± 2． 5 27． 1 ± 2． 6 115． 3 ± 8． 3
二甲双胍 0． 28 17． 4 ± 4． 4＊＊ 24． 0 ± 4． 2＊＊ 20． 1 ± 3． 1＊＊ 18． 4 ± 3． 7＊＊ 81． 2 ± 11． 8＊＊
鸡矢藤提取物 2． 5 22． 8 ± 6． 3 27． 9 ± 3． 3* 26． 9 ± 3． 0 24． 9 ± 3． 8 104． 8 ± 8． 9＊＊
鸡矢藤提取物 5 18． 5 ± 8． 4* 25． 5 ± 4． 6＊＊ 23． 3 ± 3． 2＊＊ 18． 4 ± 5． 7＊＊ 88． 4 ± 15． 2＊＊
鸡矢藤提取物 10 17． 4 ± 5． 0＊＊ 25． 7 ± 4． 2＊＊ 21． 1 ± 3． 6＊＊ 18． 7 ± 4． 0＊＊ 84． 8 ± 9． 5＊＊
2． 4 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠血清胰岛素及胰岛素敏感指
数的影响 与空白组比较，链脲佐菌素对照组小鼠血清胰岛素
浓度显著下降，鸡矢藤给药组也有所下降。但与链脲佐菌素对
照组比较，二甲双胍组的血清胰岛素浓度显著升高，鸡矢藤提
取物 5、10 g /kg剂量组胰岛素浓度也明显升高。但与链脲佐菌
素对照组比较，各给药组对胰岛素敏感指数 ISI无明显影响，结
果见表 3。
2． 5 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠胰腺组织病理学变化的影响
胰腺组织苏木精-伊红染色可见，正常对照组小鼠胰腺组织中
细胞结构清晰、完整，胰岛体积较大; 模型对照组中胰岛组织变
小，胞核变形;给药组小鼠的胰腺组织形态较模型组有一定的
改善，胰岛细胞较完整，胞核多呈圆形，结果见图 1。
表 3 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠血清胰岛素和胰岛素敏感指数
的影响( 珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
( g /kg)
Insulin
( uIU /ml)
ISI
空白对照 25． 2 ± 3． 7＊＊ -5． 16 ± 0． 16
链脲佐菌素 13． 1 ± 4． 2 -5． 82 ± 0． 32
二甲双胍 0． 28 20． 7 ± 5． 9＊＊ -5． 83 ± 0． 32
鸡矢藤提取物 2． 5 15． 3 ± 3． 7 -5． 79 ± 0． 39
鸡矢藤提取物 5 16． 6 ± 3． 7* -5． 62 ± 0． 52
鸡矢藤提取物 10 18． 2 ± 3． 7＊＊ -5． 71 ± 0． 26
图 1 各组小鼠胰腺结构 HE染色结果( 400 × )
A:空白对照; B:链脲佐菌素; C:二甲双胍 0． 28 g /kg; D:鸡矢藤提取物 2． 5 g /kg; E:鸡矢藤提取物 5 g /kg; F:鸡矢藤提取物 10 g /kg
2． 6 鸡矢藤提取物对糖尿病小鼠胰腺组织胰岛素表达的影响
与空白组小鼠胰腺组织的免疫组化染色结果比较，链脲佐菌
素对照组小鼠胰腺组织中胰岛素表达阳性细胞数明显减少。而
鸡矢藤提取物给药组小鼠胰腺中的阳性细胞数较链脲佐菌素对
841 中药药理与临床 2015; 31( 4)
照组的多，其 5、10 g /kg剂量组的结果较为明显，结果见图 2。
图 2 各组小鼠胰腺结构免疫组化染色结果( 400 × )
A:空白对照; B:链脲佐菌素; C:二甲双胍 0． 28 g /kg; D:鸡矢藤提取物 2． 5 g /kg; E:鸡矢藤提取物 5 g /kg; F:鸡矢藤提取物 10 g /kg
3 讨论
糖尿病是一种发病率高、病程漫长复杂的代谢性疾病。随
着病程的发展，糖尿病并发症越发的增多，严重影响患者的生
活质量。多项报道显示中药在治疗糖尿病及其慢性并发症方
面具有很大的优势［6，7］。血糖监测是糖尿病综合治疗的基础，
监测的结果可反映治疗的效果和为调整治疗方案提供依据，患
者进行长期的自我血糖监测还能有效降低并发症的发生［4］。
本研究采用一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型
小鼠，使小鼠的胰岛 β 细胞选择性收到损伤，继而胰岛素分泌
减少致使小鼠血糖升高［8］。有日本的研究者发现日本人从正
常的糖耐量到糖耐量减少的过程中，主要是由于胰岛素分泌减
少所致，而胰岛素抵抗和高胰岛素血症并不常见。在中国人中，
正常糖耐量到糖耐量减少的过程中则存在胰岛素分泌功能衰
退和胰岛素抵抗［9］。由此可见糖尿病患者的胰岛素水平与其
糖耐量能力息息相关。
研究发现，糖尿病小鼠灌胃给予鸡矢藤提取物能低小鼠空
腹血糖，鸡矢藤提取物 10g /kg组的效果较为明显。在糖耐量试
验结果中显示鸡矢藤提取物给药组曲线下面积明显下降。除
此之外，鸡矢藤还可以显著改善糖尿病小鼠中链脲佐菌素所致
的胰腺损伤。鸡矢藤提取物虽没有改善小鼠对胰岛素的敏感
指数，但能升高血清胰岛素的水平以及胰腺组织中胰岛素的表
达，提示鸡矢藤提取物可能有促进胰岛 β细胞分泌胰岛素的作
用。本实验结果表明，鸡矢藤提取物高、中剂量组能显著降低链
脲佐菌素所致糖尿病小鼠的空腹血糖、改善糖耐量和提高血清
胰岛素水平。
参考文献
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The study of extracts of Paederia scandens on blood glucose，
glucose tolerance and insulin secretion in diabetic mice
Wang Shaojun1，Wu Chuang2，Zhao Gan1
( 1 The Maternal and Child Health Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Ｒegion，Nanning 530003;
2 Department of Pharmacology，Guangxi Medical University，Nanning 530021)
Objective: To investigate the effect of extracts of Paederia scandens ( EPS) on blood glucose，glucose tolerance and serum insulin in di-
941中药药理与临床 2015; 31( 4)
abetic mice． Methods: Diabetic mice were created by intraperitoneal injecting STZ and randomly divided into STZ group，metformin group，
low-，medium-，high-dose ( 2． 5g，5g，10g /kg) of EPS groups with 10 diabetic mice respectively． Normal group included 10 normal mice．
Mice were intragastric gavaged once a day for 14 days． Normal group and STZ group were given saline． The fasting blood glucose ( FBG) of
0，7，14 days were measured． One hour after last gavage，oral glucose tolerance test ( OGTT) and the measurement of serum insulin was
conducted，the insulin sensitivity index ( ISI) was calculated． Pathological changes of pancreas were observed through HE staining． Immuno-
histochemical analysis was used to perform insulin expression in the pancreatic tissues． Ｒesults: Compared to normal group，the FBG and the
area under curve of blood glucose ( AUC) were increased，serum insulin level were significantly decreased in STZ group． After the treatment
of metformin and EPS，the FBG and AUC of mice was showed a reduction in varying degrees． While the serum insulin level was risen ( P ＜
0． 01) ． And EPS also could up-regulate the expression of insulin in pancreatic tissue． ISI was promoted by EPS，though the ISI result did not
have statistically significant difference． Conclusion: The EPS can reduce FBG of diabetic mice through enhancing the glucose tolerance，pro-
moting the release of insulin and raising ISI in STZ-induced diabetic mice．
Key words Paederia scandens( 鸡矢藤) ; diabetes mellitus; glucose tolerance; insulin
南赤瓟对 Caski细胞的影响以及 Survivin与 Bcl-2 蛋白家族基因表达关系研究*
金家红1，王爱玲2，冯天艳3，贺海波2＊＊，覃慧林2，汪鋆植2，张永峰2
( 1 三峡大学医学院，宜昌 443002; 2神农架聚能药业有限公司，神农架 422400;
3三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室·湖北省土家药物研究所，宜昌 443002)
摘 要 目的: 研究南赤瓟醇提物对 Caski细胞抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟醇提物( 0． 0625、0．
125、0． 25、0． 50、1． 00、2． 00mg /ml) 作用 Caski细胞 24h后，采用MTT 法检测不同浓度的南赤瓟醇提物对 Caski细胞增殖率的影响;用
0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml的南赤瓟醇提物和紫杉醇 4 × 10-5mg /ml作用 Caski细胞 24h后，MTT 法检测其对细胞活力的影响，流式细
胞术和 Hoechst 33258 染色检测其对细胞凋亡的影响，实时定量 PCＲ和 Western blot检测 Survivin、Bcl-2、Bax的 mＲNA和蛋白表达，
并计算 Bcl-2 与 Bax的比值。结果:南赤瓟醇提物对 Caski细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物( 0． 25、0． 50 和
1． 00mg /ml) 和紫杉醇( 4 × 10-5mg /ml) 处理能显著抑制 Caski细胞增殖，促进其凋亡; 上调 Bax mＲNA和蛋白表达，下调 Survivin、Bcl-
2 mＲNA和蛋白表达及 Bcl-2 与 Bax的比值。结论: 南赤瓟醇提物可显著抑制 Caski细胞增殖，促进细胞凋亡，其作用机制可能与其
上调 Caski细胞 Bax mＲNA和蛋白表达，下调 Survivin、Bcl-2 mＲNA和蛋白表达及 Bcl-2 与 Bax 的比值有关。
关键词 南赤瓟醇提物;宫颈癌; Caski细胞;细胞凋亡
南赤瓟为葫芦科植物 Thldiantha nudiflora Hemsl．的根，具有
清热解毒、理气活血、泻热祛淤、消肿散结、止痢通乳之功效［1］，
主要用于痢疾、肠炎、虫蛇咬伤、痈肿、乳汁不通等疾病的防治。
在土家民间有将其根煮水饮用治疗宫颈癌的传统，在前期我们
相继证实其提取物可显著诱导 Hela细胞凋亡作用，并在裸鼠移
植瘤模型上发现其对 Caski细胞移植瘤的生长具有明显的抑制
作用［2 ～ 4］。本研究拟在此基础上，观察南赤瓟提提物对人宫颈
癌 Caski细胞抑制作用，并从 Survivin 基因表达与 Bcl-2 蛋白家
族关系探讨其可能的作用机制。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 南赤瓟药材购自神农架聚能药业有限公司，产
自神龙架林区，批号: 20131008。经天然产物研究与利用湖北省
重点实验室( 三峡大学) 汪鋆植教授鉴定为葫芦科植物 Thldian-
tha nudiflora Hemsl的干燥根。南赤瓟醇提取物的制备详见我们
前期研究［2］，实验时用二甲基亚枫( DMSO) 溶解南赤瓟醇提取
物样品，配制成浓度为 10mg /ml 的储备液，经 0． 22 μm 滤膜过
滤除菌后，用培养基配成相应的浓度，4℃保存备用。
1． 2 细胞 人宫颈癌细胞 Caski由中国医学科学院基础医学
研究所细胞资源中心提供。
1． 3 试剂 ＲPMI1640 培养基: 美国 Gibco公司;胎牛血清:杭
州四季青生物材料有限公司; HEPES、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑
盐 ( MTT ) 、二甲基亚砜 ( DMSO ) : 美国 Amresco 公司; Ho-
echst33258:碧云天生物技术研究所; Trizol、DEPC: 美国 Invitro-
gen公司;即用 PCＲ扩增试剂盒( Tap DNA Polymerase) : 生工生
物工程( 上海) 有限公司;反转录试剂盒( PrimeScript ＲT reagent
Kit) :日本 TaKaＲa 公司; Survivin、Bcl-2、Bax 以及 GAPDH 引物
( 上海生工生物工程有限公司合成) ; Survivin、Bcl-2、Bax 抗体，
美国 Santa Cruz公司; β-actin抗体，北京博奥森生物技术有限公
司;羊抗兔二抗，北京中杉金桥生物技术有限公司; 总蛋白抽提
试剂盒、ECL发光试剂盒、蛋白含量测定试剂盒，碧云天生物技
术研究所;其他试剂均为市售分析纯。
051 中药药理与临床 2015; 31( 4)
* 湖北省自然科学基金科研项目，项目号: 2013CFB224;宜昌市科学技术局项目，项目号: A13 － 302a － 14 ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.04.047