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溪黄草与桉树叶的体外抑菌试验
罗锦红
(惠东县动物疫病预防控制中心，广东惠东 516300)
中图分类号:S853． 75 文献标识码:B 文章编号:1002 － 5235(2016)02 － 0062 － 02
摘要:本试验应用琼脂平板打洞法、试管稀释法和平
板培养法测定溪黄草和桉树叶煎剂对大肠杆菌、金黄
色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌等
几种常见病原菌的体外抑制作用。结果显示，溪黄草
煎剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、枯
草芽孢杆菌、链球菌均显示高度敏感，最小抑菌浓度
(MIC)分别为 1 /80、1 /320、1 /160、1 /80、1 /80，最小杀
菌浓度(MBC)分别为 1 /80、1 /80、1 /160、1 /40、1 /80;桉
树叶煎剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆
菌、枯草芽孢杆菌、链球菌均显示高度敏感，最小抑菌
浓度(MIC)分别为 1 /80、1 /80、1 /40、1 /160、1 /40，最小
杀菌浓度(MBC)分别为 1 /80、1 /80、1 /10、1 /40、1 /20。
结果表明，溪黄草和桉树叶煎剂对常见的多种细菌均
有较强的抑菌作用。
关键词:中草药;煎剂;体外抑制试验;最小抑菌浓度
(MIC);最小杀菌浓度(MBC)
1 前言
长期食用含抗生素残留的肉蛋奶，很有可能会
引发疾病、耐药性或慢性中毒等现象 ［1，2］。而中草
药为天然药物，毒性低，副作用小，可避免西药的某
些不足［3］。因此，研究、开发中草药制剂，对造福
人类有不可忽视的价值。中草药具有消炎镇痛、抗
菌、抗毒素，调节机体免疫力、抗病毒、抗肿瘤作用，
以及其他如解热、抗寄生虫等方面的作用 ［4］。已
有免疫调节剂、免疫佐剂、抗生素替代品、抗应激添
加剂、对细菌内毒素的拮抗剂、防腐剂等制剂应
用［5］。本试验旨在发掘广东当地的抗菌中草药资
源，为其进一步开发与应用奠定研究基础。
2 材料与方法
2． 1 试验材料
2． 1． 1 待检药物 溪黄草:本品为唇形科香茶菜
属植物线纹香茶菜(Ｒabdosia lophantioides)的干燥
全草［6］。桉树叶:本品为桃金娘科植物桉(Euca-
lyptus robustus Smith)的干燥叶 ［7］。
2． 1． 2 供试药物的准备 溪黄草、桉树叶，分别加
水 100mL，先浸泡 40min ～ 60min，然后煮沸 30min
～ 40min，取滤液，药渣再加适量水，继续煎煮
30min左右，取滤液，合并两次滤液，再过滤，加热
浓缩至 1g /mL 浓度，用小三角烧瓶密封，灭菌备
用，置冰箱 4℃保存。
2． 1． 3 供试菌株的准备 大肠杆菌、金黄色葡萄
球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌。将菌
种接种在营养琼脂培养基上，放在 37℃培养箱中
恒温培养 24h，待菌种生长良好后，再取一环菌种，
接种到营养肉汤中。将接菌肉汤放在 37℃培养箱
26 广西畜牧兽医 2015 年 Vol． 32 (2)
中恒温培养 24h备用。
2． 1． 4 制备培养基 营养肉汤:按常规方法制备
(成分:蒸馏水 1 000 mL、蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯
化钠 5g)，高压灭菌备用。营养琼脂:按常规方法
制备(成分:营养肉汤 +琼脂 20g)，高压灭菌备用。
2． 2 方法与步骤
2． 2． 1 药物敏感性测定 采用常规药敏试验的平
板打洞法，用灭菌棉签沾取菌液，均匀涂布于琼脂
平板上，再用直径 6 ㎜的琼脂打孔器在接菌平板上
均匀打 5 孔，清除孔内琼脂并适当用火焰封闭孔
底。将各药液用无菌移液器加入孔内，以满而不溢
为宜并做好标记。放置 4℃冰箱中 1h 后取出，然
后置于 37℃培养箱中恒温培养 24h，观察结果。
结果判断标准:抑菌圈直径大于 15 ㎜为高度
敏感，10 ㎜ ～ 15 ㎜为中度敏感，小于 10 ㎜为耐药
性。
2． 2． 2 最小抑菌浓度(MIC)测定 采用试管 2 倍
稀释法，即取无菌试管 8 支，第 1 管加 1. 8 mL营养
肉汤，2 管 ～ 8 管各加 1mL 营养肉汤。以无菌操作
吸取已稀释好的药物 0. 2mL，加入到第 1 管中，混
匀后吸取 1mL加入第 2 管中，依次倍比稀释至第 7
管，第 7 管混匀后弃去 1mL，第 8 管不加药物为对
照组管。此时，试管里的药液浓度比依次为 1 /10，
1 /20，1 /40，1 /80，1 /160，1 /320，1 /640，0。依次用
微量加样器取菌液 0. 05mL 加到各管中混匀，置于
37℃恒温培养箱中培养 24h，观察结果。肉眼观
察，以药物最低浓度管中无细菌生长者为该药最小
抑菌浓度(MIC)。
2． 2． 3 最小杀菌浓度(MBC)测定 将 MIC 测定
中无细菌生长的肉汤接种到营养琼脂平板上，做好
记号，37℃培养 24h，肉眼观察结果，以仍无细菌生
长的药物浓度为该药的最小杀菌浓度(MBC)。
3 试验结果
3． 1 供试中药药物敏感度测定结果
药物敏感度测定结果见表 1。
表 1 药敏试验结果 单位:㎜
大肠杆菌
金黄色
葡萄球菌
蜡状芽
孢杆菌
枯草芽
孢杆菌
链球菌
溪黄草 16 17 19 16 16
桉树叶 22 22 17 20 16
3． 1． 1 溪黄草 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状
芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌均高度敏感。
3． 1． 2 桉树叶 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状
芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌均高度敏感。
3． 2 最小抑菌浓度(MIC)测定结果
根据琼脂平板打洞法，溪黄草和桉树叶具有明显
的抑菌作用，对其进行了 MIC 测定，结果显示溪黄
草对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链球菌的 MIC 为 1 /
80，对金黄色葡萄球菌的 MIC 为 1 /320，对蜡状芽
孢杆菌的 MIC为 1 /160。桉树叶对大肠杆菌、金黄
色葡萄球菌的 MIC 为 1 /80，对枯草芽孢杆菌的
MIC为 1 /160，对链球菌、蜡状芽孢杆菌的 MIC 为
1 /40。详见表 2。
表 2 最小抑菌浓度(MIC)试验结果
溪黄草 桉树叶
大肠杆菌 1 /80 1 /80
金黄色葡萄球菌 1 /320 1 /80
枯草芽孢杆菌 1 /80 1 /160
链球菌 1 /80 1 /40
蜡状芽孢杆菌 1 /160 1 /40
3． 3 最小杀菌浓度(MBC)测定结果
3． 3． 1 溪黄草 对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链
球菌的 MBC 为 1 /80，对枯草芽孢杆菌的 MBC 为
1 /40，对蜡状芽孢杆菌的 MBC 为 1 /160。详见表
3。
3． 3． 2 桉树叶 对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的
MBC为 1 /80，对枯草芽孢杆菌的 MBC 为 1 /40，对
链球菌的 MBC 为 1 /20，对蜡状芽孢杆菌的 MBC
为 1 /10。详见表 4。
表 3 溪黄草的最低杀菌浓度(MBC)试验结果
1 /10 1 /20 1 /40 1 /80 1 /160 1 /320 1 /640 0
大肠杆菌 － － － － + + + +
金黄色葡萄球菌 － － － － + + + +
枯草芽孢杆菌 － － － + + + + +
链球菌 － － － － + + + +
蜡状芽孢杆菌 － － － － － + + +
注:“ －”表示无细菌生长，“ +”表示有细菌生长。
表 4 桉树叶的最低杀菌浓度(MBC)试验结果
1 /10 1 /20 1 /40 1 /80 1 /160 1 /320 1 /640 0
大肠杆菌 － － － － + + + +
金黄色葡萄球菌 － － － － + + + +
枯草芽孢杆菌 － － － + + + + +
链球菌 － － + + + + + +
蜡状芽孢杆菌 － + + + + + + +
注:“ －”表示无细菌生长，“ +”表示有细菌生长。
4 讨论与小结
4． 1 讨论
4． 1． 1 本试验采用了高压蒸汽灭(下转第 86 页)
(本栏责任编辑 邹优敬)
36广西畜牧兽医 2015 年 Vol． 32 (2)
高，因此应及时治疗。
这些母猪更容易因死胎、胎衣碎片、恶露滞留
子宫而发生子宫内膜炎，因此要特别注意以上 5 类
母猪子宫内膜炎的防治。
2 防冶方法
针对以上母猪可能发生子宫内膜炎情况推出
一套有效解决方案:宫炎百病消 +姆宝康。
2． 1 分娩过程中或者母猪胎衣排出后，注射宫炎
百病消 20mL，隔 8 小时 ～ 12 小时后再注射一次
20mL。
2． 2 母猪分娩完成后喂食时，可用姆宝康半袋，每
天两次，连续喂两天。如此处理，可极大减少能繁
母猪患上子宫内膜炎的风险，同时，有利于母猪产
后恢复，提高产奶量也有很大帮助。
(本栏责任编辑 覃树华
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
)
(上接第 63 页)菌法，或许会使某些中草药煎剂的
部分药理活性降低［8］。
4． 1． 2 在做药敏试验时，桉树叶煎剂对各细菌的
抗菌效果比溪黄草的明显，即抑菌圈较大，但在做
MIC、MBC时，效果却不如溪黄草。观察发现桉树
叶在冰冻保存的过程中形成较多的沉渣，降低了有
效成分的浓度，影响试验效果。
4． 1． 3 中草药的品种、炮制和采收季节不同，可能
所含抗菌有效成分不同，从而影响抗菌效价，导致
与理论抗菌效价存在一定的差异［9］。
4． 1． 4 本试验部分中草药在体外没有抗菌作用不
代表在体内没有临床效果，有专家报道［10］，中草药
抗菌作用与临床实用方面存在异同。同理，本试验
所得的结果乃体外抑菌试验的结果，药物进入动物
体内是否能达到预期的效果，其抑菌效果会增强还
是减弱，仍有待进一步研究。
4． 1． 5 本试验在做第一步骤平板打洞法时，将待
检药液滴于孔内，以满而不溢为宜，但往往在实际
操作时很难把握那个量，一不小心就会溢出，导致
孔口边缘不清晰而影响试验效果。
4． 1． 6 在做 MIC、MBC 试验时，除菌液对照外，还
应设置一个空白对照 (普通培养基不接种)及药液
对照 (最低浓度药液平板不接种)，以说明培养基
及药液有无污染;菌液对照五种细菌均正常生长，
说明五株细菌及培养基均正常，使试验更严密。
4． 1． 7 因药液的化学成分或生物活性有可能在高
温高压的条件下发生变性，故制备供试药液时应尝
试多种除菌方法，以尽量避免有效成分的变化。
4． 2 小结
应用琼脂平板打洞法、试管稀释法和平板培养
法测定溪黄草和桉树叶煎剂对金黄色葡萄球菌、大
肠杆菌、链球菌、蜡状芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌几种
常见的病原菌的体外抑制作用，结果显示溪黄草、
桉树叶对供试菌均有不同程度的抑菌作用。
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