全 文 :毛大丁草根为菊科帚菊木族大丁草属植物毛大
丁草Gerbera piloselloides(L.)的根及根茎,产于云
南、贵州等地〔1-2〕。主治:清热解毒,理气和血〔2〕。治感
冒发热,咳嗽多痰,用小一枝箭根6~15 g水煎服〔3〕。
《贵阳民间药草》记载毛大丁草一两,蒸蜂蜜吃治咳
嗽哮喘。遵义药理学组〔4〕研究表明毛大丁草水煎剂
具有镇咳、祛痰的作用。唐小江等〔5〕研究表明毛大
丁草根部的红色挥发性油状成分具有止咳、祛痰作
用。张世武等〔6〕研究表明毛大丁草对组胺诱导的豚
鼠窒息有抑制作用。目前,国内尚未见毛大丁草根水
煎剂镇咳、祛痰、平喘作用的研究报道,为此我们研
究了毛大丁草根水煎剂对受试动物的镇咳、祛痰、平
喘作用,为更好的开发利用毛大丁草根提供一定科
学依据。
1 材料
1.1 动物 KM种小鼠,清洁级,雌雄各半,体重18~
22 g,由昆明医科大学实验动物中心提供,生产许可
证号:SCXK(滇)2011-0004。豚鼠,普通级,雌雄各
半,体重300~320 g,由大理学院实验动物中心提供。
1.2 药品与试剂 25~28%氨水(上海试剂三厂,批
号:090219);苯酚红(上海试剂三厂,批号:850903);
碳酸氢钠(天津市博迪化工有限公司,批号:
毛大丁草根水煎剂对受试动物的镇咳、祛痰、平喘作用
郭美仙,胡亚婷,陆翠芬,柳 斌,陈光勇*
(大理学院药学与化学学院,云南大理 671000)
[摘要]目的:观察毛大丁草根水煎剂对受试动物的镇咳、祛痰、平喘作用。方法:采用氨水诱咳法分别观察毛大丁草根水煎剂对
小鼠咳嗽次数及咳嗽潜伏期的影响;酚红排泌法检测毛大丁草根水煎剂对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响;离体气管法观察毛大
丁草根水煎剂对乙酰胆碱(Ach)、组胺(His)诱导的豚鼠离体气管平滑肌收缩的影响。结果:毛大丁草根水煎剂可减少小鼠咳嗽
次数、延长咳嗽潜伏期;可增加小鼠呼吸道酚红排泌量;可降低Ach、His诱导的豚鼠离体气管平滑肌的收缩张力。结论:毛大丁草
根水煎剂对受试动物具有镇咳、祛痰、平喘作用。
[关键词]毛大丁草根;水煎剂;镇咳;祛痰;平喘
[中图分类号]R285.5 [文献标志码]A [文章编号]1672-2345(2013)06-0001-04
Effect of Gerbera piloselloides Decoction on Preventing Cough, Eliminating Phlegm and Relieving Asthma on Mice
GUO Meixian, HU Yating, LU Cuifen, LIU Bin, CHENG Guangyong*
(College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)
〔Abstract〕Objective: To observe the effects of antitussive, expectorant and anti-asthmatic of Gerbera piloselloides(L.)cass root on
the experimental animals. Methods: Mouse cough model was induced by ammonia water, the times and incubation period of cough on
mice was recorded. The phenol red excretion test was applied to detect the amount of phenol red excreted by respiratory tract, and the
guinea pig tracheal in vitro was adopted to record the effect of contractive tension of the isolated tracheal smooth muscle induced by
acetylcholine(Ach)and histamine(His). Results: Data showed that the decoction extracted from the Gerbera piloselloides(L.)cass
root could reduce the cough times, prolong the cough incubation period of the mice, increase the amount of phenol red excreted by
respiratory tract; and reduce the tension of contraction of isolated tracheal smooth muscle induced by Ach and His. Conclusion: The
water decoction from Gerbera piloselloides(L.)cass root has effects of preventing cough, eliminating phlegm and relieving asthma on
experimental cough animal.
〔Key words〕Gerbera piloselloides(L.)cass root; water decoction; antitussive; expectorant; anti-asthmatic
[DOI]10. 3969 / j. issn. 1672-2345. 2013. 06. 001
大理学院学报
JOURNALOFDALIUNIVERSITY
第12卷 第6期 2013年6月
Vol.12 No.6 Jun. 2013
1
20060217);急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药有限
公司,批号:11010035);磷酸组胺(His),(上海如吉
生物科技发展有限公司,批号:100703);氯化乙酰胆
碱(Ach),(上海三爱思试剂有限公司,批号:
20061130);氨茶碱(广州白云山明兴制药有限公司,
批号:20080512);医用氧气(纯度>95%,大理制氧
厂);克氏液(K-H液)〔7〕:NaCl 6.9 g,KCl 0.35 g,
CaCl2 0.28 g,KH2PO4 0.16 g,MgSO4·7H2O 0.29 g,
NaHCO3 2.10 g,葡萄糖 2.00 g,CaCl2另溶,加蒸馏水
至1 000 mL,通氧30 min。
1.3 仪器 JH-2肌张力传感器(航天工程医学工程
研究所);HW-400S恒温平滑肌槽(成都泰盟科技有
限公司);BL-420E+生物机能实验系统(成都泰盟科
技有限公司);YP3001N电子天平(上海精密科学仪
器有限公司);721分光光度计(上海第三分析仪器
厂);XK96-A快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有
限公司)。
1.4 样品 样品采自云南省大理市凤仪镇,经大理
学院生药学周浓副教授鉴定为菊科大丁草属植物毛
大丁草Gerbera piloselloides(L.)的根。将根(生药)洗
净,晾干,粉碎,取生药200 g,加蒸馏水1 000 mL,煎
煮30 min,过滤除渣,浓缩至500 mL(生药浓度
40%),4 ℃冰箱保存备有。临用时用蒸馏水稀释成
20%、10%的水煎剂〔4〕。
2 方法
2.1 镇咳试验 预热超声雾化器后,加入现配的
13%氨水50 mL,将小鼠放入1 000 mL的烧杯中,烧
杯口用保鲜膜密闭,并开两个口(其一用于插入超声
雾化器出口管,另一为通风小孔)。将超声雾化器以
最大喷雾力度(MAX)持续通入氨气60 s后,立即关
闭并迅速打开保鲜膜,使其中氨气自然扩散。在通入
氨气的同时,观察并记录3 min内小鼠的咳嗽次数
(咳嗽表现:小鼠腹肌收缩,同时张大嘴,有咳嗽声)
和咳嗽潜伏期(首次开始咳嗽的时间)〔5,7〕。
取筛选合格(标准:咳嗽潜伏期小于15 s或大于
50 s者均淘汰,3 min内咳嗽次数少于10次或大于80
次者均淘汰)的小鼠60只,随机分为5组,每组12只;
蒸馏水组,急支糖浆组,毛大丁草根水煎剂不同剂
量组(生药量2.00、4.00、8.00 g/kg),各组小鼠分别以
20 mL/kg的相应药物连续灌胃14 d,1次/d。末次给药
后1 h造模(方法同前),观察3 min内小鼠的咳嗽次
数和咳嗽潜伏期。
2.2 祛痰试验 称取酚红0.05 g,用1 mol/L NaOH
溶解后,加pH值8.95的生理盐水至100 mL,浓度为
500.00 ug/mL,然后逐级稀释成浓度为 250.00、
125.00、62.50、31.25 ug/mL的酚红溶液,在546 nm处
测定吸光度,以浓度(X)为横坐标,吸光度(Y)为纵
坐标作标准曲线(Y=13.25X-1.623 4,r=0.894 7)。取
小鼠60只,分组及给药同2.1。末次给药30 min后,各
小鼠腹腔注射0.5%酚红20 mL/kg,1 h后空气栓塞处
死动物,仰卧位固定于蛙板上分离气管(准备5 mL
的已编号试管,加入5% NaHCO3溶液1.5 mL)。用1
mL注射器吸取5% NaHCO3溶液0.5 mL,注入气管
内,反复来回冲洗呼吸道3次,最后1次将冲洗液收
集于相应编号试管内,按上述方法再重复2次。合并
冲洗液,离心(1 000 rpm,5 min),取上清于546 nm
处测定吸光度〔8〕。根据酚红标准曲线回归方程计算
其酚红浓度〔5,7-8〕。
2.3 平喘试验 取豚鼠20只,击头处死,自甲状软
骨下剪取全部气管,浸入通以5% CO2和95% O2混合
气体的克氏液中,剥离气管周围组织,将气管由一端
向另一端螺旋形剪成条状,每2~3个软骨环剪成1个
螺旋。放入盛有19.5 mL冷克氏液的恒温平滑肌槽中
(pH 7.4,37 ℃),其一端与肌张力传感器相连,另一
端与通气钩相连,持续通以5% CO2和95% O2混合气
体,给气管条基础张力2.00 g,记录曲线张力变化,每
20 min更换1次营养液。平衡60 min后,分别加入蒸
馏水、1.2×10-3 g/mL氨茶碱及毛大丁草根水煎剂2.0×
10-1、4.0×10-1、8.0×10-1 g/mL各0.5 mL,(终浓度分别
为氨茶碱3.0×10-5 g/mL、毛大丁草根水煎剂5.0×10-2 、
1.0×10-1、2.0×10-1 g/mL),孵育3 min,记录张力变化(给
药后张力);接着加入乙酰胆碱(Ach)1.0×10-2 g/mL或
组胺(His)1.0×10-2 g/mL各0.5 mL(终浓度分别为Ach
2.5×10-4 g/mL或His 2.5×10-4 g/mL),孵育5 min,记录
张力变化(给Ach后张力或给His后张力),用软件提
供的区间测量方法测量给药后、给Ach后、给His后
3 min的平均张力〔6-9〕。
3 数据统计
数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS17.0
大理学院学报总第 114期 医学
2
统计软件进行方差分析。
4 结果
4.1 毛大丁草根水煎剂对小鼠的镇咳作用 结果
显示(表1):与蒸馏水组比较,急支糖浆组小鼠咳嗽
潜伏期明显延长(P<0.01)、咳嗽次数明显减少(P<
0.05),表明造模成功;与蒸馏水组比较,毛大丁草根
水煎剂各剂量组小鼠咳嗽潜伏期明显延长(P<
0.01)、咳嗽次数明显减少(P<0.05,P<0.01)。结果表
明:毛大丁草根水煎剂能明显抑制氨水诱导的小鼠
咳嗽反应,且作用较急支糖浆显著。
表1 毛大丁草根水煎剂对氨水诱导的小鼠咳嗽
反应的影响(x±s,n=12)
注:与蒸馏水组比较:*P<0.05,**P<0.01;与急支糖浆组比较:
△△P<0.01。
4.2 毛大丁草根水煎剂对小鼠的祛痰作用 结果
显示(表2):与蒸馏水组比较,急支糖浆组小鼠酚红
排泌量明显增多(P<0.01),表明造模成功;与蒸馏水
组比较,毛大丁草根水煎剂中剂量组小鼠酚红排泌
量明显增多(P<0.05),高剂量组小鼠酚红排泌量明
显增多(P<0.01)。结果表明:毛大丁草根水煎剂能显
著增加呼吸道酚红排泌量,但作用不及急支糖浆。
表2 毛大丁草根水煎剂对小鼠呼吸道酚红
排泌量的影响(x±s,n=12)
注:与蒸馏水组比较:*P<0.05,**P<0.01;与急支糖浆组比较:
△P<0.05。
4.3 毛大丁草根水煎剂对豚鼠的平喘作用
4.3.1 毛大丁草根水煎剂对Ach诱导的豚鼠离体气
管平滑肌收缩张力的影响 结果显示(表3):与蒸馏
水组比较,氨茶碱组气管平滑肌给药后收缩张力明
显降低(P<0.05),给Ach后收缩张力明显降低(P<
0.01);与蒸馏水组比较,毛大丁草根水煎剂各剂量
组气管平滑肌给药后收缩张力无明显变化(P>
0.05),给Ach后收缩张力明显降低(P<0.05,P<
0.01)。结果表明:毛大丁草根水煎剂能显著抑制Ach
诱导的豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应,且有量效
关系,但作用不及氨茶碱。
表3 毛大丁草根水煎剂对Ach诱导的豚鼠离体
气管平滑肌收缩张力的影响(x±s,n=10)
注:与蒸馏水组比较 *P<0.05,**P<0.01;与氨茶碱组比较:△P<
0.05,△△P<0.01。
4.3.2 毛大丁草根水煎剂对His诱导的豚鼠离体气
管平滑肌收缩张力的影响 结果显示(表4):与蒸馏
水组比较,氨茶碱组气管平滑肌给药后收缩张力明
显降低(P<0.05),给His后收缩张力明显降低(P<
0.01);与蒸馏水组比较,毛大丁草根水煎剂各剂量
组气管平滑肌给药后收缩张力无明显变化(P>
0.05),给His后收缩张力明显降低(P<0.05,P<0.01)。
结果表明:毛大丁草根水煎剂能显著抑制His诱导的
豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应,且有量效关系,但
作用不及氨茶碱。
表4 毛大丁草根水煎剂对His诱导的豚鼠离体气管
平滑肌收缩张力的影响(x±s,n=10)
注:与蒸馏水组比较:*P<0.05,**P<0.01;与氨茶碱组比较:
△P<0.05,△△P<0.01。
分组
药物终浓度
/(g/mL)
给药后张力
/g
给 His后张力
/g
蒸馏水组 — 2.10 ± 0.20 2.72 ± 0.23
氨茶碱组 3.0×10-5 1.97 ± 0.15* 2.25 ± 0.14**
高剂量组 2.0×10-1 2.04 ± 0.16 2.38 ± 0.24**
低剂量组 5.0×10-2 2.05 ± 0.15 2.64 ± 0.19*△△
中剂量组 1.0×10-1 2.08 ± 0.23 2.47 ± 0.27**△
分组 给药剂量
咳嗽潜伏期
/s
咳嗽次数
/(次/min)
蒸馏水组 — 19.4 ± 2.9 60.6 ± 11.0
急支糖浆组 20 mL/kg 27.4 ± 4.0** 51.7 ± 6.8*
低剂量组 2.00 g/kg 30.3 ± 4.3** 50.2 ± 7.7*
中剂量组 4.00 g/kg 34.3 ± 5.3**△△ 38.5 ± 7.4**△△
高剂量组 8.00 g/kg 37.1 ± 4.1**△△ 31.3 ± 4.8**△△
分组 给药剂量 酚红排泌量/(μg/mL)
蒸馏水组 — 1.27 ± 0.29
急支糖浆组 20 mL/kg 1.80 ± 0.42**
低剂量组 2.00 g/kg 1.36 ± 0.40△
中剂量组 4.00 g/kg 1.55 ± 0.39*△
高剂量组 8.00 g/kg 1.75 ± 0.45**
分组
药物终浓度
/(g/mL)
给药后张力
/g
给 Ach后张力
/g
蒸馏水组 — 2.10 ± 0.15 2.65 ± 0.20
氨茶碱组 3.0×10-5 1.89 ± 0.13* 2.13 ± 0.17**
低剂量组 5.0×10-2 2.07 ± 0.15△ 2.55 ± 0.20*△△
高剂量组 2.0×10-1 2.03 ± 0.14△ 2.29 ± 0.16**△
中剂量组 1.0×10-1 2.01 ± 0.17△ 2.46 ± 0.21**△△
郭美仙,胡亚婷,陆翠芬,等 毛大丁草根水煎剂对受试动物的镇咳、祛痰、平喘作用 第 12卷总第 114期
3
5 讨论
咳嗽、咳痰、哮喘是呼吸系统疾病(如感冒、急慢
性气管炎、肺炎、哮喘、肺气肿等)较为常见的临床症
状。严重的咳嗽、咳痰、哮喘不仅妨碍人们的工作和
休息,而且威胁着人们的健康和生命。目前临床上常
用的镇咳、祛痰、平喘的药物有很多,然而绝大部分
的药物均有一定的副作用。中药镇咳、祛痰、平喘有
其独特的优势,疗效稳定,作用温和,副作用小。因此
镇咳、祛痰、平喘的中药研究开发也越来越受到人们
的重视。
氨水易挥发,吸入后对小鼠的鼻、喉和肺有刺激
作用,引起咳嗽。咳嗽潜伏期的长短、咳嗽次数的多
少,可以反应出小鼠咳嗽反应的轻重。给小鼠腹腔注
射酚红溶液后,酚红从小鼠呼吸道排泌出来,酚红排
泌量的多少可以反应出呼吸道分泌液量的多少,呼
吸道分泌液量增多有利于附着呼吸道黏膜的浓痰变
稀,容易从气道壁脱落,起到祛痰作用。气流受阻是
哮喘病理生理改变的核心,由于支气管平滑肌痉挛
收缩、气道黏膜下水肿、炎症细胞浸润、分泌物增多
造成气流受阻而使哮喘发作〔10〕,因此抑制支气管平
滑肌收缩,在一定程度上可以减轻哮喘发作。本研究
结果显示:毛大丁草根水煎剂可抑制氨水诱导的小
鼠咳嗽反应,明显延长咳嗽潜伏期、减少咳嗽次数;
可增加小鼠呼吸道酚红的排泌量;可抑制Ach、His诱
导的离体气管平滑肌的收缩,机制可能与其阻断胆
碱能受体和组胺受体有关。本研究结果表明:毛大
丁草根水煎剂对受试动物具有镇咳、祛痰、平喘作
用。
[参考文献]
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[基金项目]大理州科技局科研基金资助项目(2060402);大
理学院大学生科研基金资助项目(DXSKYY201123)
[收稿日期]2013-03-05 [修回日期]2013-03-22
[作者简介]郭美仙,实验师,主要从事中药药理学研究.
*通信作者:陈光勇,副教授.
(责任编辑 李 杨)
大理学院学报总第 114期 医学
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