全 文 ： ［收稿日期］ ２０１５－０３－２０；２０１５－０８－２７修回
［基金项目］ 河北省教育厅资助科研项目“北沙参内生真菌多样性及抗菌活性研究”（２０１１１０８）；廊坊师范学院重点学科项目“微生物学”
（２０１５００１）
［作者简介］ 侯晓强（１９７９－），男，副教授，博士，从事药用植物菌根生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｑｈｏｕ１９７９＠１２６．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）０９－０５１４－０１５７－０４
珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性
侯晓强１，２，明月梅１，乔 洁１，２，付亚娟１，２，刘 平１，贾 敏１
（１．廊坊师范学院，河北 廊坊０６５０００；２．河北省高校食药用菌应用技术研发中心，河北 廊坊０６５０００）
［摘 要］为探明珊瑚菜内生真菌的抑菌活性，采用植物组织分离法和分子鉴定法对珊瑚菜内生真菌进
行分离和鉴定，以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母为指示菌株，研究其抑菌活性。结果表明：分离
得到珊瑚菜内生真菌６８株，其中，２２个菌株具有抑菌活性，占内生真菌总数的３２．３５％，分别对金黄色葡萄
球菌（１７株）、大肠杆菌（６株）和白色假丝酵母菌（３株）具有抑制作用。经分子鉴定，此２２株真菌分属５目７
科８属１１种。珊瑚菜植物中存在多种抑菌活性内生真菌，为新型抑菌活性物质的发现奠定了基础。
［关键词］珊瑚菜；内生真菌；抑菌活性；真菌鉴定
［中图分类号］Ｓ５６７．２３ ［文献标识码］Ａ
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ Ｇｌｅｈｎｉａ
ｌｉｔｏｒａｌｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ＨＯＵ Ｘｉａｏｑｉａｎｇ１，２，ＭＩＮＧ Ｙｕｅｍｅｉ １，ＱＩＡＯ Ｊｉｅ１，２，ＦＵ Ｙａｊｕａｎ１，２，ＬＩＵ Ｐｉｎｇ１，ＪＩＡ Ｍｉｎ１
（１．Ｌａｎｇｆａｎｇ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｇｆａｎｇ，Ｈｅｂｅｉ ０６５０００；２．Ｅｄｉｂｌｅ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｆｕｎｇｉ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ，Ｌａｎｇｆａｎｇ，Ｈｅｂｅｉ ０６５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍＧ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ，ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ
ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍ Ｇ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ ｂｙ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔａｋｉｎｇ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ
ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ａｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ６８ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍＧ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ．Ａｎｄ ２２ｓｔｒａｉｎｓ（３２．３５％）ｏｆ ｆｕｎｇｉ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｄ ｔｏ ｆｉｖｅ
ｇｅｎｅｒａ，ｓｅｖｅｎ ｆａｍｉｌｉｅｓ，ｅｉｇｈｔ ｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ ｅｌｅｖｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｔｈｅｓｅ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｔｏ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（１７ｓｔｒａｉｎｓ），Ｅ．ｃｏｌｉ（６ｓｔｒａｉｎｓ）ａｎｄ Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ（３ｓｔｒａｉｎｓ）．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｌａｉｄ ｔｈｅ
ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｔｏ ｆｉｎｄ ｎｅｗ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｇｌｅｈｎｉａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ；ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｆｕｎｇａｌ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
珊瑚菜 （Ｇｌｅｈｎｉａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ Ｆｒ．Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｘ
Ｍｉｑ．）为伞形科植物，主要分布于山东、辽宁、河北、
江苏等地，生长于沿海沙地。其干燥根为传统中药
材北沙参，主要用于治疗肺热燥咳，劳嗽痰血，胃阴
不足，热病津伤，咽干口渴等病症［１］。由于珊瑚菜的
生境遭受破坏，野生资源十分稀少。１９９９年，珊瑚
菜被列为国家Ⅱ级重点保护野生植物［２］。近年来，
珊瑚菜引种、栽培技术日趋成熟，河北省安国市、山
东省莱阳市已成为北沙参药材的主产地。
植物在长期进化过程中与内生真菌形成共生关
系，内生真菌能够调控植物的生长发育，具有促生抗
逆等重要的生物学功能，并可以产生一些结构新颖、
具有抗菌活性的次生代谢产物［３］。内生真菌是继药
用植物之后又一新天然产物及抑菌活性物质的重要
来源，其中药用植物的内生真菌资源备受关注。毕
江涛等［４］研究发现，内生真菌在次生代谢过程中可
以产生与宿主相同或相似的生理活性物质。中药北
沙参含有香豆素类、聚炔类、糖苷和挥发油等化学成
分［５］，还含有很强的抗革兰氏阳性细菌活性的聚炔
类成分Ｆａｌｃａｒｉｎｄｉｏｌ［６］。珊瑚菜内生真菌是否也具
备产生抑菌活性物质的能力，目前，有关珊瑚菜内生
真菌抑菌活性的研究尚未见报道，相关研究对于珊
瑚菜内生真菌资源的发掘具有重要意义。为此，笔
者于２０１１年采用组织分离法从药用植物珊瑚菜的
根、茎和叶中分离纯化内生真菌，并对其抑菌活性进
行研究，以期为珊瑚菜内生真菌资源的开发利用提
供依据。
１ 材料与方法
１．１ 供试材料
１．１．１ 供试植物 珊瑚菜健康植株于２０１１年８
月采自河北省安国市，由廊坊师范学院侯晓强副教
授鉴定。大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ １．７９７）、金黄
色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ １．２４６５）和白色
假丝酵母菌（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ２．３９９０）购自中国普
通微生物菌种保藏中心。
１．１．２ 引物 ＩＴＳ１：５’－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴ－
ＧＣＧＧ－３’；ＩＴＳ４：５’－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴ－
ＧＣ－３’。
１．１．３ 培养基 １）ＰＤＡ培养基：马铃薯２００ｇ，葡
萄糖２０ｇ，琼脂１５ｇ，蒸馏水１ ０００ｍＬ，自然ｐＨ。
２）牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏３ｇ，蛋白胨１０ｇ，
贵州农业科学 ２０１５，４３（９）：１５７～１６０
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
氯化钠５ｇ，琼脂１５ｇ，蒸馏水１ ０００ｍＬ，ｐＨ ７．０～
７．２。３）酵母培养基：葡萄糖１０ｇ，蛋白胨１０ｇ，酵
母提取物５ｇ，琼脂１５ｇ，蒸馏水１ ０００ｍＬ，自然
ｐＨ。
１．２ 内生真菌的分离
珊瑚菜内生真菌的分离采用植物组织分离
法［７］。随机选取健康的珊瑚菜根、茎和叶，用自来水
洗净，切成１ｃｍ左右小段。用７０％乙醇浸泡３０ｓ，
无菌水冲洗１次，然后用０．１％的升汞溶液浸泡消
毒，根、茎、叶消毒时间分别为５ｍｉｎ、３ｍｉｎ、２ｍｉｎ，
无菌水冲洗３次。无菌条件下，将材料剪成０．２～
０．４ｃｍ小段，置于ＰＤＡ培养基上，２５℃黑暗培养。
待植物材料长出真菌菌丝，挑取菌丝先端接种至
ＰＤＡ培养基上，２５℃黑暗培养６～７ｄ，根据内生真
菌的菌落形态和显微形态特征，对内生真菌进行纯
化。
采用侵染率、分离率度量珊瑚菜样品中内生真
菌的丰度［８］。侵染率是样本中受内生真菌侵染的组
织块数占全部组织块数的百分率，能够反映出同一
植物的不同组织受内生真菌的侵染程度；分离率是
样本组织块中得到的菌株数占全部样本组织块数的
百分率，可以衡量植物组织中内生真菌的丰富程度
和每个组织块受多重侵染的频率。
１．３ 抑菌试验
内生真菌接种于ＰＤＡ培养基平板上，２５℃黑
暗培养７ｄ。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别接种
至液体牛肉膏蛋白胨培养基，３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ黑暗
培养２４ｈ。白色假丝酵母菌接种至液体酵母培养
基，２５℃、１６０ｒ／ｍｉｎ黑暗培养４８ｈ。用生理盐水分
别对 各 指 示 菌 菌 液 进 行 稀 释，浓 度 为 １０７ ～
１０８个／ｍＬ。
采用改进的菌饼法［９］进行抑菌试验。分别取稀
释的指示菌菌液０．１ｍＬ均匀涂布在相应的固体培
养基平板上，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别涂布
于牛肉膏蛋白胨培养基上，白色假丝酵母菌涂布于
酵母培养基上。用Φ５ｍｍ打孔器在内生真菌菌落
中央打孔，挑取菌饼放在指示菌平板上，菌饼培养基
的一面贴在指示菌培养基表面，每个指示菌平板放
５～６个不同的内生真菌菌饼。指示菌平板４℃放置
２４ｈ，待菌饼中的抑菌物质扩散后，分别置于相应的
培养条件下培养：大肠杆菌和金黄色葡萄球菌平板
３７℃黑暗培养４８ｈ，白色假丝酵母菌平板２５℃黑暗
培养４８ｈ，３次重复，分别测定抑菌圈直径。以抑菌
圈直径平均值作为抑菌活性强弱的指标：抑菌圈直
径＜１０ｍｍ，表明内生真菌抑菌活性弱；抑菌圈直径
介于１０～１５ｍｍ，表明抑菌活性中等；抑菌圈直
径＞１５ｍｍ，表明抑菌活性强。
１．４ 抑菌活性内生真菌的鉴定
依据ｒＤＮＡ的内部转录间隔区（ＩＴＳ）序列对抑
菌活性内生真菌进行分子鉴定。内生真菌基因组
ＤＮＡ采用柱式真菌基因组ＤＮＡ抽提试剂盒（上海
生工）提取，用引物ＩＴＳ１、ＩＴＳ４扩增ｒＤＮＡ ＩＴＳ全
序列［１０］。ＰＣＲ反应体系５０μＬ：２×ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ（上
海生工）２５μＬ，１０μｍｏｌ／Ｌ上下游引物各２μＬ，
５μｇ／ｍＬ ＤＮＡ模板１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ ２０μＬ。ＰＣＲ热
循环程序：９４℃预变性４ｍｉｎ，进入循环，９４℃变性
３０ｓ，５５℃复性３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，共３５个循环，
７２℃延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ产物送上海生工生物工程
有限公司测序。将不同真菌的ＩＴＳ序列在 Ｇｅｎ－
Ｂａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ分析，寻找与查询序列相似性
≥９５％的ｒＤＮＡ ＩＴＳ序列［１１］，用ＣｌｕｓｔａｌＸ ２．０．１１
软件［１２］进行全序列比对，用 ＭＥＧＡ ５．０软件［１３］进
行聚类分析，构建最大邻接树，获得与待测菌株聚在
同一分支且相似性最大的已知真菌，根据序列相似
性原则［１４］，进行菌种的鉴定。若相似性≥９９％，可
鉴定到种；相似性为９５％～９９％，可鉴定到属。
２ 结果与分析
２．１ 珊瑚菜内生真菌的分离
从表１可见，在１２７个珊瑚菜样品组织块中有
５１块受到内生真菌的侵染，从中共分离到内生真菌
６８株，分离率为５３．５４％。其中，根的内生真菌侵染
率为１４．０４％，分离出内生真菌９株，分离率为
１５．７９％；茎的内生真菌侵染率为３３．３３％，分离出
内生真菌１２株，分离率为４７．２２％；叶的内生真菌
侵染率为９１．１８％，分离出内生真菌４２株，分离率
为１２３．５３％。表明，珊瑚菜植物组织内存在丰富的
内生真菌，以叶片中分布最多，茎次之，根最少。
表１ 珊瑚菜不同植物组织内生真菌的侵染率和分离率
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍＧ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ
取样部位
Ｓａｍｐｌｉｎｇ ｐａｒｔ
组织块数／块
Ｔｉｓｓｕｅ ｎｕｍｂｅｒ
长菌块数／块
Ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｆｕｎｇａｌ ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ
菌株数／株
Ｓｔｒａｉｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ
侵染率／％
Ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
分离率／％
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅ
根 Ｒｏｏｔ ５７ ８ ９ １４．０４ １５．７９
茎Ｓｔｅｍ ３６ １２ １７ ３３．３３ ４７．２２
叶Ｌｅａｆ ３４ ３１ ４２ ９１．１８ １２３．５３
合计Ｓｕｍ １２７ ５１ ６８ ４０．１６ ５３．５４
２．２ 内生真菌的抑菌活性
从表２可见，珊瑚菜内生真菌中有２２株真菌至
少对１种指示菌具有抑菌活性，占内生真菌总数的
３２．３５％。其中，从根中得到４株具有抑菌活性的内
生真菌，占内生真菌总数的５．８８％；从茎中得到５
株，占内生真菌总数的７．３５％；从叶中得到１１株，
占内生真菌总数的１６．１８％。
有１７株真菌对金黄色葡萄球菌有不同程度的
抑制作用，菌株０１－Ｓ－２、０１－Ｓ－１３、０１－Ｌ－１３和０１－Ｌ－３５
的抑菌活性较强；有６株真菌对大肠杆菌有抑制作
用，分别为菌株０１－Ｒ－３、０１－Ｓ－１０、０１－Ｌ－２、０１－Ｌ－３、０１－
Ｌ－１２和０１－Ｌ－３１；有３株真菌对白色假丝酵母菌有
抑制作用，菌株０１－Ｓ－４和０１－Ｌ－３的抑制作用高于菌
株０１－Ｓ－１６。内生真菌菌株０１－Ｒ－３和０１－Ｌ－３１同时
·８５１·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
表２ 珊瑚菜不同菌株内生真菌对３株供试菌株的抑菌效果
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍＧ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｔｅｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
内生真菌
Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ
供试菌株
Ｔｅｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
金黄色葡
萄球菌
大肠杆菌 白色假丝
酵母菌
内生真菌
Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ
供试菌株
Ｔｅｓｔ ｓｔｒａｉｎｓ
金黄色葡
萄球菌
大肠杆菌 白色假丝
酵母菌
０１－Ｒ－１ ＋ － － ０１－Ｌ－２ － ＋ －
０１－Ｒ－２ ＋ － － ０１－Ｌ－３ － ＋ ＋＋
０１－Ｒ－３ ＋ ＋ － ０１－Ｌ－９ ＋＋ － －
０１－Ｒ－５ ＋ － － ０１－Ｌ－１２ － ＋ －
０１－Ｓ－２ ＋＋＋ － － ０１－Ｌ－１３ ＋＋＋ － －
０１－Ｓ－４ － － ＋＋ ０１－Ｌ－１７ ＋ － －
０１－Ｓ－６ ＋＋ － － ０１－Ｌ－２０ ＋ － －
０１－Ｓ－１０ － ＋ － ０１－Ｌ－２４ ＋＋ － －
０１－Ｓ－１３ ＋＋＋ － － ０１－Ｌ－２５ ＋＋ － －
０１－Ｓ－１４ ＋＋ － － ０１－Ｌ－３１ ＋ ＋ －
０１－Ｓ－１６ ＋ － ＋ ０１－Ｌ－３５ ＋＋＋ － －
注：－，无明显抑菌作用；＋，５ｍｍ＜Ф（抑菌圈直径）＜１０ｍｍ；＋＋，１０ｍｍ＜Ф＜１５ｍｍ；＋＋＋，Ф＞１５ｍｍ。
Ｎｏｔｅ：－，Ｗｉｔｈｏｕｔ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ；＋，５ｍｍ＜Ф（Ａｖｅｒａｇｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｃｉｒｃｌｅｓ）＜１０ｍｍ；＋＋，１０ｍｍ＜Ф＜１５ｍｍ；＋＋＋，
Ф＞１５ｍｍ．
表３ 珊瑚菜抑菌活性内生真菌ＩＴＳ序列的ＧｅｎＢａｎｋ比对
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｌｏｓｅｓｔ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ＧｅｎＢａｎｋ
菌株
Ｓｔｒａｉｎｓ
ＧｅｎＢａｎｋ比对（ＩＴＳ序列）
Ｂｌａｓｔ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ（ＩＴＳ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）
Ｃｌｏｓｅｓｔ ＢＬＡＳＴ ｍａｔｃｈ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． Ｉｄｅｎｔｉｔｙ／％
０１－Ｒ－１ Ｌｏｐｈｏｄｅｒｍｉｕｍ ｃｏｎｉｇｅｎｕｍ ＡＢ４７０８６４ １００
０１－Ｒ－２ Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ ｆｕｃｋｅｌｉｉ ＡＢ６６５３１４ １００
０１－Ｒ－３ Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ＫＭ２６５４５７ １００
０１－Ｒ－５ Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ ＪＸ８４５１３９ ９９
０１－Ｓ－２ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐ． ＫＭ０５１３９４ １００
０１－Ｓ－４ Ｍｕｃｏｒ ｓｐ． ＪＮ３１５０１９ ９９
０１－Ｓ－６ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ ＫＪ７２８６８０ １００
０１－Ｓ－１０ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｓｔｒａｇａｌｉ ＦＪ３７９５９１ １００
０１－Ｓ－１３ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ＫＭ２４６２３６ １００
０１－Ｓ－１４ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐ ＫＭ２１５６４６ １００
０１－Ｓ－１６ Ｐｈｏｍａｓｐ． ＨＱ８３２８１２ ９９
０１－Ｌ－２ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ ＫＦ８４１５４８ ９９
０１－Ｌ－３ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｔｒｉｆｏｌｉｉ ＡＦ４５１９０９ １００
０１－Ｌ－９ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｏｒｒｉ ＪＦ４２２７２７ １００
０１－Ｌ－１２ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ ＫＦ２８０４７４ １００
０１－Ｌ－１３ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ ＫＪ７１６８７６ １００
０１－Ｌ－１７ Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍｓｐ． ＫＦ３１３１１７ ９９
０１－Ｌ－２０ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐ ＫＪ９３５０２８ １００
０１－Ｌ－２４ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｔｅｎｕｉｓｓｉｍａ ＫＪ０８２１００ １００
０１－Ｌ－２５ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ ＪＸ０８１２６１ １００
０１－Ｌ－３１ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｓｐ． ＫＦ８８７１４５ １００
０１－Ｌ－３５ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ ＪＸ２９０１４０ １００
对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抑菌活性，菌株
０１－Ｓ－１６同时对金黄色葡萄球菌和白色假丝酵母菌
有抑菌活性，菌株０１－Ｌ－３同时对大肠杆菌和白色假
丝酵母菌有抑菌活性。
２．３ 抑菌活性内生真菌的鉴定
从表３可见，共有２２株抑菌活性内生真菌与匹
配菌株相似性≥９９％，其中，菌株０１－Ｒ－１、０１－Ｒ－２、
０１－Ｒ－３、０１－Ｒ－５、０１－Ｓ－６、０１－Ｓ－１０、０１－Ｓ－１３、０１－Ｌ－２、
０１－Ｌ－３、０１－Ｌ－９、０１－Ｌ－１２、０１－Ｌ－１３、０１－Ｌ－２４和０１－Ｌ－
２５、０１－Ｌ－３５等１５株内生真菌的分类地位与匹配菌
株一致，可鉴定到种；菌株０１－Ｓ－２、０１－Ｓ－４、０１－Ｓ－１４、
０１－Ｓ－１６、０１－Ｌ－１７、０１－Ｌ－２０和０１－Ｌ－３１等７株内生真
菌的匹配菌株只鉴定到属，因此，这７株内生真菌只
能鉴定到属。２２株抑菌活性内生真菌归属于５个
目７个科８个属１１个种，其中，交链孢属（Ａｌｔｅｒｎａ－
ｒｉａ）真菌为优势菌群，包括菌株０１－Ｓ－２、０１－Ｓ－６、０１－
Ｓ－１０、０１－Ｓ－１３、０１－Ｓ－１４、０１－Ｌ－２、０１－Ｌ－９、０１－Ｌ－１２、０１－
Ｌ－１３、０１－Ｌ－２０、０１－Ｌ－２４、０１－Ｌ－２５、０１－Ｌ－３１和０１－Ｌ－３５
等，占抑菌活性菌株的６３．６４％，占内生真菌总数的
２０．５９％。
从表２和表３可知，归属于同一个种的不同菌
株的抑菌谱及抑菌作用存在差异，可能是内生真菌
种下亚种的分化或株系间存在的差异，从而导致次
生代谢产物种类及产量的不同。Ｍａｐｐｅｒｓｏｎ等［１５］
在内生真菌Ｐｒｅｕｓｓｉａ ｉｓｏｍｅｒａ的抑菌活性研究中发
现，不同菌株的抑菌谱及抑菌作用存在差异。
３ 结论与讨论
研究从珊瑚菜植株中共分离到内生真菌６８株，
分离率为５３．５４％，其中具有抑菌活性的２２株内生
真菌，经分类鉴定归属于５个目７个科８个属１１个
种。在抑菌活性菌株中，交链孢属真菌为优势菌群，
·９５１·
侯晓强 等 珊瑚菜内生真菌的分离鉴定与抑菌活性
ＨＯＵ Ｘｉａｏｑｉａｎｇ ｅｔ ａｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ Ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍＧｌｅｈｎｉａ ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
占抑菌活性菌株的６３．６４％，占内生真菌总数的
２０．５９％。此８个属的真菌中，交链孢属真菌是常见
的植物内生真菌，能够产生多种抑菌活性物质，如，
萘骈－γ－吡酮（Ｎａｐｈｔｈｏ－γ－ｐｙｒｏｎｅ）类衍生物［１６］、Ａｌｔ－
ｅｎｕｓｉｎ［１７］、三萜皂苷［１８］等。Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｃｌａ－
ｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属、Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ 属和Ｐｈｏｍａ属的内生
真菌也可以产生抑菌活性物质，如Ｃ．ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉ－
ｏｉｄｅｓ可以产生 Ｃｏｌｅｔｏｔｒｉｃ ａｃｉｄ［１９］，Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ
ｓｐ．可以产生吡啶生物碱 Ａｓｐｅｒｎｉｇｒｉｎ［２０］和Ｂｒｅｆｅｌ－
ｄｉｎ Ａ［２１］，Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍｓｐ．可以产生α吡喃酮衍生
物Ｉｎｆｅｃｔｏｐｙｒｏｎｅｓ Ａ、Ｂ［２２］，Ｐ．ｌｉｎｇａｍ中可分离到
Ｐｈｏｍｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ和Ｐｈｏｍｅｎｏｌａｃｔｏｎｅ［２３］。另外，Ｌｏ－
ｐｈｏｄｅｒｍｉｕｍ、Ｃｏｎｉｏｔｈｙｒｉｕｍ 和Ｍｕｃｏｒ等３个属的
内生真菌虽未见有关其抑菌活性化合物的报道，但
其菌丝体或发酵液粗提物具有抑菌活性。如Ｌ．
ｃａｕｌｉｕｍ具有抑制大肠杆菌的作用［２１］，Ｃ．ｃａｒｔｅｒｉ具
有抑制白色假丝酵母的活性［２４］，Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．可以抑
制金黄色葡萄球菌［２５］。由此推测，珊瑚菜抑菌活性
内生真菌具有合成多种抑菌活性化合物的潜力，是
产生上述化合物还是产生其他类型的抑菌活性物
质？今后的研究将着重分离抗菌活性内生真菌的次
生代谢产物，进一步明确抑菌化合物的结构和特性。
这对于从药用植物珊瑚菜内生真菌中发现新型抗菌
素具有重要意义。
［参 考 文 献］
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ｇａｌ ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｍａｌａｙａｎ ｂｌｕｅ
ｐｉｎｅ（Ｐｉｎｕｓ ｗａｌｌｉｃｈｉａｎａ）［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｃｏｌｏｇｙ，
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鉴定与抗菌活性［Ｊ］．浙江工业大学学报，２０１１，３９
（１）：３９－４３．
（责任编辑：王 海）
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