全 文 ：［收稿日期］ 20121017(015)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(30973938)
［第一作者］ 徐钢，硕士，从事中药炮制工艺与原理研究，Tel:
15840655141，E-mail:526423695@ 163． com
［通讯作者］ * 贾天柱，教授，博士生导师，从事中药炮制原理
研究，Tel:0411-87586499，E-mail:jiatianzhu51 @
yahoo． com． cn
正交试验优选酒制狗脊的炮制工艺
徐钢1，鞠成国1，2，周远征1，张凡1，林桂梅1，贾天柱1，2*
( 1. 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600;
2. 辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:优选酒制狗脊的炮制工艺。方法:以原儿茶酸、原儿茶醛含量为综合评价指标，选择黄酒比例、浸润时间、
蒸制时间、闷润时间为考察因素，采用 L9(3
4)正交试验优选酒制狗脊的炮制工艺。结果:酒制狗脊最佳炮制工艺为每 100 kg
狗脊加 15 kg黄酒，室温闷润 2 h，武火蒸制 4 h后停火闷 4 h。结论:优化的酒制狗脊工艺节时、节能、合理可行。
［关键词］ 正交设计;酒制狗脊;原儿茶酸;原儿茶醛;炮制工艺
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)06-0015-04
Optimization of Processing Technology for Wine-steamed
Cibotium barometz by Orthogonal Test
XU Gang1，JU Cheng-guo1，2，ZHOU Yuan-zheng1，ZHANG Fan1，
LIN Gui-mei1，JIA Tian-zhu1，2*
(1. School of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China;
2. Chinese Materia Medica Processing Engineering Research Center of Liaoning Province，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To optimize processing technology of wine-steamed Cibotium barometz. Method:
Taking the content of protocatechuic acid and protocatechuic aldehyde as comprehensive evaluation index，with the
amount of wine，infiltration time，steaming time，moistening time as factors，L9 (3
4) orthogonal test was used
to optimize processing technology of wine-steamed C. barometz. Result:Optimal processing technology of wine-
steamed C. barometz was as following:plusing 15 kg rice-wine per 100 kg C. barometz， infiltrated for 2 h at
ambient temperature，steamed 4 h by high-heat，and then moistened 4 h. Conclusion:This optimized processing
technology was reasonable and practical with energy and time saving．
［Key words］ orthogonal design;wine-steamed Cibotium barometz;protocatechuic acid;protocatechuic
aldehyde;processing technology
狗脊始载于《神农本草经》，列为草部中品，具
有祛风湿、补肝肾、强腰膝的功效，用于治疗风湿痹
痛、腰膝酸软、下肢无力［1］。《雷公炮炙论》始记载
其炮炙方法:“凡修事，细剉了，酒拌，蒸，从巳至申，
出，晒干用”［2］。1988 年版《全国中药炮制规范》
(下文简称炮制规范)是取净狗脊片，加黄酒拌匀，
润透后置蒸笼内，用武火加热 4 ～ 6 h，停火，闷 6 ～ 8
h，取出干燥;每狗脊片 100 kg，用黄酒 15 kg［3］。
2010 年版《中国药典》的产地加工是切厚片，干燥，
为“生狗脊片”;蒸后晒至六、七成干，切厚片，干燥
为“熟狗脊片”;而正文所收载的炮制品则是砂烫狗
脊。近年来大多炮制研究均集中于烫狗脊［4-6］，对
酒制蒸狗脊的研究几乎无人问津。酒制蒸狗脊可增
强补肝肾、强腰膝的作用，在临床上应用颇多，如龟
鹿补肾丸、狗脊丸等，但其炮制工艺尚显繁琐，工艺
参数不够完善。本实验以狗脊中原儿茶酸、原儿茶
醛含量的综合评分为指标，采用正交试验优选酒制
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.06.028
狗脊的炮制工艺，为其推广应用提供参考。
1 材料
1100 系列高效液相色谱仪(Agilent 公司) ，
AE240 型 1 /10 万电子分析天平(瑞士 METTLER 公
司) ，FA1004B型电子天平(上海精密科学仪器有限
公司) ，DFT-100 型高速万能粉碎机(温岭市林大机
械有限公司)。
生品狗脊饮片购自安徽省亳州市安东药业，经
辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为蚌壳蕨类科植物
金毛狗脊 Cibotium barometz (L. )J. Sm. 的干燥根
茎。特制黄酒(即墨市古城春酒厂) ，原儿茶酸、原
儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所，批号分
别为 110809-200604，110810-201007) ，甲醇为色谱
纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 酒制狗脊的蒸制 根据炮制规范，选择黄酒用
量(每 100 kg 狗脊)、浸润时间、蒸制时间及停火后
闷制时间为考察因素，按 L9(3
4)正交表安排试验，
因素水平见表 1。取净狗脊片，置适宜容器内，加入
适量黄酒，用清水稀释至 40 mL，加至狗脊片中拌
匀，盖保鲜膜，密闭浸润，放入蒸锅内武火蒸制，停火
后闷制，取出干燥。
表 1 酒制狗脊炮制工艺正交试验因素水平
水平
A
黄酒用量
/倍
B
浸润时间
/h
C
蒸制时间
/h
D
停火闷制
时间 /h
1 0． 1 0. 5 4 0
2 0． 15 1 5 4
3 0． 2 2 6 8
2. 2 原儿茶酸、原儿茶醛含量测定
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取原儿茶酸对
照品 7. 92 mg，置 100 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻
度，精密吸取 10 mL，置 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释
至刻度。精密称取原儿茶醛对照品 20. 14 mg，置
100 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，精密吸取 1 mL，
置 50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密等量吸
取上述原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶液，制成含原儿
茶酸(7. 920 mg·L －1)和原儿茶醛(2. 014 mg·L －1)
的混合对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 每组样品各取 30 g，粉
碎，过三号筛，取样品粉末 1 g，精密称定，置具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇-1%冰乙酸(70 ∶ 30)溶液 25
mL，称重，超声提取 30 min，取出，放凉，称重，加上
述混合溶液补足减失的质量，滤过，过 0. 22 μm 微
孔滤膜，取续滤液备用。
2. 2. 3 色 谱 条 件 Agilent TC-C18 色 谱 柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-1%冰乙酸
溶液(5∶ 95) ，检测波长 280 nm，流速 1. 0 mL·min －1，
柱温 30 ℃，进样量 10 μL。见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. 原儿茶酸;2. 原儿茶醛
图 1 酒制狗脊 HPLC
2. 3 线性范围考察［7-8］
2. 3. 1 原儿茶酸 精密吸取原儿茶酸对照品溶液
1，4，6，8，10，12 μL，按上述色谱条件进行测定，以对
照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回
归方程 Y = 1 431. 6X － 2. 934 8(r = 0. 999 9) ，表明
原儿茶酸在 0. 007 92 ～ 0. 095 04 μg 呈良好的线性
关系。
2. 3. 2 原儿茶醛 精密吸取原儿茶醛对照品溶液
1，4，8，10，12，16 μL，按上述色谱条件进行测定，以
对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得
回归方程 Y = 3 771. 0X + 0. 484 9(r = 0. 999 9) ，表
明原儿茶醛在 0. 002 01 ～ 0. 032 22 μg 具有良好线
性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，连续
重复进样 6 次，每次 10 μL，按上述色谱条件测定，
结果原儿茶酸和原儿茶醛的峰面积积分值的 RSD
分别为 0. 52%，1. 25%，说明仪器精密度良好。
2. 5 重复性试验 取同一批样品 6 份，分别按
2. 2. 2 项下方法制备 6 份供试品溶液，按上述色谱
条件测定，结果原儿茶酸和原儿茶醛平均含量分别
为 0. 196，0. 045 8 mg·g －1，RSD 分别为 2. 21%，
1. 32%，说明方法重复性良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别
于制备后 0，2，4，8，12，20 h 进样，按上述色谱条件
进行测定，结果原儿茶酸和原儿茶醛的峰面积积分
值的 RSD分别为 1. 56%，1. 63%，说明供试品溶液
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2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013
在 20 h内基本稳定。
2. 7 回收率试验 取已知含量样品 0. 5 g，精密称
定，分别精密加入已知含量的原儿茶酸对照品溶液
12 mL和原儿茶醛对照品溶液 11 mL，按 2. 2. 2 项下
方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。结果原儿
茶酸平均加样回收率 100. 8%，RSD 1. 58%;原儿茶
醛的平均加样回收率 101. 3%，RSD 2. 30%，说明本
方法符合有关规定。
2. 8 酒制狗脊工艺优选［9］ 原儿茶酸、原儿茶醛
均为狗脊中指标性成分，前者含量较高，2010 年版
《中国药典》中以原儿茶酸为指标成分，而本试验中
发现二者在酒制狗脊中含量均明显增加，故综合评
分时将原儿茶酸权重系数定为 0. 6，原儿茶醛权重
系数定为 0. 4。综合指标 OD =(mAi × 0. 6 /mAmax +
mBi × 0. 4 /mBmax)× 100。试验安排及结果见表 2，方
差分析见表 3，交互作用见表 4。
表 2 酒制狗脊炮制工艺正交试验安排
No． A B C D
原儿茶酸
(mA)
/mg·g － 1
原儿茶醛
(mB)
/mg·g － 1
综合
指标
(OD)
1 1 1 1 1 0. 125 0. 055 68. 66
2 1 2 2 2 0. 145 0. 041 66. 70
3 1 3 3 3 0. 154 0. 050 74. 39
4 2 1 2 3 0. 140 0. 072 82. 41
5 2 2 3 1 0. 145 0. 043 68. 02
6 2 3 1 2 0. 198 0. 046 85. 63
7 3 1 3 2 0. 193 0. 035 83. 18
8 3 2 1 3 0. 137 0. 047 68. 17
9 3 3 2 1 0. 131 0. 059 72. 83
K1 69． 917 78． 083 74． 153 69． 837
K2 78． 687 67． 630 73． 980 78． 503
K3 74． 727 77． 617 75． 197 74． 990
R 8． 770 10． 453 1． 217 8． 666
表 3 酒制狗脊炮制工艺综合评分方差分析
方差来源 SS f MS F P
A 115. 73 2 57. 87 44. 51 ＜ 0. 05
B 209. 22 2 104. 61 80. 46 ＜ 0. 05
C(误差) 2. 60 2 1. 30 1. 00
D 114. 01 2 57. 00 43. 85 ＜ 0. 05
注:F0. 05(2，2)= 19. 0。
直观分析表明，各因素影响原儿茶酸和原儿茶
醛含量的主次顺序为 B ＞ A ＞ D ＞ C，以极值最小的
表 4 B与 A，C，D三因素交互作用
B
A C D
10 15 20 4 5 6 0 4 8
0. 5 68. 66 82. 41 83. 18 68. 66 82. 41 83. 18 68. 66 83. 18 82. 41
1 66. 70 68. 02 68. 17 68. 17 66. 70 68. 02 68. 02 66. 70 68. 17
2 74. 39 85. 63 72. 83 85. 63 72. 83 74. 39 72. 83 85. 63 74. 39
C因素为误差项进行方差分析，发现 A，B，D 因素均
具有统计学差异。对于因素 B，水平 1 与水平 3 接
近，但考虑其与其他三因素间的交互作用及实际情
况，确定采用水平 3。综合分析，确定最佳工艺组合
为 A2B3D2C1，即每 100 kg 狗脊加 15 kg 黄酒，室温
浸润 2 h，武火蒸制 4 h后，停火闷 4 h。测得同批生
品狗脊片中原儿茶酸、原儿茶醛含量分别为 0. 093，
0. 022 mg·g －1，与生品相比较，按优选工艺炮制后的
样品中，二者含量分别提高了 2. 1，2. 0 倍，说明酒制
狗脊中原儿茶酸和原儿茶醛含量均有显著增加。
2. 9 验证试验 取 3 批生品狗脊饮片(每批样品量
均为 500 g) ，按优选工艺进行 3 次验证试验，结果原
儿茶酸含量分别为 0. 198，0. 197，0. 195 mg·g －1;原
儿茶醛含量分别为 0. 044，0. 046，0. 045 mg·g －1;说
明优选的炮制工艺稳定可行。
3 讨论
本实验参照《中国药典》2010 年版中狗脊质量
标准内容，选取甲醇-1%冰乙酸(70 ∶ 30)为提取溶
媒，有效成分提取完全，且色谱峰分离良好，有效地
消除了杂质峰干扰。在流动相选择时，比较了甲醇-
水、乙腈-水、甲醇-冰乙酸、乙腈-冰乙酸等系统，最后
确定采用甲醇-1%冰乙酸溶液(5∶ 95)为流动相，既
保证不损伤色谱柱，又使原儿茶酸、原儿茶醛得到良
好分离，检测波长的选择参考了贾恒明等［10］的研
究，确定检测波长 280 nm。
在单因素试验考察时，发现净狗脊加黄酒浸润
2 h即可润透，且酒尽需约 3 h，但试验结果差别不
大;蒸制时间考察了 2，5，8 h，结果发现后两者远远
好于前者，但两者间差别不大;停火后闷时间考察过
程中发现停火后闷润 8 h，锅温基本恢复到室温;同
时发现各因素对饮片外观影响不大，故不将其列为
考察指标。
炮制规范中规定酒制狗脊炮制方法累计时长最
多可达 17 h，费时费工，且对于关键操作步骤及质量
好坏评价标准无明确规定。本实验优选的炮制工艺
仅需 10 h，较原有炮制规范缩短近一半时间，大大提
高了工作效率。试验中发现原儿茶酸、原儿茶醛含
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徐钢，等:正交试验优选酒制狗脊的炮制工艺
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
量较生品有所增加，推测其炮制原理可能与受热过
程中糖苷键断裂使原儿茶酸增加［11］及黄酒加入增
加了原儿茶醛溶出度有关。但蒸法与砂烫法究竟哪
个更好，还有待进一步研究。
［参考文献］
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［11］ 白桐菲 . 狗脊及炮制品化学成分研究［D］．大连:辽
宁中医药大学药学院，2008．
［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20121029(008)
［基金项目］ 吉林省科技计划项目(200905101)
［第一作者］ 高雅言，大专，实验师，从事中药炮制及中药制剂研究，Tel:0431-86045207
［通讯作者］ * 李超英，博士，教授，从事药物新型给药系统及中药新药研究，Tel:0431-86786969，E-mail:chaoying_li@ 126. com
茵陈蒿方传统与现代浸提方法对比
高雅言，孙盼盼，张超，李超英*
( 长春中医药大学，长春 130117)
［摘要］ 目的:对比茵陈蒿方传统与现代浸提方法，确定最佳提取工艺。方法:以茵陈蒿方传统煎煮法为基础，采用紫外
分光光度法，以总绿原酸、总环烯醚萜苷、总蒽醌及总多糖的综合评分为指标，通过单因素试验和正交试验优化茵陈蒿方的提
取工艺。结果:最佳提取工艺为加 12，8，6 倍量水提取 3 次，提取时间分别为 1，1，0. 5 h;再加 6 倍量 80%乙醇提取 2 次，每次
0. 5 h。结论:不同提取方法对茵陈蒿方有效成分含量有明显影响，两步提取法较其他方法更能充分提取其有效成分，且方法
稳定可行，为该方合理应用和进一步研究提供实验依据。
［关键词］ 茵陈蒿汤;有效组分或成分;传统煎煮;现代浸提
［中图分类号］ R283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)06-0018-05
Comparison of Traditional and Modern Extraction Methods
for Yinchenhao Prescription
GAO Ya-yan，SUN Pan-pan，ZHANG Chao，LI Chao-ying﹡
(Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China)
［Abstract］ Objective:To determine optimum extraction technology by comparing traditional and modern
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013