全 文 ：J Jining Med Univ , June 2011 , Vol.34 ,No.3
＊　济宁医学院 2008年青年科研基金资助项目
doi:10.3969/ j.issn.1000-9760.2010.06.003
山东肿足蕨总三萜化合物含量测定＊
张华丽　朱　军　高桂花
(济宁医学院药学院 ,山东日照 276826)
　　摘　要　目的　建立山东肿足蕨药材总三萜化合物的含量测定方法。方法　以齐墩果酸为对照品 , 以 5 %
香草醛-冰醋酸溶液 ,浓硫酸为显色系统 , 采用紫外分光光度法测定总三萜化合物含量。结果　齐墩果酸在 4.6
～ 73.6 μg/m l范围呈良好的线性关系(r=0.9984), 测定样品回收率为 100.6 %, RSD 为1.1 %。 结论　该法
简便 、快速 、灵敏 ,可作为测定山东肿足蕨药材三萜化合物的含量测定方法。
关键词　山东肿足蕨;总三萜化合物;含量测定;紫外分光光度法
中图分类号:R927.2　　文献标志码:A　　文章编号:1000-9760(2011)03-160-04
Determination of total triterpenes in Hypodematium sinense Iwatsuri
Z H ANG H ua-li , Z HU Jun ,GAOGui-hua
(Colleg e of Pharmacy , Jining Medical Univer sity , Rizhao 276826 , China)
Abstract:Objective　To establish a simple and accurate method for determination of total triterpenes in Hy-
podematium sinense Iwatsuri.Methods　With oleanolic acid as the standard the content of total triterpenes was
measured by spectrophotometry with 5% vanillin-glacial acetic acid solution and sulfuric acid as developing agent
and detected in Hypodematium sinense Iwatsuriand.Results　The calibration curve of oleanolic acid had good line-
ar relationship in the range of 4.6 ～ 73.6μg/ml(r =0.9984), and the average recovery was 100.6% with RSD
1.1%.Conclusion　The method is simple , easy and reproducible that could be used as determination of total trit-
erpenes in Hypodematium sinense Iwatsuri.
Key words:Hypodematium sinense Iwatsuki;Total triterpenes;Content determination;UV
　　山东肿足蕨(Hypodemat ium sinense Iw at-
suri),为金星蕨科肿足蕨属植物 ,生长于鲁西南的
山坡石缝中 ,民间俗称“治晕草” ,仅此一味药(全
药)水煎服 ,能治疗头晕 、恶心 、呕吐等症 ,为济宁医
学院于 20世纪 70 年代发现的新药用植物。经实
验证明 ,该药具有抑制肠平滑肌收缩 ,降低血压 ,抑
制中枢神经和抗乙酰胆碱等作用[ 1] 。进一步研究
发现 ,山东肿足蕨有明显的抗生育作用 ,对豚鼠离
体妊娠子宫平滑肌有明显的兴奋作用 ,对妊娠豚鼠
终止妊娠率为 94%[ 2] 。经初步临床实验 ,口服该
药的水煎剂 , 对美 尼尔氏综合征有效率为
95.11%,对胃神经官能症也有较高的疗效 ,对叶片
与叶柄分别测定 ,此种植物的叶片和叶柄所含化学
成分一致 ,皆含有黄酮甙 、植物甾醇 、三萜成分 、酚
性成分以及糖类 、鞣质 、油脂和中性树脂等[ 3-4] 。药
理研究证明 ,三萜类化合物具有广泛的生理活性 ,
有保肝 、抗肿瘤 、抗 HIV21及 HIV21蛋白酶活性 、
抗带状疱疹病毒 、增加免疫力 、抗生育等诸多功
效[ 5-6] ;而对于山东肿足蕨中三萜成分的研究 ,未见
报道 ,因此有必要对山东肿足蕨的三萜化合物进行
研究 。本文采用紫外分光光度法对山东肿足蕨药
材中的总三萜化合物含量测定方法进行研究。
1　材料与仪器
1.1　材料
1.1.1　药材　山东肿足蕨 ,采集于山东曲阜尼山 ,
经济宁医学院中药学教研室王建安老师鉴定为山
东肿足蕨(Hypodematium sinense Iw atsuri),去根
后干燥 ,将叶子和全草分别粉碎 ,留粗粉备用。
1.1.2　所用试剂　齐墩果酸标准品(中国药品生
物制品检定所), 氯仿 ,硫酸 , 冰乙酸 , 乙酸乙酯 ,
95%乙醇 ,香兰素等均为分析纯;蒸馏水 。BS110S
型电子分析天平(北京塞多利斯天平有限公司),
KQ-500DB型超声仪(昆山市超声仪器有限公司),
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济宁医学院学报 2011 年 6 月第 34卷第 3期
FW135型中药粉碎机﹙天津市泰斯特仪器有限公
司﹚ ,RE-52 AA 型旋转蒸发仪(上海嘉鹏科技有
限公司),电动吸引器(上海医疗器械工业集团公司
医用吸引器厂),电热恒温水浴锅(北京市长风仪器
仪表公司), TU-1901双光束紫外可见分光光度计
(北京普析通用仪器有限责任公司), Q-4110石英
狭缝比色皿(无锡本色环保科技有限公司)。
2　方法与结果
2.1　标准溶液的制备
精确称取烘至恒重的齐墩果酸对照品
0.0046g 于 10ml容量瓶中 ,用乙酸乙酯定容。
2.2　显色方法
本实验采用的显色方案为 5%香草醛-冰醋酸
0.5m l ,72%硫酸 5ml , 65℃恒温水浴加热 20min ,
冰水中静置 5min 。硫酸溶液(V/ V)的配置:取水
28m l ,加硫酸至 100ml ,香草醛溶液的配置为 0.5g
香草醛用 10ml冰醋酸进行溶解。
2.3　最佳检测波长的确定
精密量取齐墩果酸对照品溶液 1ml 于 10ml
容量瓶中 ,按显色方法项下显色 ,在 450 ～ 600 nm
波长范围内进行紫外全波长扫描 ,发现最大吸收波
长在 532 nm 处 ,故选择 532 nm 处作为检测波长 。
2.4　标准曲线的绘制
分别精密量取齐墩果酸标准溶液 0.0m l(空
白)、0.1m l 、0.4 ml 、0.8 ml 、1.2 ml 、1.6 ml 置于
10m l 具塞容量瓶中 , 即配成的溶液浓度为
0.0000mg/ml 、 0.0046mg/ml、 0.0184 mg/ml 、
0.0368 mg/ml、0.0552 mg/ml 、0.0736 mg/ml ,用
乙酸乙酯定容 ,按显色方法项下方法显色 ,以空白
为参比 , 于 532nm 波长处测定各溶液的吸光度
(A)。以浓度为横坐标 ,吸光度(A)为纵坐标 ,绘
制标准曲线(图 1),其回归方程为:A =6.6575C
+0.2925 ,R=0.9984 ,齐墩果酸在 4.6 ～ 73.6 μg/
ml范围呈良好的线性关系。
图 1 　标准曲线
2.5　供试品溶液的制备
精密称取山东肿足蕨药材5g 于 250ml锥形瓶
中 ,按料液比 1:12加入 70%的乙醇 60ml ,设定超
声条件(温度 40°C ,频率 80%),进行超声振荡提取
60min ,对超声后的样品进行抽滤 ,利用旋转蒸发
仪将滤液中的乙醇蒸出 ,温度在 57°C左右 ,后加入
10m l石油醚 ,转移至分液漏斗进行分液 ,取下层液
体 ,用旋转蒸发仪旋出水分 ,再分别向其中加入氯
仿和 0.1mol/ L 的盐酸各 20ml后 ,于 65°C 水浴中
回流 1.5h ,回流后的液体转移至分液漏斗中 ,静置
分液 ,取下层液体 , 用氯仿洗涤两次 , 每次用量
10m l ,然后合并滤液 ,用旋转蒸发仪旋蒸出氯仿 ,
用乙酸乙酯 10m l溶解储存 ,既得 。
2.6　精密度试验
分别精确称取山东肿足蕨药材 5g 于 5 个
250ml的锥形瓶中 ,按供试品制备项下方法处理 ,
由所得样品溶液中移取 2ml 溶液于 25ml 容量瓶
中 ,按显色方法项下方法显色 ,于 532 nm 波长处
测定其吸光度(A),结果见表 1。 RSD%=0.91%
(n=5),表明本法精密度良好 ,仪器稳定性较好 。
表 1 　精密度试验结果
A 三萜化合物含量(mg/ g) RSD(%)
0.711 1.5715
0.705 1.5490
0.709 1.5640 0.91 %
0.695 1.5115
0.701 1.5340
2.7　稳定性试验
精密移取供试品溶液 2ml 溶液于 25ml 容量
瓶中 ,用乙酸乙酯定容 ,按显色方法项下方法进行
显色 ,于 532 nm 波长处测定其吸光度(A),结果见
表 2。计算结果得 RSD%=0.75%(n=6), RSD%
=1.46%(n=7),因为当 n=7时 , RSD>1 ,以其稳
定性不好 ,因此供试品液显色后在 60min 内稳定
性良好 ,也可说明三萜显色后在 60min 测定效果
较好 。
表 2 　稳定性试验结果
试验时间(min) A RSD(%)
0min 0.711
20min 0.711
30min 0.709
40min 0.705 0.75 %
50min 0.702
60min 0.698
70min 0.682
(下转第 164页)
161
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(收稿日期　2011-04-15)
(上接第 161页)
2.8　加标回收率试验
分别精确称取山东肿足蕨药材 5g 于 5 个
250m l的锥形瓶中 ,按供试品制备项下方法处理 ,
由所得样品溶液中移取 2.00ml溶液于 25m l容量
瓶中 ,精密量取对照品溶液 2.00ml ,用乙酸乙酯定
容 ,按显色方法项下方法进行显色 ,于 532 nm 波
长处测定其吸光度 。计算回收率。实验结果见表
3。平均回收率为 100.6%, RSD为 1.1%。
表 3 　回收率试验结果
样品含量
(mg/ml)
加入标准量
(mg)
测得含量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
0.7858 9.2 9.2276 100.3
0.7745 9.2 9.2460 100.5
0.7820 9.2 9.1900 99.89 100.6 1.1
0.7558 9.2 9.4300 102.5
0.7670 9.2 9.1632 99.60
2.9　样品的测定试验
分别精密称取 8月份与 11月份山东肿足蕨全
草与叶子粉末 5g 各 3份于 250m l锥形瓶中 ,依次
编号 1 、2 、3 ,按供试品制备项下方法处理 ,然后由
提取分离所得的样品中分别移取 2m l转移至 25ml
容量瓶中 ,按显色方法项下显色 ,以空白试剂为参
比 ,于 532nm 处测吸光度。以标准曲线法计算含
量 ,结果见表 4。
表 4 　样品含量测定结果
药材 1 含量(mg/ g)
2 含量
(m g/ g)
3 含量
(mg/ g)
平均含量
(mg/ g)
8 月份全草 1.5715 1.5227 1.6053 1.5678
8 月份叶子 1.7330 1.7105 1.7405 1.7293
11 月份全草 1.5227 1.4814 1.5002 1.5002
11 月份叶子 1.6729 1.6804 1.7067 1.6879
3　讨论
本文采用单因素试验及正交试验法考察了山
东肿足蕨中总三萜化合物的提取的最佳方案 。确
定料液比为 1:12 ,乙醇浓度为 70%,超声时间为
60min为最佳提取条件。
试验中以 5%香草醛-冰醋酸溶液 ,浓硫酸为
显色系统 ,采用紫外分光光度法测定山东肿足蕨中
总三萜化合物含量 ,显色剂为 5%香草醛-冰醋酸
和浓硫酸 ,此显色剂必须现配现用 ,而且在进行紫
外测量时 ,全过程最好控制在 1h 之内 ,否则显色效
果不好 ,会影响实验结果 。
结果显示 8 月份山东肿足蕨中总三萜化合物
含量要比 11月份含量高 ,而且相同质量的叶中三
萜化合物含量比全草的含量高 ,所以 8月份采集山
东肿足蕨要比 11月份采集合适。
本试验为山东肿足蕨中总三萜化合物首次含
量测定 ,为该植物的科学合理开发提供了理论依
据。但是三萜化合物种类繁多 ,仅测定总三萜含量
远远不够 ,有必要对其三萜化合物成分进行进一步
的研究和开发 。
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