全 文 ：济宁医学院学报 2010 年 2 月第 33卷第 1期
doi:10.3969./ j.i ssn.1000-9760.2010.01.004
山东肿足蕨总黄酮含量测定
高桂花 朱 军 张华丽
(济宁医学院药学院 ,山东 日照 276826)
摘 要 目的 建立山东肿足蕨药材总黄酮的含量测定方法。方法 以山东肿足蕨为原料 , 采用紫外分光
光度法 ,以芦丁为对照品 , 用亚硝酸钠- 硝酸铝- 氢氧化钠比色法测定总黄酮含量。 结果 芦丁在 11.56 ～
57.60μg/ ml范围内线性关系良好(r=0.9998), 平均回收率为 99.5 %, RSD 为2.9 %。结论 该方法简便快
速 ,可用于山东肿足蕨总黄酮的含量测定。
关键词 山东肿足蕨;总黄酮;含量测定;紫外分光光度法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1000-9760(2010)02-011-02
Determination of total flavonoids in hypodematium sinense Iwatuki.
GAO Gui-hua , ZHU J un , Z H ANG H ua-li
(Schoo l o f Pharmacy , Jining Medical Univ ersity , Rizhao 276826 , China)
Abstract:Objective To establish a UV method for the determination of total flavonoids in Hypodematium
sinense Iwatuki.Methods Using Hypodematium sinense Iwatuki as control materials , the content of the fla-
vonoids in Hypodematium sinense Iwatuki.was determined by colourimetry with the NaNO2 - Al(NO3)3 -NaOH
coloration system.Results The linear range of Rutosids was 11.56 ～ 57.60μg/ml(r=0.9998);and the average
recovery was 99.5% with RSD 2.9%.Conclusion The method is simple and can be used as determination of to-
tal flavonoids in Hypodematium sinense Iwatuki.
Key words:Hypodematium sinense Iwatuki.;Total flavonoids;Content determination;UV
山东肿足蕨(Hypodematium sinense Iw atu-
ki)为金星蕨科肿足蕨属植物 ,分布于山东地区 ,民
间用于治疗头晕恶心呕吐 ,为济宁医学院于 20世
纪 70年代发现的新药用植物 。凌秀珍等对其药理
作用进行了初步探讨[ 1] ,并有报道称其对美尼尔氏
综合征有较好的治疗作用[ 2] , 并具有抗生育作
用[ 3] 。其化学成分主要有对苯二甲酸二甲酯[ 4] 、肿
足蕨碱[ 5] 等 ,未见对山东肿足蕨中黄酮类化合物的
报道 。现代医学对植物中广泛存在的黄酮化合物
的研究表明 ,黄酮类化合物具有明显的抗溃疡 、解
痉 、抗炎 、抗菌 、抗氧化 、抗衰老 、增强免疫力 、软化
血管 、降血糖及降血脂等生理活性用[ 6 , 7] ;而蕨类
植物中含有大量的黄酮类化合物 ,因此有必要对山
东肿足蕨的黄酮类化合物进行研究。本文采用紫
外分光光度法对山东肿足蕨药材中的总黄酮的含
量测定方法进行研究 。
1 材料与仪器
药材:山东肿足蕨 ,产于山东曲阜 ,秋季采收;
取其根及根茎进行测定 。
所用试剂:NaNO2 ,A l(NO 3)3 , NaOH 等均为
分析纯;对照品芦丁 (批号 F20020428)中国医药
上海化学试剂公司;乙醇为 95%医用酒精;蒸馏
水。KQ-50超声仪(昆山市超声仪器有限公司),
T U1901紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪
器有限责任公司), TB-215D 型电子天平(北京赛
多利斯仪器系统有限公司)。
2 方法与结果
2.1 标准溶液的制备
精密称取芦丁对照品 14.4mg ,置 50ml 量瓶
中 ,用 50%乙醇溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取山东肿足蕨药材 1.0g ,置 100ml 具
塞三角瓶中 ,加入 30m l 50%乙醇超声提取 2次 ,
每次 60min 。过滤 ,滤液置 100ml 量瓶中 ,用 50%
乙醇稀释至刻度 ,即得。
11
J Jining Med Univ , Feberuary 2010 , Vol.33 ,No.1
2.3 标准曲线的制备
精密量取上述标准溶液 0 、1.0 、 2.0 、 3.0 、
4.0 、 5.0ml ,分别置 25ml量瓶中 ,各加 50%乙醇
至 5ml;分别加 5%NaNO 2 溶液 1ml , 摇匀 ,放置
6min;分别加 10%A l(NO 3)3 溶液 1m l ,摇匀 ,放置
6min;然后分别加 4%NaOH 溶液 10ml并分别加
50%乙醇至刻度;摇匀 、静置 15min ,以空白试剂为
参比 ,于 510nm 测定吸收度 。以吸光度为纵坐标 ,
浓度为横坐标进行回归处理 ,得方程 A =0.0123C
+0.007(r =0.9998),芦丁在 11.56 ～ 57.6μg/ml
范围内线性关系良好 。
2.4 精密度实验
精密量取供试品溶液 2ml ,置 25ml量瓶中 ,按
标准曲线制备项下显色方法显色 ,以空白试剂为参
比 ,于 510nm 测定吸收度 ,连续测定 5次 ,其吸光
度的 RSD为 0.6%。
2.5 重复性实验
精密称取山东肿足蕨药材 5 份 ,每份 1.0g ,按
供试品制备项下制备供试品溶液 ,按标准曲线制备
项下显色方法显色 ,以空白试剂为参比 ,于 510nm
处测 定 吸光 度 , 计 算 含量 , 其 平均 含 量为
36.82mg/g , RSD为 1.3%。
2.6 稳定性实验
分别于 0 ,1 ,2 ,4 ,8 ,24h 取供试品溶液 2m l置
25m l量瓶中 ,按标准曲线制备项下显色方法显色 ,
以空白试剂为参比 ,于 510nm 处测定吸光度 。计
算 RE 值 ,其 RE 值在-1.9%～ -0.38%之间 ,表
明供试品溶液在 24h内稳定 。
2.7 回收率实验
精密称取山东肿足蕨药材 6 份 ,每份 0.5g ,精
密称取对照品适量 ,按供试品制备项下制备供试品
溶液 ,按标准曲线制备项下显色方法显色 , 于
510nm 处测定吸光度 。计算回收率 。结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
称样量(g) 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 均值(%) RSD(%)
0.5002 18.5 18.3 98.7
0.5000 18.6 18.1 97.2
0.5003 18.7 18.0 96.5
0.5010 18.0 18.8 104.3
0.4996 18.2 18.0 99.0
0.5015 18.4 18.6 101.0
99.5 2.9
结果:平均回收率为 99.5% , RSD%=
2.9%。
2.8 样品的测定实验
精密称取曲阜产 、嘉祥产以及邹城产山东肿足
蕨药材各 3份 ,每份 1.0g ,按供试品制备项下制备
供试品溶液 ,分别取各样品 2ml ,按标准曲线制备
项下显色方法显色 ,以空白试剂为参比 ,于 510nm
处测定吸光度 。以标准曲线法计算含量 ,结果见表
2。
表 2 样品测定结果
产地 含量(m g/ g)
曲阜 36.80
嘉祥 35.98
邹城 36.17
3 讨 论
本文采用单因素试验及正交试验法对山东肿
足蕨总黄酮的提取方法进行了考察 ,确定山东肿足
蕨总黄酮提取条件为:用 30倍量 50%乙醇超声提
取 2次 ,每次 60min。
另外 ,由实验数据可知 ,山东肿足蕨中含有大
量的黄酮类化合物 ,有必要对其黄酮类化合物进行
进一步的研究和开发。
参考文献:
[ 1] 凌秀珍 ,张洪祺 ,刘善庭 ,等.山东肿足蕨药理作用的初步研
究[ J].济宁医专学报 , 1978 , 1(1):31
[ 2] 王家英 ,张其祯.山东肿足蕨对美尼尔氏综合征与胃神经官
能症的治疗研究[ J].济宁医专学报 , 1978 , 1(1):24
[ 3] 山东肿足蕨抗生育作用研究协作组.山东肿足蕨抗生育作
用实验研究[ J].济宁医专学报 , 1981 , 4(1):1
[ 4] 陈亚民 ,王宁 ,魏莉莉 ,等.山东肿足蕨化学成分研究(Ι)[ J].
中草药 , 1986 , 18(3):18
[ 5] 陈亚民 ,王宁 ,卢英华 ,等.山东肿足蕨化学成分研究[ J].济
宁医学院学报 , 1991 , 14(2):10
[ 6] 国家医药管理局中草药中心情报站.药物有效成分手册
[ M].北京:人民卫生出版社 , 1986.
[ 7] 李槟榔.天然食用抗氧化物的研究进展[ J] .食品与发酵工
业 , 1990 ,31(4):17
(收稿日期 2009-12-19)
12