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收稿日期:2014-01-08; 修订日期:2014-06-09
基金项目:广东省科学自然基金(No． S2012010008163);
粤港合作自然科学基金(No． GHP /022 /06)
作者简介:吕应年(1975-)，男(汉族)，湖北应城人，华东理工大学化学与
分子工程学院在读博士研究生，主要从事天然活性产物研究工作．
* 通讯作者简介:牟伯中(1957-)，男(汉族)，上海人，华东理工大学化学
与分子工程学院教授，博士研究生导师，博士学位，主要从事生物物理化
学和界面物理化学的研究工作．
半边旗口服微乳剂的质量控制及稳定性研究
吕应年1，2，何宇辉2，田 乐2，牟伯中1*
(1．华东理工大学 化学与分子工程学院，上海 200203;
2．广东医学院广东天然药物研究与开发重点实验室，广东 湛江 524023)
摘要:目的 建立半边旗抗癌二萜 5F口服微乳剂的质量标准并考察稳定性。方法 采用液相色谱 －紫外检测法测定口
服微乳剂中有效成分 5F的含量，色谱条件为 Hypersil C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇∶ 水∶ 醋酸
(55∶ 45∶ 0． 045，V/V)流速 1． 0 ml·min －1，柱温 35℃，检测波长 242 nm。采用 4 000 r /min离心 5 h及 10 000 r /min高速
离心 20 min考察微乳剂的稳定性，采用长期静置法考察温度及光照对口服微乳剂稳定性的影响。结果 高效液相色谱法
测定 5F的含量在 0． 12 ～ 2． 4 μg·ml －1范围内线性关系良好，平均回收率为 92． 9%。高速离心对微乳稳定性无影响，温
度及光照条件下半边旗 5F口服微乳稳定性良好，未出现破乳、分层或析出现象。结论 实验建立的分析方法灵敏可靠，
可作为半边旗口服微乳剂的质量控制方法，半边旗口服微乳剂稳定性好。
关键词:半边旗; 二萜; 口服微乳剂; 含量; 稳定性
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 12． 034
中图分类号:Ｒ283 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2014)12-2899-03
Studies on Quality Control and Stability of PsL Oral Microemulsion
L Ying-nian1，2，HE Yu-hui2，TIAN Le2，MU Bo-zhong1*
(1． Chemistry and Molecular Engineering College，East China University of Science and Technology，Shanghai
200203，China;2． Guangdong Key Lab for Ｒesearch and Development of Natural Drugs，Guangdong Medical
College，Zhanjiang 524023，China)
Abstract:Objective To establish the quality standard of PsL oral microemulsion containing mainly 5F(ent － 11α － hydroxy － 15
－ oxo － kaur － 16 － en － 19 － oic － acid)，and to evaluate its stability． Methods The content was determined by HPLC． The col-
umn was Hypersil C18 (4． 6mm × 250mm，5 μm) ，the mobile phase was the mixture of methanol － water － acetic acid (55:45:0．
045，V/V)with a flow rate of 1． 0 mL·min －1，the detective wavelength was 242 nm，and the column temperature was main-
tained at 35℃ ． The factors such as centrifuge，temperature and light were adopted to evaluate the stability of the oral microeul-
sion． Ｒesults The linearity for 5F was obtained over the range of 0． 12 ～ 2． 4 μg·mL －1(r2 = 0． 9988)，the average recovery of
5F was 89． 8% ． The microemulsion was stable with no demulsification or delamination after centrifugation at 4000 r /min for 5h or
10000 r /min for 20 min，and it was also stable with a period of store under different temperature or microemulsion．
Conclusion the method of HPLC － UV was sensitive and reliable that can be used as quality control method of PsL5F oral microe-
mulsion． The stability of the oral microemulsion was good．
Key words:Pteris semipinnata L; Diterpenoid; Microemulsion; Concentration; Stability
半边旗属凤尾蕨科植物，广泛分布于中国南方各省，用于肝
炎、肠炎及毒虫咬伤等［1，2］。半边旗活性成分 Ent － 11α － hydroxy
－ 15 － oxo － kaur － 16 － en － 19 － oic － acid (简称 5F)是一种二萜
类化合物，分子中的 αβ －不饱和环戊酮结构是发挥抗肿瘤作用
的重要基团［3，4］，目前在治疗非小细胞性肺癌(NSCLC)中受到关
注［5］，然而由于半边旗 5F 是疏水性化合物，在常温条件下难溶
于水，这不利于药物在体内的分布及转运，也影响了半边旗 5F作
为临床应用药物的研究开发。微乳是一种较好的载药系统，通常
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是由油相、表面活性剂、助表面活性剂和水相组成的热力学稳定
系统［6］，微乳中含有高浓度的表面活性剂和助表面活性剂，这类
表面活性物质的存在能极大提高难溶化合物的溶解度，改善药物
分子在体内的分布和转运，从而提高难溶药物的生物利用度，提
高药物疗效［7］。
本实验将半边旗抗癌二萜制作成口服微乳剂，建立了主要成
分 5F的质量标准并考察稳定性，为岭南特色植物半边旗药物资
源的开发利用提供理论和实验依据。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪(Agilent 1200 LC 色谱系统，美国)，G1311A
四元梯度泵及 G1322AA真空泵，DAD1515B 二极管阵列检测器，
HP1200 色谱工作站;冷冻离心机(Centrifuge 5415Ｒ，德国)，涡旋
混合器，电子天平等。
甲醇，乙酸乙酯，冰醋酸(甲醇为色谱纯，其余为分析纯)由
天津四友公司提供。
半边旗 5F对照品(本室分离纯化，经中国科学院广州化学
所结构鉴定，按峰面积归一化法检测纯度为 99． 6%)，半边旗 5F
口服微乳剂(本室自制，规格为 20 mg· ml －1，批号分别为
20111206，20111207，20111208)。
2 方法与结果
2． 1 含量测定 采用高效液相色谱法。
2． 1． 1 溶液制备 制备对照品储备液:精密称取 5F 对照品
0． 0375 g，加适量 MeOH溶解，转入 25 ml 容量瓶中，加甲醇定容
到刻度，即为 5F对照品储备液。
制备供试溶液:精密量取半边旗 5F 微乳剂 0． 2 ml，放入 25
ml容量瓶中，加 MeOH定容到刻度，即得供试溶液。
制备阴性对照溶液:按溶剂处方不加 5F成分，直接取空白溶
剂 2． 0 ml，放入 25 ml 容量瓶中，加 MeOH 定容到刻度即得阴性
对照溶液。
2． 1． 2 色谱条件及系统适应性 色谱条件为 Hypersil C18(4． 6
mm × 250 mm，5 μm)色谱柱;流动相甲醇∶ 水∶ 醋酸(55∶ 45∶
0． 045，V/V);流速 1． 0 ml·min －1;柱温 35℃;UV 检测波长 242
nm。在上述色谱条件下，各取 20 μl 对照品、供试品和阴性对照
品溶液，HPLC进样分析，记录色谱图如图 1。试验结果表明，供
试品溶液有一主要色谱峰，和对照品色谱图一致，色谱峰 Ｒt 为
7． 8 min，阴性对照样无显著色谱峰，表明空白溶剂无干扰;色谱
柱理论塔板数按 5F 计大于 5000，色谱峰分离度高，系统适应性
良好。
2． 1． 3 线性关系考察 精密量取不同体积的对照品储备液，分别
放入 10 ml容量瓶中，加 MeOH 定容到刻度，摇匀即得系列浓度
的对照品溶液。分别取配制好的各浓度对照品溶液 20 μl，进样
HPLC，记录峰面积积分值。分别以对照品 5F 含量(μg·ml －1)
为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方
程为 Y = 15． 267X + 1． 0126，Ｒ2 = 0． 998 8，表明半边旗 5F在 0． 12
～ 2． 4 μg·ml －1范围内线性关系良好。
2． 1． 4 精密度试验 精密吸取供试品溶液，按色谱条件连续进样
6 次，每次进样量 20 μl，以峰面积计算相对标准偏差 ＲSD。计算
得 ＲSD为 1． 9%，表明该试验方法的精密度良好。
2． 1． 5 重复性试验 取 6 份同批号供试溶液，按供试品溶液配
制方法制样，每份进样 20 μl，测定 5F 含量，计算相对标准偏差
ＲSD。计算得 ＲSD为 1． 21%，表明试验重复性良好。
2． 1． 6 回收率试验 取同批号半边旗 5F微乳剂，加甲醇溶解，稀
释成低、中、高(0． 15 ，0． 30，1． 2 μg·ml －1)不同浓度的样品各 6
份，进样 HPLC，将测得含量与配制含量比较，计算低、中、高 3 种
浓度的回收率。结果见表 1。
a．对照品;b．供试品;c．阴性对照;5F峰
图 1 半边旗 5F高效液相色谱图
表 1 加样回收率试验结果(珋x ± s)
浓度
/μg·mL －1
回收率均值
/%
ＲSD
/%
0． 15 92． 2 ± 1． 6 2． 0
0． 30 92． 6 ± 2． 3 2． 3
1． 20 93． 8 ± 2． 2 2． 1
n = 6
2． 1． 7 样品 5F 含量测定 取 3 个批号的供试样品，按照供试品
溶液配制方法制样，甲醇稀释 100 倍，进样 20 μl经高效液相色谱
分析。样品重复检测 3 次，计算峰面积的平均值，代入标准曲线
方程计算测定含量，根据供试品溶液的稀释度计算样品 5F含量。
结果见表 2。
表 2 样品含量测定结果
批号
含量
/mg·ml －1
20111206 20． 12
20111207 20． 05
20111208 20． 13
n = 3
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2． 2 稳定性考察
2． 2． 1 高速离心法考察微乳稳定性 微乳稳定性的判断可采用
高速离心法，在百倍重力加速度条件下高速离心 5 min，分散体
系不发生相分离，即可认为是稳定的微乳［8］。洁净离心管中加
适量的半边旗 5F微乳，加盖，置离心机内以 4 000 r /min 离心 5
h，观察微乳的外观变化;再以 10 000 r /min 高速离心 20 min，观
察微乳的外观变化及药物析出情况。本研究制备的半边旗 5F微
乳经离心后体系保持无色澄清透明均一液体，未见分层或结晶析
出的现象，判定 5F微乳为稳定体系。
2． 2． 2 温度对微乳剂的影响 取 3 批半边旗 5F微乳密封于西林
瓶中，分别于 25℃、37℃条件下静置 1 个月，于月底取样观察微
乳剂的外观，并检测微乳剂中 5F 的含量变化。本研究制备的半
边旗 5F微乳于 25℃、37℃放置 1 个月没有出现油水分层、絮凝、
合并或破乳现象，微乳外观无变化，保持澄清透明均一状态，5F
微乳在 25℃条件下放置 30 d，取样所测药物的下降率为0． 12%;
37℃放置 30 d所测药物的下降率为 0． 18%，表明本处方制备的
5F微乳在储存温度下稳定。
2． 2． 3 光照对微乳剂的影响 取 3 批半边旗 5F微乳密封于西林
瓶中，室温下放置在自然光照射条件下，分别于 1、7、14、21 d 取
样观察，判断微乳液是否有浑浊、破乳、分层或析出结晶等现象。
实验发现本研究制备的 5F微乳室温放置于自然光照条件下，5F
微乳外观保持澄清透明，未见油水分层或破乳现象，表明 5F微乳
样品在自然条件下稳定。
3 结论
半边旗 5F是疏水性化合物，在常温条件下难溶于水，不利于
药物在体内的分布及转运。微乳载药系统中表面活性物质的存
在，能极大提高难溶化合物的溶解性，从而提高难溶药物的生物
利用度。微乳剂作为药物转运系统，在于药物被包于内相，使药
物避免与体液或组织液直接接触，从而可在长时间内缓释，延长
药物的释放，而且具有淋巴定向输送和靶向定位作用［9，10］。
利用 HPLC － UV 法测定半边旗口服微乳剂中有效成分 5F
的含量，紫外光谱扫描发现 5F的最大吸收峰在 242 nm。分别以
对照品 5F的含量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲
线，得线性回归方程为 Y = 15． 267X + 1． 0126，Ｒ2 = 0． 998 8，表明
半边旗 5F在 0． 12 ～ 2． 4 μg·ml －1范围内线性关系良好。平均回
收率为 92． 9%，精密度试验和重复性试验的相对标准偏差
(ＲSD)均小于 2%。因此 HPLC － UV法可用于测定半边旗 5F微
乳的载药量。
本研究制备的半边旗 5F口服微乳在高速离心时不出现破乳
或分层现象，表明告诉离心对微乳稳定性无影响，温度及光照条
件下半边旗 5F口服微乳未出现破乳、分层或析出现象，稳定性良
好。
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