全 文 ：文章编号: 1006- 1126( 2001) 02- 0068- 02
收稿日期: 2001-03-15
作者简介:吴幼媚 ,女 ,高级工程师 ,主要从事林木组织培养研究。
互叶白千层离体繁殖技术
吴幼媚 1 ,王以红1 ,蔡　玲 1 ,黄金使 1 ,梁炳增 2
( 1. 广西林业科学研究院 ,南宁　 530001; 2. 广西南宁凤凰纸业有限公司宏硕林业公司　 530031)
摘　要: 用 1年生互叶白千层 ( Melaleuca alterni f olia )实生苗的茎段芽作外植体 ,以 0. 1% HgCl2消毒 10min,未污
染率达 80%以上 ,芽萌动快 ;芽在含 BA 1. 0 mg /L、 N AA 0. 5 mg /L的培养基上生长健壮 ,增殖率 300% ,有效芽
100% ; ABT 2. 0 mg / L, IBA 0. 4 mg /L的培养基有利生根 ,其生根率达 93. 3%。
关键词: 互叶白千层 ;离体繁殖
中国分类号: S723. 132　　　　文献标识码: A
　　互叶白千层 ( Melaleuca al terni f ol ia )是桃金
娘科白千层属多年生木本植物 ,原产澳大利亚 ,当地
称茶树 ( Tea t ree )。 属阳性树种 ,适应性强 ,能耐干
旱、高温、脊薄土壤 ,亦可耐轻霜及短期 0℃左右低
温 ,但以温暖湿润地区生长良好。该树种所含的芳香
油及由其分离的主成分松油烯醇- 4有极强的抗菌
作用 [1 ]。其特点已引起国内外日用化工行业的重视 ,
广东、广西、福建等省区相继引种。但不同无性系的
松油烯醇 - 4含量差异显著 ,为发展优良无性系 ,我
们对该树种的营养器官进行离体快繁技术的研究。
1　材料和方法
1. 1　在 1年生实生苗内 ,选择健壮、无病虫害、无机
械损伤半木质化的茎段作外植体。
1. 2　用自来水把材料冲洗干净 ,经 70%酒精表面
消毒后置于超净台在无菌条件下用 0. 1% HgCl2进
一步消毒。
1. 3　以 MS为基本培养基 ,配以 BA、 NAA不同浓
度组合诱导芽生长 ,芽增殖 ,并附加核黄素 ,抗坏血
酸 ; 1 /2M S配加不同浓度的 ABT、 IBA组成生根培
养基 ;培养基附加蔗糖 2%～ 3% ; 琼脂 0. 7% ,
pH5. 8,培养温度 25～ 28℃ ,光照度 1 500～ 2 000
lx。每天光照 12 h。
2　结果与分析
2. 1　无菌材料的获取
　　经酒精表面消毒的外植体置于超净台上 ,在无
菌条件下用 0. 1% HgCl2进行不同时间的消毒 ,其
结果见表 1。
表 1　不同消毒时间对外植体的影响
消毒时间
( min)
接种
(段 )
未污染率 污染率
段 % 段 %
8 30 22 73. 3 8 26. 7
10 30 24 81 6 19
15 30 26 86. 7 4 13. 3
　　由表 1可看出互叶白千层含的芳香油对菌有触
杀作用 ,外植体较易获取无菌材料。 同浓度 HgCl2 ,
不同的消毒时间 ,茎段的消毒效果有所不同 , 15分
钟消毒的未污染率最高达 86. 7% ,但极大部分茎段
被杀伤致死 ,未死的茎段萌芽时间比其他两种方法
晚 10～ 15天。这是因消毒时间过长 , HgCl2液浸入
细胞内引起毒害之故。 试验表明消毒 10分钟较适
宜 ,未污染率达 80% ,而且芽萌动快。
2. 2　芽诱导
　　将消毒后的茎段接种到附加 BA 1～ 3 mg /L,
N AA 0. 5～ 100 mg /L培养基 , 6天腋芽开始萌动 ,
10天长出腋芽 ,以 BA 1. 5 mg /L、 NAA 1. 0 mg /L
激素组合的培养基诱导的芽生长正常 ,健壮。
2. 3　芽增殖
　　不定芽的增殖数量反映着互叶白千层组培苗繁
殖的速度 ,增殖的有效芽数量越多则繁殖越快 ,芽增
殖的速度与激素浓度组合有着密切关系 ,详见表 2。
第 30卷　第 2期 　　　　　　　　　广　西　林　业　科　学 　　　　　　　　　Vo l. 30　 No. 2
2001年 6月 　　　　　　　　　　 Guangxi Fo r estry Science 　　　　　　　　　 Jun. 2001
表 2　不同激素浓度组合对芽增殖的影响
序号 激素组合
mg /L
接种
(段 )
培养天数
(天 )
丛生芽
(个 )
增殖率
(% )
有效芽
(个 ) 生长情况
1 BA 2. 5+ NAA 0. 5 30 25 150 500 0 小叶密集 ,茎肥厚 ,透明
2 BA 1. 0+ NAA 0. 5 30 25 90 300 90 叶片舒展 ,茎生长正常
3 BA 0. 5+ NAA 0. 25 30 25 60 200 60 叶片舒展 ,高生长好
4 BA 0. 3+ NAA 0. 2 30 25 40 144 40 叶片舒展 ,高生长好
　　表 2表明不同激素浓度的组合 ,对不定芽的增
殖影响不一致。细胞分裂素 BA浓度的增加 ,芽增殖
率高 , 1号培养基增殖率达 500% , 4号培养基仅
144% ,但 1号培养基因细胞分裂强烈 ,可能引起细
胞功能失调 ,造成芽丛出现玻璃化现象 ;在细胞分裂
素浓度低的 4号培养基上芽木质化强度高 ,但增殖
慢 ,不能满足生产需求。结果表明以 BA 1. 0、 NAA
0. 5的 2号培养基适宜芽的分化 ,增殖率 300% ,且
芽生长健壮 ,有效芽达 100%。生长素 NAA对芽生
长的作用受 BA浓度抑制 , BA浓度高时 ,芽伸长慢 ,
BA浓度低时 ,芽伸长快。
2. 4　培育壮芽
　　待芽长至 1. 5～ 2 cm时 ,选择健壮的芽 ,切取转
移到生根培养基中诱导生根 ,但芽丛长期在较高浓
度激素的培养基中培养 ,芽会逐步变成肥厚、节短、
不易诱导生根 ,为提高继代苗的生根效果 ,用高、低
浓度激素培养基即: BA 1. 0、 NAA 0. 5和 BA 0. 3、
NAA 0. 2培养基交替使用 ,培养出的芽健壮 ,木质
化好 ,有利诱导生根。
2. 5　不定根诱导
　　丛生芽经培养 25～ 30天 ,当芽长成 1. 5～ 2 cm
高的健壮芽时 ,可以切取进行不定根的诱导培养。苗
木生根难易除受本身生物特性影响外 ,还受无机盐
含量、激素种类组合和浓度比例及培养条件的影响 ,
降低无机盐浓度 ,减少糖的用量可有效地促进生根。
采用 1 /2 M S大量元素 ,全量微量元素 ,有机成份仅
加肌醇 ,蔗糖 20 g /L,再加入不同浓度配比的 ABT
和 IBA。 试验结果见表 3。
表 3　不同激素配比对生根的影响
生根培养基 ABT mg /L IBA mg /L 接种 (株 ) 始根时间 第 20天长根株数 生根率 (% )
R-1 2. 0 0. 4 30 第 7天 29 93. 3
R-2 1. 5 0. 4 30 第 9天 25 83. 3
R-3 1. 5 0. 6 30 第 9天 26 86. 7
R-4 1. 0 0. 2 30 第 15天 5 16. 7
　　表 3反映出随着 ABT浓度的增加 ,苗木生根率
不断地增加 ,生根效果最佳是含 ABT 2. 0的 R-1培
养基 ; IBA则不同 ,浓度增加 ,苗木生根率并未提高 ,
关键在于与 ABT浓度的比例 , R-3培养基浓度为
0. 6,比 R-1培养基高出 0. 2,但生根率低于 R-1的
7. 6%。 诱导不定根的培养基 ABT 2. 0、 IBA 0. 4浓
度配比的生根率高 93. 3%。
2. 6　幼苗移植
　　幼苗移栽是试管苗从无菌到有菌 ,从稳定的光
照、温度、湿度条件到不稳定的自然环境中 ,从异养
到的自养的转变过程 ,因此 ,移栽前必须经过炼苗。
当苗木根系长到 0. 5 cm时 ,连同培养器皿到室外散
射光光照条件下培养 10～ 20天 ,苗木的地上、地下
部分具有较强木质化 ,根系长至 1～ 1. 5 cm,可移
栽。洗去根上培养基 ,移入经 0. 3%高锰酸钾溶液消
毒的育苗杯中 ,基质用红心土。在遮光度为 70%的
荫棚内培育 20～ 50天 ,小苗生长稳定后 ,可进行露
天育苗。
3　讨论
3. 1　互叶白层茎段离体培养形成健壮的组培苗并
移栽成活 ,为该树种无性系的组培快繁奠定了技术
基础。
3. 2　互叶白千层是含芳香油的树种 ,含油纯度和含
油率是重要的经济性状 ,因此选择优良单株进行快
速繁殖育苗具有重要意义。
参考文献
[1]古佛政 ,张燕君 . 互叶白千层芳香油的提取利用研究
[ J]. 广东林业科技 , 1999, 15( 3): 33～ 38.
[ 2]李浚明 . 植物组织培养教程 [M ]. 北京: 中国农业大学
出版社 , 1977.
[ 3]中国科学院上海植物生理研究所细胞室 . 植物组织和
细胞培养 [M ]. 上海:上海科学技术出版社 , 1978.
69第 2期　　　　　　　　　　　　　　　　　吴幼媚等:互叶白千层离体繁殖技术