全 文 ：齐鲁医学杂志２０１３年６月第２８卷第３期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｑｉｌｕ，Ｊｕｎｅ　２０１３，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．３
ｄｏｉ：１０．１１７１２／ｑｌｙｘ２０１３０３００４
［收稿日期］２０１２－１２－１３；　［修订日期］２０１３－０４－２３
［作者简介］王子熹（１９７２－），男，主治医师。
角果木提取物对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用
王子熹１，２
（１　青岛大学医学院，山东 青岛　２６６０２１；　２　青岛市黄岛区中医医院）
［摘要］　目的　观察角果木提取物———Ｔａｇａｌｓｉｎ对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中ｂｃｌ－２、ｐ５３基因表达水平
的影响，探讨Ｔａｇａｌｓｉｎ对卵巢癌的干预作用。方法　建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为空白对照组、顺
铂作用组、Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组和Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组，连续给药后，定期观察各组裸鼠移植瘤生长情况，免疫组织化学方
法检测各组Ｂｃｌ－２、Ｐ５３蛋白的表达，ＲＴ－ＰＣＲ方法检测各组ｂｃｌ－２、ｐ５３基因的表达。结果　各药物作用组移植瘤体
积明显小于空白对照组，其中 Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组移植瘤体积最小，差异有统计学意义（Ｆ＝５９．３１，ｑ＝２．４７～９．
６６，Ｐ＜０．０５）。与空白对照组相比，各药物作用组Ｂｃｌ－２蛋白表达水平明显下降，Ｐ５３蛋白表达水平均明显升高，以
Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组变化最明显（ｕ＝３．４２５～９．６５２，Ｐ＜０．０５），顺铂作用组与Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组之间差异无统计学意
义（Ｐ＞０．０５）。结论　Ｔａｇａｌｓｉｎ可能通过调控癌基因及抑癌基因的表达来实现抑瘤作用，Ｔａｇａｌｓｉｎ与顺铂联合应
用可以明显增强其抑瘤作用。
［关键词］　Ｔａｇａｌｓｉｎ；卵巢肿瘤；基因，ｐ５３；基因，ｂｃｌ－２
［中图分类号］　Ｒ７３７．３１　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１００８－０３４１（２０１３）０３－０１９９－０４
ＴＨＥ　ＥＦＦＥＣＴ　ＯＦ　ＣＥＲＩＯＰＳ　ＴＡＧＡＬ　ＥＸＴＲＡＣＴ　ＯＮ　ＳＵＢＣＵＴＡＮＥＯＵＳ　ＴＲＡＮＳＰＬＡＮＴＥＤ　ＴＵＭＯＲ　ＯＦ　ＨＵＭＡＮ　ＯＶＡＲＩＡＮ　ＣＡＮＣＥＲ
ＩＮ　ＮＵＤＥ　ＭＩＣＥ　ＷＡＮＧ　Ｚｉｘｉ　（Ｑｉｎｇｄａｏ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６０２１，Ｃｈｉｎａ）
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｃｅｒｉｏｐｓ　ｔａｇａｌ　ｅｘｔｒａｃｔ（Ｔａｇａｌｓｉｎ）ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｂｃｌ－２ａｎｄ　ｐ５３ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｔｉｓ－
ｓｕｅ　ｏｆ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｔｕｍｏｒ（ＳＴＴ）ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｎｕｄｅ　ｍｉｃｅ，ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔａｇａｌｓｉｎ　ｏｎ
ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｎｃｅｒ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｏｕｓｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＳＴＴ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｏｖａｒｉａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｗｅｒｅ　ｃｒｅａｔｅｄ　ａｎｄ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｏｕｒ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：
ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ｃｉｓｐｌａｔｉｎ，Ｔａｇａｌｓｉｎ　ａｎｄ　Ｔａｇａｌｓｉｎ＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎ．Ａｆｔｅｒ　ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ＳＴＴ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｏｂ－
ｓｅｒｖｅｄ　ｒｅｇｕｌａｒｌｙ．Ｔｈｅ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　Ｐ５３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　ＲＴ－ＰＣＲ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｕｍｏｒ
ｖｏ－ｌｕｍｅ　ｏｆ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｓｍａｌｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｏｆ　ｗｈｉｃｈ，ｔｈｅ　ｓｍａｌｅｓｔ　ｏｎｅ　ｗａｓ　ｎｏｔｅｄ
ｉｎ　Ｔａｇａｌｓｉｎ＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｓ　ｏｆ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ（Ｆ＝５９．３１，ｑ＝２．４７－９．６６，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ
ｔｈｅ　ｂｌａｎｋ　ｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｅ　Ｂｃｌ－２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｃｌｉｎｅｄ，ａｎｄ　Ｐ５３ｅｌｅｖａｔｅｄ，ｍｏｓｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｗｅｒｅ
ｎｏ－ｔｅｄ　ｉｎ　Ｔａｇａｌｓｉｎ＋ｃｉｓｐｌａｔｉｎ　ｇｒｏｕｐ（ｕ＝３．４２５－９．６５２，Ｐ＜０．０５），ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｂｃｌ－２ａｎｄ　Ｐ５３ｂｅｔｗｅｅｎ　Ｔａｇａｌｓｉｎ　ａｎｄ　ｃｉｓｐｌａｔｉｎ
ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｉｔ　ｉｓ　ｐｒｏｂａｂｌｙ　ｔｈａｔ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｏｎｃｏ－
ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ　ｇｅｎｅ　ｔｈａｔ　Ｔａｇａｌｓｉｎ　ｐｌａｙｓ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｏｎ，ａ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔａｇａｌｓｉｎ　ａｎｄ　ｃｉｓｐｌａｔｉｎ　ｃａｎ　ｍａｒｋｅｄｌｙ　ｅｎｈａｎｃｅ
ｉｔｓ　ｔｕｍｏｒ－ｄｅｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ．
［ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ］　Ｔａｇａｌｓｉｎ；ｏｖａｒｉａｎ　ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ｇｅｎｅｓ，ｐ５３；ｇｅｎｅｓ，ｂｃｌ－２
　　角果木为红树科角果木属植物，富含鞣质、五环
三萜和二萜。近年来角果木的药用价值得到国内外
很多学者的重视，有学者用石油醚从角果木中部分
分离提取出两种Ｄｏｌａｂｒａｎｅ型二萜，其中Ｔａｇａｌｓｉｎｓ
Ａ为首次发现的新化合物［１］。相关研究证实，角果
木提取物———Ｔａｇａｌｓｉｎ系列化合物具有细胞膜通透
性和杀伤肿瘤细胞的活性，可以抑制多种人类恶性
肿瘤细胞的增殖，具备新药开发价值［２］。本研究旨
在观察Ｔａｇａｌｓｉｎ对裸鼠皮下卵巢癌移植瘤组织中
ｂｃｌ－２、ｐ５３基因表达水平的影响，探讨Ｔａｇａｌｓｉｎ对卵
巢癌的干预作用。
１　材料与方法
１．１　材料
人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３购自广西医科大学附
属肿瘤医院；４～６周龄雌性ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠６０只，
体质量１５～２０ｇ，购自上海斯莱克实验动物有限责
任公司（ＳＬＡＣ）；Ｔａｇａｌｓｉｎ购自北京大学天然药物
及仿生药物国家重点实验室；兔抗鼠ｂｃｌ－２、ｐ５３一
抗和ＳＡＢＣ免疫组化试剂盒购于武汉博士德公司；
ＲＴ－ＰＣＲ逆转录试剂盒购于北京百泰克生物技术有
限公司。
１．２　细胞培养和动物模型的建立
ＳＫＯＶ３细胞常规培养于含体积分数０．１０胎
牛血清、１００ｋＵ／Ｌ 青霉素和１００ ｍｇ／Ｌ 链霉素
各１ｍＬ的ＲＰＭＩ－１６４０培养液中，置于３７℃、体积
分数０．０５ＣＯ２ 培养箱中，２．５ｇ／Ｌ胰酶消化后传
代。收集对数生长期的细胞，制备成密度为３×
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１０１０／Ｌ单细胞悬液，于超净工作台内在裸鼠腋窝区
皮下注射０．２ｍＬ的单细胞悬液，注射局部出现明
显皮丘，７ｄ后裸鼠均出现直径大于０．５ｃｍ的皮下
结节，病理切片证实为恶性肿瘤，此时移植瘤模型建
立。
１．３　裸鼠分组及给药
将造模成功４８只小鼠随机分为空白对照组、顺
铂作用组、Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组和Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组，每
组为１２只。Ｔａｇａｌｓｉｎ每天灌胃给药１次（２０ｍｇ／
ｋｇ），顺铂每周腹腔注射给药１次（５ｍｇ／ｋｇ），连续３
周。空白对照组用食用油代替药物。
１．４　移植瘤体积及抑瘤率的测定
观察裸鼠一般状态，每天测量裸鼠体质量。每
３ｄ测量瘤体最长径（ａ）和最短径（ｂ），计算移植瘤
的体积，移植瘤体积（ｍｍ３）＝（１／２）ａｂ２，求其平均
值。根据移植瘤体积绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤
率［３］，抑瘤率＝（对照组平均体积－实验组平均体
积）／对照组平均体积×１００％。停药后２４ｈ处死裸
鼠，完整剥离瘤体。
１．５　免疫组化检测Ｐ５３、Ｂｃｌ－２蛋白的表达
按ＳＡＢＣ试剂盒说明书操作，以ＰＢＳ代替一抗
作为空白对照。Ｂｃｌ－２定位于细胞质，Ｐ５３定位于细
胞核，呈棕黄色或棕褐色颗粒状。光镜下随机观察
１０个高倍视野，以细胞无着色或阳性细胞数＜１０％
为（－），阳性细胞数１０％～２５％为（＋），阳性细胞
数２６％～７５％为（），阳性细胞数７６％～８５％为
（），阳性细胞数＞８５％为（）。
１．６　ＲＴ－ＰＣＲ检测ｐ５３、ｂｃｌ－２基因表达
取新鲜裸鼠移植瘤组织，按试剂盒说明书进行
逆转录反应，合成的ｃＤＮＡ保存于－２０℃，以β－ａｃ－
ｔｉｎ为内参，行ＰＣＲ扩增，扩增产物在２０ｇ／Ｌ琼脂
糖凝胶上电泳，采用 Ｑｕａｎｔｉｔｙ　Ｏｎｅ图像分析软件
进行分析。引物序列如下：ｐ５３－ｓｅｎｓｅ，５′－ＡＧＧＡＣＣＣＴ－
ＧＴＣＡＣＣＧＡＧＡ－３′；ｐ５３－ａｎｔｉ－ｓｅｎｓｅ，５′－ＧＴＧＧＡＡＧＣ－
ＣＡＴＡＧＴＴＧＣＣ－３′；ｂｃｌ－２－ｓｅｎｓｅ，５′－ＧＧＴＧＧＴＧＧＡＧ－
ＧＡＡＣＴＣＴＴＣＡＧＧＧ－３′；ｂｃｌ－２－ａｎｔｉ－ｓｅｎｓｅ，５′－ＧＡＧＡ－
ＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＡＧＡ－３′；β－ａｃｔｉｎ－ｓｅｎｓｅ：
５′ＴＧＣＴＧＴＣＣＣＴＧＴＡＴＧＣＣＴＣＴ－３′；β－ａｃｔｉｎ－ａｎｔｉ－
ｓｅｎｓｅ：５′－ＧＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣＣ－３′。
１．７　统计学处理
采用ＳＰＳＳ　１７．０及ＰＰＭＳ　１．５［４］软件进行统计
学处理。多组均数的比较采用方差分析，非正态分
布的样本比较采用秩和检验，以Ｐ＜０．０５为差异有
统计学意义。
２　结　　果
２．１　各组裸鼠移植瘤体积和抑瘤率比较
各药物作用组移植瘤体积明显小于空白对照
组，其中Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组移植瘤体积最小，差异有
统计学意义（Ｆ＝５９．３１，ｑ＝２．４７～９．６６，Ｐ＜０．
０５）；顺铂作用组与 Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组差异无显著意
义（Ｐ＞０．０５）。见表１。
２．２　各组Ｂｃｌ－２、Ｐ５３蛋白表达比较
空白对照组、顺铂作用组、Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组及
Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组Ｂｃｌ－２蛋白表达水平呈递减趋势，
而Ｐ５３蛋白表达水平则呈递增趋势，差异有统计学
意义（ｕ＝３．４２５～９．６５２，Ｐ＜０．０５）；顺铂作用组与
Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组之间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。
见表２。
表１　不同药物对裸鼠移植瘤生长影响（ｎ＝１２，珔ｘ±ｓ）
　　组　别 移植瘤体积（Ｖ／ｍｍ３） 抑瘤率（χ／％）
空 白 对 照 组 １　９０６．６７±３０．２３　 ０　
顺 铂 作 用 组 １　１５７．３９±４５．１５　 ３９．３
Ｔａｇａｌｓｉｎ 作 用 组 １　００９．７１±５９．１１　 ４２．０
Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组 　８１０．２８±３２．３７　 ５７．５
表２　各组Ｂｃｌ－２及Ｐ５３蛋白表达比较（只）
组　别　　 ｎ
Ｂｃｌ－２蛋白
－ ＋   
Ｐ５３蛋白
－ ＋   
空 白 对 照 组 １２　 ０　１　２　１　８　 １０　１　１　０　 ０
顺 铂 作 用 组 １２　 ４　６　２　０　０　 ５　２　０　２　 ３
Ｔａｇａｌｓｉｎ 作 用 组 １２　 ３　５　４　０　０　 ４　０　２　１　 ５
Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组 １２　 ９　３　０　０　０　 １　０　１　２　 ８
２．３　各组ｂｃｌ－２、ｐ５３ｍＲＮＡ的表达
各药物作用组ｂｃｌ－２基因表达均明显低于空白
对照组，而ｐ５３基因表达则均明显高于空白对照组，
其中以Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组变化最明显；顺铂作用组
及Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组之间的差异无统计学意义（Ｐ
＞０．０５）。见图１。
３　讨　　论
卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一，
由于缺乏典型的临床表现，目前很难做到早期诊断
及早期治疗。且放化疗毒性作用使许多病人不能耐
受。因此，寻找副作用轻且疗效好的药物已经成为
研究热点。
利用红树植物治病，在中国民间已经有几百年
的历史，但是直到近年红树植物才被作为海洋药物
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齐鲁医学杂志２０１３年６月第２８卷第３期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｑｉｌｕ，Ｊｕｎｅ　２０１３，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．３
Ａ：ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，Ｂ：ｐ５３ｍＲＮＡ的表达。①～④分别为
空白对照组、顺铂作用组、Ｔａｇａｌｓｉｎ作用组和Ｔａｇａｌｓｉｎ＋顺铂组。
图１　各组ｂｃｌ－２、ｐ５３ｍＲＮＡ的表达
开发和新药研究的主要源泉之一，人们对红树植物
的化学成分和生物活性进行了系统及深入的研究。
很多研究表明，红树植物含萜类、多糖、甾体和生物
碱等化合物，具有抑菌、抗氧化、抗艾滋病以及抗肿
瘤等作用［５－６］。ＡＧＳＨＩＫＡＲ等［７］报道，红树植物具
有麻醉和抗炎的作用。目前，关于红树植物生物活
性及抗肿瘤作用的研究仅仅局限于体外细胞水平，
关于其体内抗肿瘤作用及具体作用机制的研究鲜有
报道。国内有学者通过动物实验证实，红树植物角
果木Ｄｏｌａｂｒａｎｅ型二萜对小鼠皮下肺癌移植瘤的生
长具有明显的抑制作用，其抑制肿瘤的作用机制可
能与肿瘤相关转录因子 ＮＦ－κＢ　ｐ６５的表达水平有
关［８］。冯龄鑫等［９］研究显示，中国红树植物角果木
中Ｄｏｌａｂｒａｎｅ型二萜成分Ｔａｇａｌｓｉｎｓ　Ａ，具有抑制小
鼠皮下肝癌移植瘤生长及延长肝癌小鼠生存期的作
用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。
ｂｃｌ－２基因是从小鼠Ｂ淋巴瘤中分离得到的原
癌基因。该基因能够抑制细胞凋亡，促进细胞异常
增殖，导致肿瘤发生［１０］。ｂｃｌ－２基因发生突变而过
度表达，则抑制了卵巢癌细胞凋亡，从而引起卵巢癌
的发生。此外，细胞凋亡指数比较低的上皮性卵巢
癌细胞，其ｂｃｌ－２表达阳性率较高［１１］。
ｐ５３基因是肿瘤抑制基因，分为野生型和突变
型两种，野生型ｐ５３半衰期比较短，免疫组化技术检
测不到，可通过引起ＤＮＡ受损、细胞发生凋亡而阻
止肿瘤的发生。突变的Ｐ５３蛋白在细胞内含量高，
因构象发生改变，半衰期延长，并于核内积聚，免疫
组化技术可以检测到。突变的ｐ５３基因产生的蛋白
在肿瘤细胞中积累，可能是导致卵巢癌病人预后差
的作用机制［１２］。有研究显示，Ｐ５３蛋白不仅可以反
映卵巢癌的分化程度，而且随临床分期进展Ｐ５３蛋
白表达阳性率增高［１３］。
本研究结果显示，各药物作用组移植瘤体积明
显小于空白对照组，同时ｂｃｌ－２基因表达明显低于
空白对照组，而ｐ５３基因表达明显高于空白对照组，
说明Ｔａｇａｌｓｉｎ能有效抑制卵巢癌细胞的增殖，其抑
瘤机制可能为通过上调卵巢癌细胞ｐ５３基因表达、
下调ｂｃｌ－２基因表达，从而调整了卵巢癌细胞周期，
促进肿瘤细胞的凋亡。本文结果还显示，单独使用
Ｔａｇａｌｓｉｎ抑瘤作用与顺铂效果没有明显差别，但二
者联合应用较单独使用抑制卵巢癌增殖的作用明显
增强。本文结果为临床治疗卵巢癌药物的应用及新
药研发提供了理论依据。
综上所述，Ｔａｇａｌｓｉｎ有可能通过调控癌基因及
抑癌基因的表达，调整细胞周期，从而有效地抑制卵
巢癌细胞的增殖。但是 Ｔａｇａｌｓｉｎ的抑瘤作用是多
因素的过程，目前对其他机制尚不十分明确，并且对
于Ｔａｇａｌｓｉｎ剂量的研究也较少，相信随着对海洋药
物的不断深入研究和探索，上述问题会逐渐明确，为
治疗卵巢癌的药物选择提供更多的理论基础。
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［１３］方志文，牟召霞，王新，等．ｐ５３与ｃ－ｍｙｃ和ｃｙｃｌｉｎ　Ｂ１在卵巢上
皮性癌组织中的表达及意义［Ｊ］．中华肿瘤防治杂志，２００７，１４
（４）：２８４－２８６．
（本文编辑　马伟平）
［收稿日期］２０１３－０１－１７；　［修订日期］２０１３－０５－２５
［作者简介］杨燕玲（１９８６－），女，硕士研究生。
［通讯作者］单若冰（１９５１－），女，教授，主任医师，博士生导师。
ｄｏｉ：１０．１１７１２／ｑｌｙｘ２０１３０３００５
新生儿Ｒｈ（ｃ）溶血病１例
杨燕玲，单若冰
（青岛市妇女儿童医院ＮＩＣＵ科，山东 青岛　２６６０３４）
　　病儿，女，出生后３０ｍｉｎ，因“面色青紫约半小时”入院。病儿系
第５胎第３产，孕３９周剖宫产，出生体质量２．９ｋｇ，羊水Ⅲ度污染，
帆状胎盘，生后１、５、１０ｍｉｎ　Ａｐｇａｒ评分均１０分。生后面青紫、气
促，即转送我院。母亲汉族，血型为Ｂ型Ｒｈ阳性，无输血史，孕期体
健，无毒物及放射线接触史。共妊娠５次，人工流产２次，其第一胎
因胎粪吸入综合征（ＭＡＳ）生后２ｄ死亡，第２胎曾因“黄疸”住院治
疗治愈出院，目前智力、体格发育与同龄相符。入院查体：体
温３６．０℃，血压８．０／６．４ｋＰａ，精神反应欠佳，全身皮肤暗黄，前囟
平软，唇发绀，呼吸略急促，约５０ｍｉｎ－１，鼻翼煽动（＋），三凹征
（＋），双肺闻及大量细湿啰音。心音有力，心前区闻及３／６级收缩期
杂音。腹膨隆，肝右肋下约６ｃｍ，剑突下５ｃｍ，脾左肋下约４ｃｍ。
四肢肌张力低，拥抱反射未引出。
入院后急查血常规：ＷＢＣ　２００．６９×１０９／Ｌ，ＲＢＣ　１．３２×１０１２／Ｌ，
Ｈｂ　７２ｇ／Ｌ，Ｒｅｔ　０．３３，ＰＬＴ　８４×１０９／Ｌ；血清总胆红素３１８．０ｍｍｏｌ／Ｌ，
直接胆红素１１３．２ｍｍｏｌ／Ｌ；心脏超声检查提示：主肺动脉分叉处动
脉导管未闭，肺动脉端内径约７ｍｍ，估测肺动脉压力９．３ｋＰａ。同
时给予蓝光照射、碳酸氢钠、人血丙种球蛋白、人血清蛋白等综合治
疗，６ｈ后病儿黄疸无明显减轻，Ｈｂ进行性下降。结合病儿皮肤黄
染重、进展快，并伴有重度贫血、肝脾增大等表现，虽产前检查其母血
型为Ｂ型Ｒｈ阳性，仍高度怀疑本病儿溶血，可能为罕见血型系统溶
血，病儿遂行溶血试验，并同时送检母亲血，结果示：病儿血型Ｂ型，
Ｒｈ（Ｄ）阳性，病儿血直接抗人球蛋白试验、游离试验、释放试验均强
阳性，并检出不规则抗体ＩｇＧ抗－ｃ，母血清亦检出ＩｇＧ抗－ｃ抗体，证
实病儿为Ｒｈ（ｃ）溶血病。为减轻病儿溶血进展，预防胆红素脑病的
发生，给予病儿换血治疗，血源选用Ｒｈ系统与母亲同型，ＡＢＯ系统
与病儿同型的血液，又因病儿血清中检出不规则抗体ＩｇＧ抗－ｃ，故采
用Ｒｈ（Ｄ）阳性的 Ｂ型洗涤红细胞和 Ｂ型血浆进行换血，共换
血４８０ｍＬ，过程顺利。换血后病儿 Ｈｂ升至１１８ｇ／Ｌ，ＲＢＣ升至３．７
×１０１２／Ｌ，血清总胆红素降至１８３．３ｍｍｏｌ／Ｌ，血清直接胆红素降
至５０．５ｍｍｏｌ／Ｌ。换血后给予蓝光照射、门冬氨酸钾镁保肝、熊去氧
胆酸片利胆退黄等治疗，３ｄ后行头颅 ＭＲ检查示基底核区未见异常
信号影；住院１４ｄ病儿治愈出院，出院复查血常规：ＷＢＣ　１０．０５×
１０９／Ｌ，ＲＢＣ　３．３１×１０１２／Ｌ，Ｈｂ　１２５ｇ／Ｌ，ＰＬＴ　１５６×１０９／Ｌ；血清总
胆红素１２２．３ｍｍｏｌ／Ｌ，直接胆红素１１．７ｍｍｏｌ／Ｌ。出院诊断：新生
儿Ｒｈ（ｃ）溶血病、新生儿贫血（重度）、动脉导管未闭。
讨论　Ｒｈ血型系统是仅次于ＡＢＯ血型系统的重要血型系统，
Ｒｈ抗原主要有Ｄ、Ｃ、ｃ、Ｅ、ｅ等５种，其中Ｄ抗原免疫原性最强，是引
起新生儿Ｒｈ溶血的主要原因之一，即发生在母亲是Ｒｈ（Ｄ）阴性血
而胎儿为Ｒｈ（Ｄ）阳性的情况下。但母婴均为Ｒｈ（Ｄ）阳性时胎儿亦
可发生Ｒｈ溶血病。这种情况主要是由于Ｄ抗原以外的其他抗原刺
激母体产生抗体，一般ｅ或ｃ抗原抗原性弱，不易刺激母体产生抗
体，但在母体Ｒｈ抗原缺失的情况下，ｅ或ｃ抗原也可刺激母体产生
相应的抗体，抗体进入胎儿体内即有可能发生免疫溶血反应。Ｒｈ
（ｃ）溶血发生率低，有报道孕期妇女抗－ｃ抗体携带率仅约０．７‰。据
统计，在８３５例新生儿溶血病中，Ｒｈ血型引起的有１２２例（１４．６％），
其中由抗－ｃ抗体引起的仅１例。
孕期少量胎儿血（多数为０．１～０．３ｍＬ）可通过胎盘进入母体
内，若胎母Ｒｈ血型不合，则可使母体致敏。甚至有研究表明，只要
有０．０１ｍＬ胎儿红细胞进入母体即可致敏而产生相应抗体。如这
些抗体通过胎盘进入胎儿循环后可造成胎儿溶血，若不及时治疗，轻
则发生黄疸、贫血，重则发生水肿、胆红素脑病，甚至危及病儿生命。
本例病儿母亲有多次妊娠流产史，可以刺激机体产生ＩｇＧ抗－ｃ，其第
二胎曾有明显黄疸病史，亦不能排除轻度Ｒｈ溶血。
若新生儿生后２４ｈ内出现黄疸并呈进行性加重，且伴有 Ｈｂ进
行性下降等表现，应高度怀疑溶血，即使母婴血型均为Ｒｈ阳性，排
除ＡＢＯ血型系统及Ｒｈ（Ｄ）溶血可能，亦应考虑其他罕见溶血，进行
相关溶血检查，及时对Ｒｈ（Ｄ）以外的Ｒｈ（Ｃ）、Ｒｈ（ｃ）、Ｒｈ（Ｅ）、Ｒｈ（ｅ）
等所致的溶血进行筛查和确诊。现在，一般医院实验室仅可对Ｄ抗
原进行检测，而对抗原性相对较弱的其他抗体未做系统的检测，易造
成除Ｒｈ（Ｄ）以外的Ｒｈ溶血病的漏诊及延误治疗，因此应引起临床
工作者的警惕与重视。
［关键词］　Ｒｈ－Ｈｒ血型系统；新生儿溶血病；病例报告
［中图分类号］　Ｒ７２２．１８　　［文献标志码］　Ｂ
［文章编号］　１００８－０３４１（２０１３）０３－０２０２－０１
（本文编辑　厉建强）
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