全 文 ：理学法和直接添加法，这两种方法各有其优缺点。
血清药理学法能更好的模拟中药复方在体内代谢的
过程，但其含药血清成分复杂，增加了质控难度，
且血清中本身固有活性物质对实验结果的影响无法
去除，最终影响实验结果。近些年来，直接添加法
在中药复方的体外实验中得到广泛应用［12-13］，其
优势在于可以更好地控制受试药物主要成分质量，
较稳定地进行药物量效观察，易于重复［14］。本研
究采用中药直接添加法证实了化瘀消癥杀胚中药复
方有抑制人输卵管妊娠滋养细胞增殖，诱导其凋亡
的作用，但复方中的哪些有效成分通过何种凋亡途
径起到促凋亡作用，尚有待进一步的研究探索。
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头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌抗菌作用研究
刘瑜新1， 宋晓勇1 * ， 康文艺2， 张永州1， 刘 强1， 王培卿2
(1． 河南大学淮河医院，河南 开封 475001;2． 河南大学中药研究所，河南 开封 475004)
收稿日期:2014-02-12
基金项目:河南大学自然科学基金 (2011YBZＲ015)
作者简介:刘瑜新 (1983—)，女，硕士，药师，从事中药活性成分研究。E-mail:lyxhndx@ foxmail． com
* 通信作者:宋晓勇 (1971—)，男，硕士，主任药师，从事临床药学研究。E-mail:sxyyjk@ 163． com
摘要:目的 研究头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性。方法 采用纸片扩散法测定抑菌圈直径，微量肉汤
稀释法测定各实验菌株的最低抑菌质量浓度 (MIC)和半数抑制质量浓度 (IC50值)，液体转染法测定最低杀菌质量
浓度 (MBC)。结果 头花蓼提取物对各多重耐药金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用，60%乙醇提取物对各耐
药菌的抑菌圈明显大于水提物，并大于没食子酸。60%乙醇提取物与水提物对各耐药菌株的 MIC 值范围为 0. 78 ～
3. 12 mg /mL和 IC50值范围为 0. 46 ～ 1. 81 mg /mL，均小于没食子酸的 MIC值和 IC50值。60%乙醇提取物 MBC值范围为
1. 56 ～ 6. 25 mg /mL，小于水提物和没食子酸。结论 头花蓼乙醇提取物体外抗多重耐药金黄色葡萄球菌作用优于没食
子酸，提示头花蓼除了没食子酸外还存在其他抗菌成分。
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关键词:头花蓼;耐药金黄色葡萄球菌;抗菌活性;MIC;MBC;IC50
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)09-1817-05
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 09. 006
Antibacterial activity of Polygonum capitatum against multi-resistant Staphylococ-
cus aureus
LIU Yu-xin1， SONG Xiao-yong1* ， KANG Wen-yi2， ZHANG Yong-zhou1， LIU Qiang1， WANG
Pei-qing2
(1． Huaihe Hospital of Henan University，Kaifeng 475001，China;2． Institute of Chinese Materia Medica，Henan University，Kaifeng 475004，China)
KEY WOＲDS:Polygonum capitatum;resistant Staphylococcus aureus;antimicrobial activity;MIC;MBC;IC50
头花蓼 Polygonum capitatum 为蓼科 Polygonace-
ae蓼属 Polygonum植物，又名石莽草、四季红、满
地红等，是我国民间常用草药，分布于江西、湖
北、湖南、广西、四川、贵州及云南、西藏等地。
头花蓼具有清热解毒、利尿通淋与活血止痛等功
效，用于治疗痢疾、肾盂肾炎、膀胱炎、尿路结
石、风湿痛、跌打损伤、疮疡湿疹等［1］。该药的
单方制剂“热淋清颗粒”和 “热淋清胶囊”均已
在临床上使用多年，用于泌尿系统疾病的治疗，具
有很好的疗效［2］。此外以该药为主药的新药 “四
季草颗粒”用于温热蕴结所致排尿不畅，小便短
赤以及慢性前列腺炎、前列腺增生等症［3］。对头
花蓼药理活性的研究鲜有报道，本课题组在对蓼科
植物的系统研究中发现头花蓼具有抗氧化［4］和 α-
葡萄糖苷酶的抑制活性［5］，任光友等研究发现头
花蓼具有体内抗大肠杆菌的作用，徐英春等则报道
了头花蓼对淋病奈瑟球菌的体外抑菌活性［6］，Liao
等报道了头花蓼提取物及不同活性部位对金黄色葡
萄球菌 ATCC25923、大肠埃希菌 ATCC 25922、淋
病 奈 瑟 菌 ATCC49226、 肺 炎 克 雷 伯 氏 菌
ATCC10031 和奇异变形菌 NCTC49106 的抗菌效果
及其抗炎活性［7］。于明则研究了头花蓼不同提取
物及单体的抗菌活性和抗炎活性［8］。但未见其对
临床多重耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性的报道，
为了探讨头花蓼的更广泛的抗菌作用，本课题组对
头花蓼提取物的抗多重耐药金黄色葡萄球菌作用进
行了初步研究。
1 实验材料与仪器
1. 1 药材 头花蓼购于贵州，经河南大学中药研
究所生药教研室李昌勤副教授鉴定。
1. 2 供试菌株 临床分离的多重耐药金黄色葡萄
球菌 6 株，编号分别为:Stapyhlococcus aureus 871
(SA-871)， Stapyhlococcus aureus 328 (SA-328) ，
Stapyhlococcus aureus 112 (SA-112) ，Stapyhlococcus
aureus 115 (SA-115) ，Stapyhlococcus aureus 221
(SA-221) ，Stapyhlococcus aureus 210 (SA-210) ，
以上菌株均由河南大学淮河医院临床分离获得;
ATCC 25923 甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌
(MSSA)购于中国药品生物制品检定所。
1. 3 试剂与材料 营养琼脂培养基 (Nutrient
Agar，北京奥博星生物技术有限公司);血琼脂平板
(郑 州 安 图 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司，批 号
20130823);MH肉汤 (杭州天和微生物试剂有限公
司，批号 120506);实验用其他试剂均为分析纯。
1. 4 仪器 美国 BD 公司 Phoenix100全自动微生物
分析仪;MultiskanMK3 酶标仪 (美国热电公司);
ZWX-201A 紫外线空气消毒器;LＲH-150 生化培
养箱 (上海一恒科技有限公司);LDZX-30KB 立
式压力蒸汽灭菌器 (上海申安医疗器械厂);BSC-
1500ПA /B3 型生物安全柜 (安徽航天生物科技有
限公司);旋转蒸发仪 (Heidolph);电子天平 (
Mettler-Toledo)。
2 实验部分
2. 1 头花蓼提取物的制备 头花蓼药材全草 1 kg
粉碎，取 500 g 加入 7 ～ 8 倍量水，浸泡 30 ～ 60
min后，将水加至 10 倍量，加热煮沸，保持微沸
1. 5 h，过滤收集滤液，得到滤液 1 和药渣。将药
渣二次煎煮，加入 10 倍量的水，加热煮沸，保持
微沸 1. 5 h，过滤收集滤液，得到滤液 2。将滤液 1
和滤液 2 合并，浓缩，得到头花蓼水提取物 75 g，
得率为 15. 00%。
将粉碎好的药材 500 g，用 60%乙醇 (每次 8
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倍量)50 ℃保温提取 2 次，每次 4 h，合并提取
液，减压回收乙醇，得乙醇提取物 87 g，得率
为 17. 4%。
2. 2 样品溶液配制 将提取物和没食子酸均用
DMSO配制成质量浓度为 50 mg /mL，用 0. 22 μm
的微孔滤膜除菌后保存在 4 ℃冰箱备用。
2. 3 临床分离金黄色葡萄球菌耐药谱分析 采用
全自动微生物分析仪对 6 株金黄色葡萄球菌进行耐
药谱分析，并通过 K-B 纸片法按照 CLSI 标准进行
验证。
2. 4 体外抗菌实验
2. 4. 1 纸片扩散法测定头花蓼提取物的抑菌圈［9］
取分离培养好的耐药菌株，用无菌生理盐水分别
稀释配制成 0. 5 麦氏浊度 (相当于含菌量 108CFU /
mL)的菌悬液，用无菌移液管移取已配好的菌液
100 μL加入标记好的平皿中，用涂布器将菌液涂
布均匀，制成带菌平板，将含药纸片等距置于含菌
平板，每份样品均平行操作 3 次。同时用 DMSO
做空白对照，置 37 ℃恒温生化箱内培养 24 h，观
察菌落生长情况，测定抑菌圈直径，结果取平
均值。
2. 4. 2 MIC 和 MBC 的测定 采用微量肉汤稀释
法［10］，分别测定头花蓼提取物对 6 株耐药金黄色
葡萄球菌的 MIC 值。取经培养的各耐药菌株，以
无菌生理盐水制备 0. 5 麦氏浓度对数生长期菌落，
并用肉汤继续稀释为 106 CFU /mL，备用。在经灭
菌的 96 微孔板上的各孔中，第 1 孔为只加菌液的
阴性对照，第 2 ～ 11 孔为药液孔，即在第 2 孔中加
入 200 μL初质量浓度的药液，其余各孔加入 100
μL的肉汤，用二倍稀释法从第 2 孔吸出 100 μL 加
入第 2 孔，依次类推加至第 11 孔，吸出 100 μL 弃
去，然后在每孔中依次加入备用菌液 100 μL，使
得各孔中药液质量浓度为 25 ～ 0. 05 mg /mL，同时
做溶剂对照和不加菌液的空白对照。35 ℃孵育
24 h后，观察结果。在衬有黑色底板的光线下观测
结果，以弥漫浑浊、单一的大圆点或丝网状为细菌
生长的指标;与空白对照比较，培养液出现澄清透
明的最低药物浓度即为最小抑菌浓度。
取最小抑菌浓度及前面 3 孔的反应液，接种于
血琼脂平板中，于 35 ℃孵育 24 h，以菌落数 ＜ 5
个时反应液药物的最低质量浓度为 MBC。
2. 4. 3 半数抑制质量浓度 (IC50)的测定
［11］ 在
洁净无菌的 96 孔培养板中加入供试菌液 90 μL
(菌液浓度为 106 CFU /mL)，然后加入不同质量浓
度的样品母液 10 μL，使药液终浓度为 1 /10 样品母
液浓度。同时设阴性对照、空白对照和溶剂对照，
每个处理 3个重复。将 96 孔板于 37 ℃下，培养 20
h后，用酶标仪测定 595 nm处的光吸收值，各样品
以相同条件下的上清液吸收度值作为空白对照，减
去空白对照即为其所含菌量的吸收度，按下面公式
计算出抑制率 (%)。相应上清液是在10 000 /6 min
的条件下制备，按下面公式计算出抑制率 (%):
抑制率 (%) ={［(溶剂对照孔 OD 值 －相应
上清 OD值) － (药液孔 OD 值 －相应上清液 OD
值)］ / (阴性对照 OD 值 － 相应上清液 OD
值)} × 100%
以样品质量浓度和抑制率作图，求出线性回归
方程，计算抑制率为 50%时的质量浓度即为 IC50值。
3 结果
3. 1 细菌耐药检测结果 经全自动微生物分析仪
分析，金黄色葡萄球菌 SA-871，SA-328 为产 β-内
酰胺酶的耐药菌株，SA-112，SA-115，SA-221，
SA-210 均为甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌 (MＲ-
SA)，所有菌株对糖肽类、呋喃妥因及利奈唑胺敏
感。此外，药敏结果显示 SA-871，SA-328 两者对
苯唑西林、头霉素类、四环素类和喹诺酮类敏感，
对大环内酯类和林可霉素类耐药;SA-112，SA-
115，SA-221，SA-210 对青霉素类、氨基糖苷类、
四环素类、喹诺酮类耐药，结果见表 1。
表 1 临床分离多重耐药金黄色葡萄球菌的耐药谱
Tab. 1 Spectrum of the multi-drug resistant Staphylococ-
cus aureus
抗生素
菌株
SA-871 SA-328 SA-221 SA-210 SA-112 SA-115
青霉素类 青霉素 Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
氨苄西林 Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
苯唑西林 S S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
头霉素类 头孢西丁 S S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
氨基糖苷类庆大霉素 Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
妥布霉素 Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
阿米卡星 S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
四环素类 四环素 S S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
大环内酯类红霉素 Ｒ Ｒ S I Ｒ Ｒ
糖肽类 万古霉素 S S S S S S
替考拉宁 S S S S S S
林可霉素类克林霉素 Ｒ Ｒ S S Ｒ Ｒ
喹诺酮类 环丙沙星 S S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
其他抗生素呋喃妥因 S S S S S S
利奈唑胺 S S S S S S
复方磺胺 Ｒ Ｒ S S S S
利福平 S Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ Ｒ
注:Ｒ为耐药，S为敏感
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3. 2 头花蓼的抗菌活性结果
3. 2. 1 头花蓼提取物对耐药金黄色葡萄球菌的抑
菌圈 从表 2 可以看出，头花蓼水提取物和 60%
乙醇提取物 (浓度为 250 μg /disc 时)对耐药金黄
色葡萄球菌均有一定的抑菌作用，60%乙醇提取物
对耐药金黄色葡萄球菌的抑菌活性较水提取物的抑
菌活性强，且发现头花蓼水提物的抑菌效果与没食
子酸 (浓度为 125 μg /disc)相差不大，而 60%乙
醇提取物的抑菌作用强于没食子酸。同一种提取物
对不同耐药谱的细菌的抗菌活性不尽相同，抑菌圈
最大相差 4 mm。另外，结果显示头花蓼水提取物
和 60%乙醇提取物对耐药菌株的抑菌作用强于其
对敏感菌 ATCC 25923 的作用，而没食子酸对敏感
菌的抑菌作用强于耐药菌。
表 2 头花蓼对各耐药金黄色葡萄球菌的抑菌圈 (mm)
Tab. 2 Diameter of antibacterial rings of P． capitatum
against multiresistant S． aureus (mm)
菌株
水提物
250 μg /disc
60%乙醇提取物
250 μg /disc
没食子酸
125 μg /disc
SA-871 8 15 8
SA-328 8 12 8
SA-221 12 14 10
SA-210 8 13 8
SA-112 12 16 8
SA-115 12 12 12
ATCC 25923 8 12 12
3. 3 头花蓼提取物最低抑菌质量浓度 ( MIC) 和
最低杀菌质量浓度 ( MBC) 头花蓼提取物对各
耐药金黄色葡萄球菌的 MIC 值和 MBC 值数据见表
3，从表 3 可见头花蓼提取物对多重耐药金黄色葡
萄球菌具有一定的抑菌和杀菌作用，其 MIC 值范
围在 0. 78 ～ 3. 12 mg /mL，MBC 值范围在 1. 56 ～
25. 00 mg /mL，从 MIC值结果看，头花蓼两提取物
的抑菌活性相差不大，并大于没食子酸活性。从
MBC值结果看，头花蓼 60%乙醇提取物的杀菌效
果较水提物和没食子酸好。水提物对各耐药菌株的
MIC值相差不大，但 MBC 值均不同。60%乙醇提
取物对各耐药菌株的 MIC 值和 MBC 值均相差
不大。
3. 4 头花蓼提取物对耐药金黄色葡萄球菌的 IC50
值 从表 4 看出头花蓼提取物对耐药金黄色葡萄球
菌的 IC50值范围在 0. 46 ～ 1. 81 mg /mL，没食子酸
的 IC50值大于头花蓼水提物和 60%乙醇提取物，除
SA-221 和 SA-115 外，60%乙醇提取物的 IC50值小
于水提物。
表 3 头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌的 MIC 值和
MBC值
Tab. 3 MIC and MBC value of P． capitatum against multi-
resistant S． aureus
菌株
MIC /(mg·mL －1)
水提 醇提 没食子酸
MBC /(mg·mL －1)
水提 醇提 没食子酸
SA-871 3. 12 1. 56 3. 12 6. 25 3. 12 3. 12
SA-328 3. 12 3. 12 6. 25 3. 12 3. 12 ＞ 25. 00
SA-221 1. 56 3. 12 6. 25 6. 25 6. 25 12. 50
SA-210 1. 56 1. 56 3. 12 12. 50 3. 12 6. 25
SA-112 1. 56 1. 56 6. 25 ＞ 25. 00 3. 12 12. 50
SA-115 0. 78 1. 56 3. 12 1. 56 1. 56 3. 12
表 4 头花蓼对各耐药金黄色葡萄球菌的 IC50值 (mg/mL)
Tab. 4 IC50 value of P． capitatum against multiresistant S．
aureus (mg/mL)
菌株 水提物 60%乙醇提取物 没食子酸
SA-871 1. 81 1. 06 1. 98
SA-328 1. 56 1. 27 1. 96
SA-221 0. 96 1. 21 2. 02
SA-210 0. 88 0. 82 1. 39
SA-112 1. 12 0. 94 1. 41
SA-115 0. 46 0. 74 0. 96
4 讨论与结论
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，SA)
在自然界中分布广泛，多种动物及人均有易感性。
目前，国内外对 SA 感染主要采用抗生素治疗，但
SA对抗生素极易产生耐药。随着抗生素的广泛使
用，耐药金黄色葡萄球菌不断呈现，并出现多重耐
药趋势。从而使得 SA 所致感染不仅治疗难度大、
病死率高，而且有逐年增加的趋势。其中 MＲSA
已成为一些大型综合医院最常见的医院感染菌，且
常表现为多重耐药性，给临床治疗带来了极大的困
难。因此，研发对多重耐药金黄色葡萄球菌具有很
好抗菌作用，并不易产生耐药性的药物是目前临床
的需要。大量研究表明从植物中提取具有抗菌活性
的活性部位是解决这一问题行之有效的方法。
本课题组是在前期研究中发现头花蓼提取物
(石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物)具有抗金黄色
葡萄球菌活性的基础上［12］，对其抗菌活性部位进
行进一步追踪，并探讨其对多重耐药金黄色葡萄球
菌的抗菌效果。结果显示，头花蓼水提物对各耐药
菌的抑菌作用以 IC50值为指标，参考抑菌圈直径和
MIC值，发现头花蓼水提物对 SA-115 的抑菌效果
最好，其次为 SA-210，SA-221，SA-112，对 SA-
328 和 SA-871 的抑菌效果最差，MBC 值显示，头
花蓼水提物的杀菌作用由大到小为 SA-115 ＞ SA-
328 ＞ SA-871 = SA-221 ＞ SA-210 ＞ SA-112。头花蓼
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60%乙醇提取物对 SA-115 的抑菌效果最好，其次
为 SA-210，SA-112，对 SA-221 和 SA-871 的抑菌效
果最差，MBC结果显示，头花蓼 60%乙醇提取物
对各耐药菌株的杀菌效果相差不大，对 SA-115 效
果较好，对 SA-221 效果较差，其余结果相同。可
见头花蓼两种提取物对 SA-115 均具有很好的抑菌
和杀菌活性，SA-115 和 SA-112 虽然耐药谱结果一
致，但头花蓼提取物对两者的抗菌效果并非完全一
致，提示中药在应用于细菌感染疾病时，也有必要
进行相应的药敏试验。结果还显示同一种提取物对
不同耐药金黄色葡萄球菌菌株显示出不同程度的体
外抗菌活性。两种提取物比较，以 60%乙醇提取
物的抗菌效果较强，并具有较好的杀菌效果。本结
果与于明报道［8］的头花蓼 70%乙醇提取物对金黄
色葡萄球菌的抗菌活性优于水提物的活性具有相同
之处;与 Liao 等报道的头花蓼提取物对金黄色葡
萄球菌 ATCC25923 的抗菌活性水提物强于 70%乙
醇提取物结果不同。原因可能是菌株不同和乙醇浓
度不同，本项目所用菌株为临床多重耐药金黄色葡
萄球菌，Liao 等报道的是标准菌株 ATCC25923，
本研究也显示头花蓼提取物对临床分离耐药菌和标
准的敏感菌 ATCC 29523 表现出不同的抑制作用，
于明则未注明所用金黄色葡萄球菌的来源。可见，
头花蓼 60%乙醇提取物含有发挥抗多重耐药金黄
色葡萄球菌活性的主要成分。
对头花蓼活性成分的研究显示，没食子酸一直
作为头花蓼的主要活性成分，有文献报道其为头花
蓼抗菌的主要成分［6］，但是否存在其他的抗菌成
分是个疑问，Liao 等报道了头花蓼的不同活性部
位，包括多糖和蛋白质、没食子酸及其类似物、黄
酮类、单宁类和三萜类和甾类成分的抗菌活性，它
们对金黄色葡萄球菌的抗菌效果由大到小为单宁类
＞黄酮类 ＞三萜类和甾类 ＞没食子酸及类似物，多
糖和蛋白质无抗菌活性。本课题也针对这一问题，
在对头花蓼提取物抗菌活性研究的同时对没食子酸
阳性对照药物的抗菌活性进行了测定，发现头花蓼
水提物和 60%乙醇提取物的抗菌活性均较没食子
酸的活性强，由此可见，头花蓼中除没食子酸外，
还存在其它抗菌活性成分，单宁和黄酮类可能为头
花蓼的主要抗菌活性成分。
本研究为头花蓼的进一步研究提供了参考，并
为头花蓼的临床应用提供依据。
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2014 年 9 月
第 36 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2014
Vol． 36 No． 9