全 文 ：2012 年 4 月第 19 卷第 4期 中国中医药信息杂志 ·47·

·中药研究与开发·
珠芪复肝颗粒中珠子草的鉴别及含量测定
李彩东 1,梁云 2,张伟 1,吴斌 1
1.兰州市第二人民医院肝病研究所,甘肃 兰州 730046；2.兰州市肺科医院药剂科,甘肃 兰州 730046
摘要：目的 建立珠芪复肝颗粒中珠子草的鉴别和没食子酸的含量测定方法。方法 采用薄层色谱法对珠子草
进行定性鉴别。采用高效液相色谱法测定没食子酸的含量,以 C18柱分离,柱温为室温,甲醇-0.1%磷酸水溶液(10∶90)
为流动相,检测波长为 270 nm,流速 1.0 mL/min。结果 薄层色谱中能鉴别出珠子草。没食子酸的线性范围为
0.003 3～0.025 0 µg(r＝0.999 9),平均回收率为 100.08%(RSD＝1.24%,n＝5)。结论 所建立的方法简便、重复性
好,可用于珠芪复肝颗粒中珠子草的鉴别和没食子酸的含量测定。
关键词：珠芪复肝颗粒；珠子草；没食子酸；薄层色谱法；高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.04.018
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2012)04-0047-02
Identification and Content Determination of Herba Phyllanthus niruri L. in Zhuqi Fugan
Granules LI Cai-dong1, LIANG Yun2, ZHANG Wei1, WU Bin1 (1.Institute of Hepatology, the Second Peoples
Hospital of Lanzhou, Lanzhou 730046, China；2.Pharmacy Department of Lanzhou Tuberculosis Hospital, Lanzhou
730046, China)
Abstract：Objective To establish the methods for the identification of Herba Phyllanthus niruri L. and
content determination of gallic acid in Zhuqi Fugan granules. Methods TLC was used for the identification
of Herba Phyllanthus niruri L.. HPLC was applied for the determination of gallic acid, using a column of
C18. The column temperature was at room temperature, with methanol-0.1% phosphoric acid as amobile
phase. The flow rate was 1.0 mL/min, and the detection wavelength was at 270 nm. Results Herba
Phyllanthus niruri L. could be identified by TLC. The linear range of gallic acid was 0.003 3－0.025 0 µg
(r＝0.999 9) with the average recovery of 100.08% (RSD＝1.24%, n＝5). Conclusion The established
methods are simple and reproducible, and can be used for the identification of Herba Phyllanthus niruri L.
and content determination of gallic acid in Zhuqi Fugan granules.
Key words：Zhuqi Fugan granules；Herba Phyllanthus niruri L.；gallic acid；TLC；HPLC
珠芪复肝颗粒(珠子草、黄芪、甘草等)为兰州市第二人民
医院院内制剂(甘药制字 Z04010909),有清热解毒、舒肝利胆、
扶正祛邪之功效,临床用于乙型病毒性肝炎的治疗。为了控制
本品质量,本研究应用薄层色谱法(TLC)鉴别制剂中的珠子草,
采用高效液相色谱法(HPLC)测定制剂中主药珠子草所含有效
成分没食子酸的含量。
1 仪器与试药
岛津LC-10AVP高效液相色谱仪(包括SPD-10AVP二极管阵
列检测器、LC-10AT 二元泵、C-R10A 色谱工作站)；FA2004N
电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；CQX25-12 超声波提
取器(上海必能信超有限公司)。
没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号 0731-
9501,供含量测定用)；珠子草对照药材(中国药品生物制品检
定所,批号 121319-200301,供鉴别用)；珠芪复肝颗粒(兰州市
第二人民医院制剂室,批号20090601、20090604、20090607、
20090609、20090612,每包 10 g)；薄层层析硅胶 G板(中国青
岛海洋化工集团出品)；甲醇为色谱纯(天津光夏精细化工厂研
究所)；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
取珠芪复肝颗粒约1 g,研细,加甲醇10 mL,超声处理10 min,
过滤,滤液作为供试品溶液。另取珠子草对照药材 0.5 g,加甲
醇10 mL,如上法操作,滤液作为对照药材溶液。照TLC试验[1-2],
吸取上述溶液各 5 µL 分别点于硅胶 G薄层板上,以环己烷-氯
仿-乙酸乙酯(20∶5∶5)上行展开、取出、挥干溶剂,喷 10%硫
酸乙醇溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。日光下检视,样品供
试液色谱中在与对照药材色谱相应的位置上有相同颜色的斑
点。阴性对照无干扰。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱为ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5 µm)；
流动相：A为甲醇,B为 0.1%磷酸水溶液。梯度洗脱条件：0～
15 min,A-B(10∶90)；15～17 min,A-B(90∶10)；17～35 min,
A-B(10∶90)。流速1.0 mL/min；柱温为室温；检测波长为270 nm。
理论塔板数按没食子酸计算不低于 5 000。
·48· Chinese Journal of Information on TCM Apr.2012 Vol.19 No.4

在此色谱条件下,供试品中没食子酸峰分离良好,阴性对
照对没食子酸的测定无干扰。色谱图见图 1。





A B





C
注：A.对照品；B.阴性对照；C.供试品
图 1 珠芪复肝颗粒 HPLC 图
2.2.2 对照品溶液的制备 取没食子酸对照品适量,精密称
定,加 30%甲醇制成每 1 mL 含 41.6 µg的溶液即得。
2.2.3 供试品溶液的制备 取本品 2 g,研细,取约 0.5 g,精
密称定,置 250 mL容量瓶中,加入30%甲醇溶液约 250 mL,称定
重量,超声处理(功率 300 W,频率 50 kHz)30 min,取出放冷,
再称定重量,用 30%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤
液再经 0.45 µm 微孔滤膜过滤后,即得。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除珠子草以外
的其他药材,按珠芪复肝颗粒的制备工艺和供试品溶液的制备
方法制备阴性对照溶液。
2.2.5 线性范围考察 分别精密吸取没食子酸对照品溶
液 0.1、0.2、0.25、0.5、0.75 mL,分别置 25 mL 容量瓶中,
用30%甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样20 µL,依次注入高效液相
色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积积分值,以峰面积积分值
为纵坐标,对照品进样量(µg)为横坐标,绘制标准曲线,得回归
方程 Y＝62 059.84X－35 650.77,r＝0.999 9。结果表明,没
食子酸在 0.003 3～0.025 0 µg 范围内呈良好线性关系。
2.2.6 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液 20 µL,注入高
效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定,重复进样测定 5 次,以
外标法计算没食子酸含量。结果没食子酸平均含量为3.85 mg/g,
RSD＝0.71%,表明本方法仪器精密度良好。
2.2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液,分别于配制后0、
2、4、8、12 h 依样品测定法测定,考察没食子酸峰面积的变
化。结果没食子酸含量 RSD＝0.84%,可见,供试品溶液在室温
放置 12 h稳定性良好。
2.2.8 重复性试验 精密称取同一批号(20090601)的5份样品,
制成5份供试品溶液,精密吸取10 µL,注入高效液相色谱仪,测定
没食子酸的含量。结果没食子酸含量RSD＝0.35%,重复性良好。
2.2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品
(20090601)0.2 g,研细,分别精确加入没食子酸对照品溶液
(0.44 mg/mL)1.0 mL,制成供试品溶液,依法测定没食子酸含量,
计算回收率。结果见表 1。
表 1 没食子酸加样回收率试验结果
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均加收
率(%)
RSD
(%)
0.200 4 0.382 3 0.440 0.823 1 100.1
0.200 5 0.382 5 0.440 0.820 9 99.8
0.200 3 0.382 2 0.440 0.839 5 102.1 100.08 1.24
0.200 2 0.382 5 0.440 0.811 8 98.7
0.200 3 0.382 1 0.440 0.819 6 99.7
2.2.10 样品含量测定 精密称取已成型的珠芪复肝颗粒 5
批,按供试品的制备方法制备成供试品溶液,分别精密吸取对
照品试液和供试品溶液各 20 µL,注入色谱仪,以外标法进行测
定。结果见表 2。
表 2 样品中没食子酸含量测定结果
批号 没食子酸含量(mg/粒) 平均含量(%) RSD(%)
20090601 3.828 6 0.650 0
20090604 3.830 5 0.520 0
20090607 3.827 4 3.827 8 0.68
20090609 3.825 3 0.460 0
20090612 3.827 6 0.510 0
3 讨论
珠子草为叶下珠属植物珠子草(Phyllanthus niruri Linn)
的干燥全草,具有平肝清热、利水解毒之功效,用于肠炎、肝炎、
痢疾、尿路感染、无名肿痛等治疗。多酚和可水解蹂质为叶下
珠类的主要活性成分,没食子酸的含量最高,具有抗乙肝病毒
活性的作用[3-4]。
本试验在确定检测波长时对没食子酸对照品在200～300 nm
波长之间进行全波段紫外扫描。结果没食子酸在 270 nm 波长
处有最大吸收,随着波长增长,紫外吸收急剧降低,故最终选择
270 nm为检测波长。
本试验在提取工艺考察中,采取浸渍、超声法与加热回流
法,结果表明以超声法提取的供品溶液没食子酸峰的峰面积较
稳定,重复性较好。本试验对超声提取时间进行了比较,样品分
别超声 15、30、60 min 在同样条件下测定,结果超声 30 min
的峰面积最大,故选择超声时间为 30 min。
本试验考察了甲醇-水-磷酸(4∶96∶0.5)[3]、醋酸-水(2∶
98)、甲醇-水-磷酸(20∶80∶0.5)、甲醇-0.01%磷酸溶液(10∶
90)等作流动相时对药物分离的影响。结果发现,以甲醇-0.1%磷
酸水溶液作为流动相梯度洗脱,其分离效果最好,色谱峰形对称。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科
技出版社,2010：附录 34.
[2] 李彩东,田薇,梁云,等.复方苦味叶下珠胶囊的制备及质量控制[J].中
国药房,2005,16(7)：511-513.
[3] 张兰珍,王晓强,贾辉,等.高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的含
量[J].北京中医药大学学报,2000,23(6)：46-47.
[4] Liu SP, Chen SM, Zhu WD. Advance studies of biological activity of
quercetin and its derivations[J]. Chin Tradit Herb Drugs,1991,22：182.
(收稿日期：2011-08-19,编辑：陈静)
t/min