全 文 ：西北农业学报　2009 , 18(6):306-309
Acta A griculturae Boreali-occidentalis Sinica
黄珠子草不同部位总黄酮和总酚含量及抑菌活性测定①
张　云1 ,韩　树1 ,王俊儒 2
(1.西北农林科技大学 生命科学学院 ,陕西杨凌　712100;2.西北农林科技大学理学院 ,陕西杨凌　712100)
摘　要:采用紫外分光光度法 , NaNO 2-Al(NO 3)-NaOH 和 Folin-Ciocalteu 比色法测定黄珠子草根 、茎 、叶 、果
实 4个部位中总黄酮 、总酚含量 , 采用滤纸片法测定了根 、茎 、叶 、果实 4 个部位乙醇提取物对 7种常见病原菌
(草莓枯萎病菌 、辣椒疫霉病菌 、青霉病菌 、黄瓜枯萎菌 、西瓜枯萎病菌 、大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌)的抑菌活
性。叶中总黄酮和总酚含量均最高 ,分别为 31.07 mg· g -1 、23.85 mg· g -1 ,叶中总黄酮含量分别是茎 、根及
果实的 2.86 、1.83 、1.21 倍;叶中总酚分别是茎 、根及果实的 27.10、22.29、2.52 倍。叶中总黄酮 、总酚含量均
较其他部位高 ,果实次之 , 茎最低。在预设质量浓度为 40 mg ·m L-1时 ,叶的乙醇提取物对病原菌的抑制效
果最好 ,特别是对黄瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 , 抑制率分别为 100%、89.78%、100%, 且最
小抑菌质量浓度分别为 10 mg · mL-1 、20 mg· mL -1 、10 mg ·m L-1 。果实部分的抑菌效果稍次于叶部分
的 ,但对黄瓜枯萎病原菌表现出强抑菌性 , 其抑制率为 98.13%。根部分整体抑菌效果较弱 ,但对黄瓜枯萎病
原菌 、大肠杆菌有较强的作用 , 抑制率分别为65.28%, 90.04%。而茎基本上没有什么活性。叶和果实的活性
成分含量均较高 ,抑菌活性也较强 , 药用价值很高 ,是黄珠子草的主要药用部位。
关键词:黄珠子草;总黄酮;总酚;抑菌活性
中图分类号:R284.1　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1004-1389(2009)06-0306-04
Determination of the Content of Total Flavonoids and Total Phenolics and the
Antibacterial Activities in Different Parts from Phy llanthus simplex Retz.
ZHANG Yun1 , HAN Shu1 and WANG Junrun2＊
(1.The C ollege of Life S cience , 2.The College of S cien ces , Northw est A &F University , Yangling Shaanxi　712100 , C hina)
Abstract:The objective of this research w as to clarify the medicinal value and i ts bioactitves in ro ot ,
stem , leaf , f ruit o f Phy llanthus simp lex Retz.Ultraviolet-visible spect ropho tometric method was used
to determine the content of to tal flavonoids and total phenolics in ro ot , stem , leaf and fruit o f Phy l-
lanthus simp lex Retz.Filter paper me thod w as used to determine the ant ibacterial activi ty o f ethano l
e xt racts of dif ferent pa rts f rom Phy llanthus simplex Retz.on seven pa thogens.The content of total
flavonoids and total phenolics w ere the highest in the leaf , and that w ere 31.07 mg · g-1 and 23.85
mg · g-1 , respectively.To tal f lav onoids in the leaf w ere stem , root and fruit of times 2.86 , 1.83 ,
1.21.To tal phenolics in leaf w ere the stem , roo t and frui t 27.10 , 22.29 , 2.52 times.The content of
to tal flavonoids in f ruit w as low er than that in leaf , and w as low est in stem .In the set concentration
of 40 mg ·mL-1 , the antibacte rial activi ty of ethanol ext ract of leaf w as the best.Especially fo r Fu-
sarium oxysporum f.sp.Cucumerinum.H , Escherichia coli , S taphy lococcus aureas.And the inhibi-
to ry rates we re 100%, 89.78%, 100%, respectively .I ts M IC w as respectively 10 mg ·mL-1 , 2 mg
·mL-1 , 10 mg ·mL-1 .The antibacte rial activi ty of f rui t par t was not bet ter than that of leaf part ,
but the antibacterial activi ty to Fusarium oxysporum f.sp.Cucumerinum.H was high , and the in-
①收稿日期:2009-02-04　　修回日期:2009-06-10
基金项目:教育部“新世纪优秀人才支持计划”基金(NCET-05-0855)。
作者简介:张　云(1983-),女 ,湖北京山人 ,在读硕士 ,专业方向:天然药物化学。 E-mai l:w indyzhan gyu n@163.com
＊通讯作者:王俊儒(1966-),男 , 陕西杨凌人 ,博士 ,教授 ,主要从事植物资源化学及重金属污染的植物修复机理方面
的研究。 Email:w angjr07@163.com
hibi to ry rate w as 98.13%.The antibacterial activity of root was lower , but the antibacterial activity to Fu-
sariumoxysporum f.sp.Cucumerinum.H , Escherichia coli were strong.And the inhibitory rates were 65.
28%, 90.04%, respectively.The content of bioactives in leaf and fruit were high , and the antibacterial activity
were strong.The leaf and fruit were the main medicinal part of Phy llanthus simplex Retz.
Key words:Phy llanthus simplex Re tz.;Total f lavonoids;To tal phenolics;Antibacte rial activi ties
　　黄珠子草(Phy llanthus simple x Retz.)是大
戟科(Euphobiceae)叶下珠属(Phy l lanthus)植
物 ,又名珍珠草 、鱼骨草 、地珍珠 、假芋等 。民间使
用广泛 ,具有清热 、解毒 、明目等功效 ,主治肝炎 、
肠炎痢疾 、泌尿系统感染等症[ 1] 。国内外自 40年
代就开始对该属其他植物进行化学成分及药理研
究 ,发现该属其他植物含有多种类型的化学成分 ,
并有多种生理药理活性 ,特别是抗病毒作用[ 2] 。
本试验拟对黄珠子草不同部位总黄酮 、总酚的含
量进行测定 ,并采用滤纸片法测试不同部位乙醇
提取物的抑菌活性 ,以期为黄珠子草的进一步开
发利用提供理论依据 。
1　材料与和方法
1.1　试验材料
黄珠子草于 2006 年 9 月采自陕西汉中市梁
山 ,经西北农林科技大学生命学院常朝阳副教授鉴
定为黄珠子草(Phy llanthus simplex Retz.),分拣成
茎、叶 、根 、果实各部分 ,分别晒干后粉碎备用。
草莓枯萎病原菌(Fusarium oxy sporum f.
f rag ariae)、辣椒疫霉病原菌(Phy tophthora Cap-
sici)、青霉菌(Penici l lium.expansum)、黄瓜枯
萎病原菌(Fusarium oxy sporum f.sp.Cucume-
rinum.H)、西瓜枯萎病原菌(Fusarium axy spo-
rum f.niv eum)、大肠杆菌(E scherichia col i)、金
黄色葡萄球菌(S taphy lococcus aureas)等 7种病
原菌均由西北农林科技大学无公害农药研究服务
中心提供 。
1.2　仪器及试剂
SHHW21-420恒温水浴锅(天津泰斯特),
KQ3200型超声波清洗器(宁波新芝), AUW120型
万分之一天平(日本岛津), UV-2100紫外分光光度
仪(上海光谱), LXJ-IIB型离心机(上海安亭)。
琼脂 ,乙醇 、石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁醇 、
丙酮等有机试剂均为分析纯 ,没食子酸 、芦丁均为
标准品(购于中检所),其余无机试剂均为分析纯。
1.3　标准曲线制作及提取液制备
1.3.1　标准曲线制作　芦丁标准曲线制作:精密
称取芦丁标准品 0.0050 g ,放入 50 mL 容量瓶
中 ,先用约 10 mL 的无水乙醇溶解 ,再用蒸馏水
定容至 50 mL(标准品的浓度为 0.1 mg ·
mL
-1)。取芦丁标准液 0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、
5.0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中 ,各精密加入
5%NaNO 2 溶液 1 mL , 摇匀 ,静置 6 min , 加入
10%Al(NO 3)3 溶液 1 mL 摇匀 ,静置 6 min ,再加
入 4%N aOH 溶液 3 mL ,蒸馏水定容至刻度 ,摇
匀 ,静置 15 m in ,测定各标准溶液吸光度 A 510 ,以
吸光度为纵坐标 ,样品浓度为横坐标 ,绘制标准曲
线。得回归方程 Y =10.31x +0.001 , R2 =
0.9989 , 质量浓度单位 mg · mL-1 , 在 0.01 ～
0.05范围内线性关系良好 。
没食子酸标准曲线制作:制作没食子酸标准
曲线 。精密称取没食子酸 0.0050 g ,放入 50 mL
容量瓶中 ,用水定容到 50 mL(质量浓度为 0.1
mg ·mL-1)。取没食子酸标准液 0.0 、0.1 、0.2 、
0.3 、0.4 、0.5 mL 分别置于 10 mL 具刻度试管
中 ,按顺序分别加入福林试剂 3 mL ,静置 7 ～ 8
min ,然后分别加入 10%Na2CO 3 各3 mL ,反应1
h后 ,用蒸馏水定容至刻度 ,以未加入标准液的反
应液作对照 ,在 725 nm 处测定吸光度 ,绘制标准
曲线 ,得回归方程[ 4-5] ,Y =145.6 x+0.098 , R2 =
0.9972 ,在 0.001 ～ 0.005范围内线性关系良好。
1.3.2　提取液制备　提取液制备:准确称取各部
分供试样品干粉约 0.1000 g 置于 10 mL 离心管
中(每个样品设置 3次重复),加入 4 mL 无水乙
醇 ,超声提取 2 次 ,每次 30 min ,离心取上清液 ,
合并上清液用无水乙醇定容于 10 mL 具塞刻度
试管中 ,振荡摇匀 ,待用。
1.4　总黄酮 、总酚含量测定
总黄酮含量测定:准确量取 1.3.2 中制备好
的样液 1 mL 于 10 mL 刻度试管中 ,按 1.3.1中
所述芦丁标准曲线制作的方法进行反应 ,测定样
品吸光度 。
总酚含量测定:准确量取 1.3.2中制备好的
样液 1 mL 于 10 mL 刻度试管中 ,按 1.3.1中所
述没食子酸标准曲线制作的方法进行反应 ,测定
·307·6 期　　　　　　　　　　张　云等:黄珠子草不同部位总黄酮和总酚含量及抑菌活性测定
样品吸光度。
1.5　黄珠子草茎叶抑菌活性研究
1.5.1　样品液的制备　另称取各干粉约 4 g ,放
入容量瓶中 ,加入 20 mL 乙醇 ,超声提取 2次 ,每
次 30 min ,离心取上清液 ,合并上清液并进行浓
缩 ,得各部分乙醇提取物浓缩浸膏 ,用体积比为
50%的丙酮-水为溶剂 ,将各浸膏配制成 40 mg ·
mL -1的样品液备用。
1.5.2　PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基的制备
　将去皮后的马铃薯约 400 g 切成薄片 ,加 1 L
水煮沸 20 min ,取汁加入约 20 g 葡萄糖 ,18 g 琼
脂 ,加热溶化 ,定容到 1 L ,分装 ,高压湿热灭菌[ 6]
(121℃,30 min),备用。
1.5.3　滤纸片法测定活性　测定 1.5.1制备样
品液的抑菌环的直径[ 7-8] ,并按下列公式计算生长
抑制率:生长抑制率=[(对照菌落直径-菌饼直
径)-(处理菌落直径-菌饼直径)] /(对照菌落直
径-菌饼直径)×100%
最小抑菌浓度(MIC)的测定:将抑菌活性强
的样品稀释为 25 、20 、15 、10 、5 mg ·mL-1系列质
量浓度梯度 ,进行抑菌活性比较 ,步骤同上。
2　结果与分析
2.1　黄珠子草不同部位有效成分含量
黄珠子草的茎 、叶 、根 、果实各部位均含有总
黄酮 、总酚成分 ,但含量存在一定差异。本试验采
用分光光度法测定了不同部位的总黄酮 、总酚的
含量 ,结果见表 1 。
表 1　黄珠子草不同部位有效成分含量
Table 1　The content of effective components in different
parts from Phyllanthus simplex Retz.
不同部位
Dif ferent
part s
总黄酮含量/(mg· g -1)
Conten t of total
f lavonoids
总酚含量/(mg· g -1)
C on tent of
total phenolics
茎 S tem 10.86±0.82 0.88±0.08
叶 Leaf 31.07±2.34 23.85±1.82
根 Root 17.01±1.23 1.07±0.12
果实 Fruit 25.74±1.86 9.45±0.85
　　由表 1可知 ,黄珠子草各部位总黄酮 、总酚含
量在叶中最高 ,分别为(31.07±2.34)、(23.85±
1.82)mg · g -1 ;而这 2 类成分在茎中含量最低 ,
分别为(10.86±0.82)mg · g -1 、(0.88±0.08)
mg · g-1 。叶中总黄酮含量分别是茎 、根及果实
含量的 2.86 、1.83 、1.21倍;叶中总酚含量分别是
茎 、根及果实含量的 27.10 、22.29 、2.52倍。叶中
总黄酮 、总酚含量均较其他部位高 ,果实次之 ,茎
最低。得出的结论与文献[ 9-11]报道的该属其他
植物一致 。
2.2　黄珠子草不同部位乙醇提取物的抑菌活性
植物不同部位含有的有效成分的种类及含量
也不相同 。目前 ,对黄珠子草抑菌方面的研究未
见报道 ,本试验在含量测定的基础上 ,对黄珠子草
不同部位抑菌效果测试 ,比较和分析了不同部位
抑菌活性的差异 ,结果见表 2。
　　从表 2可以看出黄珠子草不同部位样液在预
设的浓度 40 mg ·mL-1下对供试菌株表现出一
定程度的抑菌活性 。总的来看 ,叶部分的抑菌活
性最好 ,特别是对黄瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌 ,其抑制率分别为:100%,89.78%,
100%。果实部分的抑菌效果稍次于叶部分的 ,但
对黄瓜枯萎病原菌表现出强抑菌性 ,其抑制率为
98.13%。根部分整体表现抑菌作用较弱 ,但对黄
瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌有较强的作用 ,抑制率分
别为 65.28%,90.04%;而茎部分提取物没有抑菌
作用或作用较小 ,相反地对西瓜枯萎病原菌、大肠杆
菌有一定的促进作用。由此可看出 ,黄珠子草叶醇
提物的抑菌活性最强 ,含有的活性物质较多。
2.3　黄珠子草叶部位醇提物对 3种病原菌的最
小抑制浓度(MIC)
由表 2可知 ,叶部位醇提物对黄瓜枯萎病原
菌 、大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 3种病原菌的抑制
效果最强 ,本试验对其进行最小抑制浓度试验 ,结
果见表 3。
表 2　黄珠子草不同部位乙醇提取物对 7 种病原菌的抑制率
Table 2　 Inhibitory rates of ethanol extracts in dif ferent parts from Phyllanthus simplex Retz.on seven pathogens
不同病原菌 Dif ferent pathogens 茎/ % Stem part 根/ % Root part 叶/ % Leaf part 果实/ % Fruit part
草莓枯萎病原菌 F.f.f rag ariae 6.51±0.27 0.00±0.00 37.99±0.16 67.97±0.13
辣椒疫霉病原菌 P.Cap sici 0.00±0.00 22.61±0.54 68.45±0.34 14.52±0.27
青霉菌 P.ex pansum 0.00±0.00 8.43±0.06 58.82±0.25 8.61±0.15
黄瓜枯萎病原菌 F.f.sp.Cucumerinum.H 18.26±0.59 65.28±0.37 100.00±0.00 98.13±0.14
西瓜枯萎病原菌 F.m f.niveum - 14.71±0.14 45.17±0.14 76.27±0.16
大肠杆菌 E.col i - 90.04±0.16 89.78±0.22 50.74±0.47
金黄色葡萄球菌 S.aureas 2.23±1.76 22.13±0.17 100.00±0.00 62.13±0.47
注:“ -”表示有促进作用。Note:“ -” g row th st imulat ion.
　　从表 3中可以看出黄珠子草叶乙醇提取部分 对黄瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌三
·308· 西　北　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　18 卷
种病原菌的最小抑菌质量浓度分别为 10 、20 、10
mg ·mL-1 。
2.4　黄珠子草不同部位总黄酮 、总酚含量与 7种
病原菌抑菌活性相关性分析
由表 4可以看出 , 7 种病原菌与总黄酮的相
关系数均大于 0.6 ,而且黄瓜枯萎病原菌和金黄
色葡萄球菌的相关系超过 0.9 ,说明其抑菌效果
与总黄酮含量呈显著的正相关;辣椒疫霉病原菌 、
青霉菌 、金黄色葡萄球菌与总酚的相关系数均超
过 0.9 ,说明其酚类中含有许多抑制这 3种菌的
活性物质 。结果表明 ,总黄酮与总酚为黄珠了草
的有效成分。
表 3　黄珠子草叶的醇提物对 3 种病原菌的最低抑制浓度
Table 3　The minimal inhibitory concentration of ethanol
extracts of leaf from Phyllanthus simplex
Retz.against three pathogens
不同病原菌
Dif ferent pathogens
不同的质量浓度梯度/(mg·mL-1)
Dif ferent concen t rat ion gradient
20 15 10 5 2.5
黄瓜枯萎病原菌
F.f.sp.Cucumer inum.H - - - ++ ++
大肠杆菌
E.co li - + + ++ +++
金黄色葡萄球菌
S.aureas - - - ++ ++
注:-有较强抑制效果;+较弱的抑制效果。
Note:-in hibitory effect;+les s inhibitory ef fect.
表 4　2 种有效成分含量与 7 种病原菌抑菌活性相关性分析
Table 4　Correlation analysis on the content of two active components and inhibitory rates of seven pathogens
相关系数 r
Co rrelation
coeff icient
草莓枯萎病原菌
F.f.
f r agar iae
辣椒疫霉病原菌
P.Cap sici
青霉菌
P.ex pansum
黄瓜枯萎病原菌
F.f.sp.
Cucumer inum.H
西瓜枯萎病原菌
F.m f.
n iveum
大肠杆菌
E.col i
金黄葡萄球菌
S.aureas
与总黄酮的相关系数 r 1
C orrelat ion coef ficien t r1
0.733 0.815 0.809 0.948 0.613 0.649 0.989
与总酚的相关系数 r 2
C orrelat ion coef ficien t r2
0.555 0.902 0.947 0.740 0.362 0.496 0.963
3　讨论
谢姗[ 12] 等对贵阳产黄珠子草全草的黄酮含
量进行了测定 ,结果发现总黄酮含量高达 24.02
mg · g-1 ,本试验发现 ,黄珠子草根 、茎 、叶 、果实4
个部位含有的总黄酮量不同 ,其叶含量最高 ,可作
为黄珠子草黄酮类成分提取的主要部位;叶中的
总酚含量较高 ,达 23.85 mg · g-1 ,其余部位含量
均较低。因此叶部位是总黄酮 、总酚的富集部位 ,
可作为这 2种有效成分提取的资源 。
4个部位提取物对 7种病原菌的抑制活性不
同 ,各个部位抑制的病原菌的种类也不同 ,在预设
质量浓度为 40 mg ·mL-1时 ,叶部分的抑菌活性
最好 ,特别是对黄瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌和金黄
色葡萄球菌 ,其抑制率分别为:100%, 89.78%,
100%。果实部分的抑菌效果稍次于叶部分的 ,但
对黄瓜枯萎病原菌表现出强抑菌性 ,其抑制率为
98.13%。根部分整体表现抑菌效果较弱 ,但对黄
瓜枯萎病原菌 、大肠杆菌有较强的作用 ,抑制率分
别为 65.28%, 90.04%;而茎部分提取物没有抑
菌作用或作用较小 ,相反地对西瓜枯萎病原菌 、大
肠杆菌有一定的促进作用 。高伦江[ 13] 对同属植
物余甘子果实的乙醇提取物进行抑菌活性研究认
为:其对青霉菌没有抑制活性 ,而对金黄色葡萄球
菌 、大肠杆菌有很强的抑制活性 ,与本研究一致。
一般认为总黄酮 、总酚为植物化学成分的有
效成分 ,本研究对总黄酮 、总含量与 7种病原菌抑
制率的相关性分析 ,认为其抑菌效果与总黄酮含
量呈正相关 ,而且黄珠子草中抑制黄瓜萎病原菌
和金黄色葡萄球菌的主要为黄酮类;抑制辣椒疫
霉病原菌 、青霉菌 、金黄色葡萄球菌的主要为酚类
化合物 ,其具体的抑菌活性成分有待进一步研究。
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·309·6 期　　　　　　　　　　张　云等:黄珠子草不同部位总黄酮和总酚含量及抑菌活性测定