全 文 ：黄珠子草提取工艺研究
吴家红 ,贾宪生＊ ,曹小勇 ,谢 珊　(贵阳中医学院 ,贵州贵阳 550002)
摘要　[目的 ]优选黄珠子草的提取工艺条件。 [方法]利用高效液相色谱法(HPLC),分别测定水煎煮液、乙醇提取液中槲皮素的含量 ,
并采用正交试验优选最佳提取工艺。 [结果]黄珠子草最佳提取方法是乙醇提取法。最佳提取工艺条件为:6倍量 70%乙醇 ,提取 3次 ,
每次 3h。 [结论 ]乙醇提取法优于水煎煮法 ,所选工艺条件合理、可行。
关键词　黄珠子草;槲皮素;正交设计;提取工艺
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)10-04494-02
StudyonExtractionTechnologyofPhylanthusvirgatusForst.
WUJia-hongetal　(GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine, Guiyang, Guizhou550002)
Abstract　[ Objective] TheaimofthisresearchwastooptimizetheextractiontechnologyofPhyllanthusvirgatusForst..[ Method] Thecon-
tentofquercetinindecoctionliquidandethanol-extractswasrespectivelydeterminedbyHPLCandtheoptimalextractiontechnologywas
definedusingorthogonaltestdesign.[ Result] TheoptimalextractiontechnologyofPhylanthusvirgatusForst.wasethanolextractionmethod
andtheoptimumextractionconditionswasasfollows:concentrationofethanolat70%, ratioofliquidtosolidat6∶1, extractionfor3times
and3hourseachtime.[ Conclusion] Theextractionrateofquercetinusingethanolextractiontechnologywashigherthanthedecoctionliquid
methodandtheoptimumextractionconditionswasrationalandfeasible.
Keywords　Phylanthusvirgatusforst.;Quercetin;Orthogonaltestdesign;Extractiontechnology
作者简介　吴家红(1962-),女 ,贵州贵阳人 ,实验师 ,从事中药化学方
面的研究。 ＊通讯作者。
收稿日期　 2009-01-19
　　黄珠子草(PhylanthusvirgatusForst.)为大戟科叶下珠
属植物 ,具有清热 、解毒 、明目等功效 ,主要用于治疗泌尿系
统感染 、痢疾肠炎和黄疸型肝炎等 [ 1] 。药理研究表明 ,叶下
珠属植物具有抗乙肝病毒作用 [ 2-4] ,并且黄珠子草对 CCl4诱
导的大鼠肝损伤具有保护作用 [ 5] 。据报道 ,黄珠子草的化学
成分主要是以槲皮素为甙元的黄酮类成分 [ 6] 。笔者以槲皮
素作为考察指标 ,采用高效液相色谱法为检测手段 ,对黄珠
子草有效成分提取工艺进行了研究 ,拟为工厂化生产提供参
考依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　试验材料。黄珠子草药材(PhylanthusvirgatusForst.),
购于贵州省兴义县 ,经贵阳中医学院杨锦纲教授鉴定为纯正
黄珠子草干燥全草。
1.1.2　仪器与试剂 。仪器:美国 Agilent-1100型高效液相色
谱系统(二极管阵列检测器 ,自动进样器 ,二元泵 ,柱温箱 ,液
相色谱工作站)。试剂:槲皮素(标样由中国药品生物制品检
定所提供);甲醇(色谱纯);纯净水;其他试剂均为分析纯。
1.2　方法
1.2.1　槲皮素的提取。
1.2.1.1　水煎煮法。称取黄珠子草药材粗粉 100 g,加 8倍
量水煎煮 3次 ,每次 1h,过滤 、合并 、浓缩 、定容至 100ml。精
密量取提取液 10 ml,测定槲皮素含量。
1.2.1.2　乙醇提取法。称取黄珠子草药材粗粉 100 g,加 6
倍量 70%乙醇回流提取 3次 ,每次 1h,过滤 、合并滤液 ,回收
乙醇 ,定容至 100 ml。精密量取提取液 10 ml,测槲皮素
含量。
1.2.2　槲皮素含量测定。
1.2.2.1　色谱条件。流动相:甲醇 -0.4%磷酸(50∶50);色
谱柱:Zorba×SB-C18(4.6mm×150mm);流速:1ml/min;柱
温:30 ℃;检测波长:360 nm。
1.2.2.2　对照品溶液的制备。精密称取槲皮素对照品
12.534 6mg,配置浓度为 0.501 4 mg/ml槲皮素的甲醇溶液 ,
取该溶液 2 ml,加甲醇定容到 25 ml,作为对照品溶液。
1.2.2.3　供试品溶液的制备。精密量取提取液 10 ml,置圆
底烧瓶中 ,加浓盐酸 1 ml,在水浴上回流水解 1 h,然后将水
解液转移至分液漏斗中 ,用水饱和的乙酸乙酯萃取 3次 ,每
次 10ml,分出乙酸乙酯层 ,合并 ,用乙酸乙酯饱和的水洗一
次 ,回收乙酸乙酯 ,将浓缩液定容在 25 ml容量瓶中 ,作为供
试品溶液。
1.2.2.4　线性关系和线性范围。取对照品溶液 ,依次进样
1, 3, 5, 7, 9 μl,按上述色谱条件测定槲皮素的峰面积 ,以槲皮
素进样量为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,
槲皮素的回归方程为:
Y=3 660.000 0X-3.689 6(r=0.999 9)
这表明槲皮素在 40.1 ～ 360.9 μg范围内峰面积积分值
与槲皮素的量呈良好的线性关系。
1.2.2.5　测定法 。对照品溶液与供试品溶液分别进样 5 μl,
测定峰面积积分值 ,利用外标一点法 ,计算供试品中槲皮素
的含量 。
1.2.3　提取工艺条件优化。选择乙醇浓度 、乙醇添加量 、回
流提取时间和提取次数作为考察因素 ,以槲皮素含量作为测
评指标 ,用 L9(34)正交设计进行试验 ,见表 1。具体步骤:称
取药材粗粉 100 g,按正交试验各项的要求 ,加入不同浓度和
不同量的乙醇 ,提取规定时间和次数 ,过滤 ,合并滤液 ,回收
乙醇 ,定容至 100 ml,最后分别测定槲皮素的含量。
表 1　乙醇回流提取工艺因素及水平
Table1　Factorsandlevelsofextractionprocessofalcoholreflux
水平
Levels
A加乙醇量
倍
Alcoholamount
B回流提取时间
h
Refluxextraction
time
C提取次数
次
Extraction
number
D乙醇浓度
%
Alcohol
concentration
1 4 1 1 50
2 6 2 2 70
3 8 3 3 90
责任编辑　王强　责任校对　夏蓉安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(10):4494-4495
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.10.083
2　结果与分析
2.1　色谱条件　由图 1和图 2可以看出 ,槲皮素与其他峰
分离度大 ,该色谱条件下(流动相∶甲醇-0.4%磷酸(50∶50);
色谱柱:Zorba×SB-C18(4.6mm×150mm);流速:1 ml/min;
柱温:30 ℃;检测波长:360 nm,槲皮素的含量可以得到较好
的测定 。
图 1　槲皮素标准品色谱图
Fig.1　Chromatogramofquercetinstandardsample
图 2　黄珠子草样品色谱图
Fig.2　ChromatogramofPhylanthusvirgatusForst.sample
2.2　槲皮素的提取方法　分别测定水煎煮法和乙醇提取法
得到的槲皮素含量 ,发现水煎煮法提取量为 1.078 2mg/g,而
乙醇提取法提取量为 1.673 8 mg/g。由此可见 ,乙醇提取法
提取量明显高于水煎煮法 ,桷皮素在乙醇溶液中的溶解度高
于在水溶液中的溶解度。
2.3　乙醇提取工艺优化　乙醇提取工艺正交试验结果见表
2和表 3。从表 2直观分析可以看出 ,极差最大者为因素 D,
考察因素的显著性依次为:D>C>B>A;提取条件较好水
平组合为:A2B2 C3 D2。
表 2　工艺正交试验结果
Table2　Resultsofprocesorthogonaltest
试验号
Testnumber
因素 Factors
A B C D
槲皮素含量∥mg/g
Quercetincontent
1 1 1 1 1 1.153 2
2 1 2 2 2 1.580 5
3 1 3 3 3 1.387 7
4 2 1 2 3 1.150 6
5 2 2 3 1 1.702 0
6 2 3 1 2 1.711 8
7 3 1 3 2 1.627 7
8 3 2 1 3 1.029 4
9 3 3 2 1 1.621 5K1 4.121 4/3 3.931 5/3 3.894 4/3 4.476 7/3K2 4.564 4/3 4.311 9/3 4.352 6/3 4.920 0/3K3 4.278 6/3 4.721 0/3 4.717 4/3 3.567 7/3R 0.443 0 0.789 5 0.823 0 1.352 3
表 3　方差分析结果
Table3　Resultsofvarianceanalysis
方差来源
Variance
source
离差平方和
Squaresum
ofdeviation
自由度
Degreeof
freedom
方差
Variance
F值
Fvalue
P值
Pvalue
A 0.033 6 2 0.016 8
B 0.103 9 2 0.052 0 3.10C 0.113 4 2 0.056 7 3.38D 0.316 8 2 0.158 4 9.43 <0.1
误差 0.033 6 2 0.016 8Eror
注:F0.1(2, 2)=9.00。
Note:F0.1(2, 2)=9.00.
　　从表 3可以看出 ,因素 D对槲皮素含量有显著影响 ,与
直观分析结论一致 ,最佳提取工艺条件的较好水平组合为:
用 6倍量 70%乙醇提取 3次 ,每次 3 h。
2.4　最佳提取工艺条件稳定性　为考察优选工艺的稳定
性 ,按最佳提取工艺条件平行重复进行 3次提取 ,并测定提
取液含量。由表 4可知 ,该筛选的工艺条件稳定可行。
表 4　最佳提取工艺重复性实验结果
Table4　Repeatabilitytestresultsofoptimumextractionprocess
试验号
Testnumber
含量∥mg/g
Content RSD∥%
1 1.684 7
2 1.693 2 0.25
3 1.688 1
3　小结
采用乙醇提取法从黄珠子草中提取槲皮素要优于水煎
煮法。实验还表明 ,乙醇浓度对提取效率的影响较大 ,不宜
用水或过高浓度的乙醇提取 ,以 70%乙醇提取较为合适。提
取时间影响不显著 ,考虑节约成本 ,在生产中可以将提取时
间调整为 2 h。本实验采用高效液相色谱法测定黄珠子草中
槲皮素含量 ,具有快速 ,准确 ,实验条件简便的特点 ,对于药
材的质量控制 ,有一定的应用价值 。
参考文献
[ 1] 江苏新医学院.中药大辞典[ M] .上海:上海人民出版社 , 1977:2582.
[ 2] 仲英,左春旭.叶下珠化学成分及其抗乙肝病毒活性的研究 [ J].中国
中药杂志, 1998, 23(6):363.
[ 3] 陈征途.三种叶下珠属植物在体外细胞培养中抗HBV活性的初步研
究[ J] .广州中医药大学学报, 1997, 14(2):102.
[ 4] 曹慰祖.叶下珠治疗慢性乙型肝炎病毒携带者的临床观察[ J].上海中医药杂志, 1996(5):8.
[ 5] 谢珊,贾宪生.贵州产黄珠子草总黄酮毒性及抗CCl4, AAP中毒小鼠肝损伤试验 [ J].贵州医药 , 2005, 29(1):74-75.
[ 6] 谢珊,贾宪生 ,杨基森 ,等.黄珠子草的化学成分研究 [ J].贵州医药,
2001, 25(5):469-470.
4495　37卷 10期　　　　　　　　　　　　　　　　吴家红等　黄珠子草提取工艺研究