全 文 ：摘 要：以芦丁为对照品，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色系统，用紫外分光光度法，在498 nm
波长测定白千层枝和叶中总黄酮的含量.结果显示，其回归方程为A=0.01022C+0.0165，r=0.9995，
吸光度在0~100 mg/L范围内呈良好线性关系.测定结果表明，白千层枝和叶中总黄酮的质量分数
分别为0.69 %和0.63 %.
关键词：白千层；总黄酮；紫外分光光度法
中图分类号：R 284.1 文献标识码：A 文章编号：1674-4942（2012）01-0063-03
范超君 1，鲍长余 1，陈湛娟 1，毕和平 1，2*
（1.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；
2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）
Abstract：The total flavonoids content in the stems and leaves of Melaleuca leucadendron Linn was determined by
spectrophotometry with rutin standard and NaNO2-Al（NO3）3-NaOH system. The regression equation was A=0.01022C+
0.0165（r=0.9995）.The results showed that the mass fractions of total flavonoid in the stems and leaves were 0.69% and
0.63% respectively. The method was stable, accurate, reproducible, highly sensitive and thus was a realistic and practi⁃
cal approach for determining flavonoid content of Melaleuca leucadendron linn.
Key words:Melaleuca leucadendron Linn.；flavonoid；ultraviolet spectrophotometric method
Determination of Total Flavonoid Content in the Stems
and Leaves of Melaleuca leucadendron Linn
FAN Chaojun1，BAO Changyu1，CHEN Zhanjuan1，BI Heping1，2*
（1. College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China；
2. Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Haikou 571158，China）
白千层枝和叶总黄酮含量的测定
第25卷第1期 海南师范大学学报（自然科学版） Vol.25 No.1
2012年3月 Journal of Hainan Normal University（Natural Science） Mar.2012
白千层（Melaleuca leucadendron Linn.）又名千
层皮、脱皮树、玉蝴蝶、玉树等，为常绿乔木，树皮灰
白色，厚而疏松，属桃金娘科（Myrtaceae）白千层属
（Melaleuca）植物，我国福建、海南、广东、广西、台湾
等均有分布.白千层叶具芳香解表，祛风止痛等功
效，用于感冒发热，牙痛、风湿关节痛，神经痛，肠炎
腹泻，外用治过敏性皮炎，湿疹等 [1-3].从白千层属
的枝和叶中提取的芳香油具有抗菌、消毒、止痒、防
腐等作用，是洗涤剂、美容保健品等日用化工品和
医疗用品的主要原料之一，需求广泛.近年来，文献
主要研究了不同产地、不同品种的白千层属的挥发
油成分 [4-5]，未见有对白千层黄酮类含量测定的报
道.黄酮类化合物具有抗炎镇痛、抗癌、抗肿瘤、抗
心脑血管疾病、抗病毒、免疫调节、抗氧化、抗衰老、
抗辐射、抑菌等作用[6-7].为开发利用白千层属药用
植物提供科学依据，本文以芦丁为对照品，以Na⁃
NO2-Al（NO3）3-NaOH为显色体系，采用紫外分光光
度法测定了海南产白千层枝和叶中总黄酮的含量.
1.1 仪器、试剂与材料
UV2600紫外分光光度计（上海国美科学仪器
有限公司）；EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪(日本东
京理化)；FA1604型电子天平（上海精科天平厂）；
索氏提取器（自制）.
芦丁对照品（北京北纳生物技术研究院，纯度
大于 99.5 %），甲醇、石油醚、氢氧化钠、亚硝酸钠、
硝酸铝等均为国产分析纯.
收稿日期:2012-01-08
基金项目:海南师范大学国家大学生创新实验项目（101165804）
*通讯作者
1 实验部分
白千层于 2011年 7月采集于海南师范大学校
园内，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实
验师鉴定为白千层（Melaleuca leucadendron Linn.）
的枝和叶.
1.2 白千层枝和叶中总黄酮的提取
将干燥并粉碎过的白千层枝和叶各准确称取
2.00 g，加入300 mL石油醚，索氏法提取至无色，挥
干石油醚，再用甲醇提取至提取液无色.浓缩提取
液并分别用甲醇定容于50 mL容量瓶中，即得总黄
酮供试品溶液.
1.3 标准曲线的绘制
精密称取芦丁标准品10.0 mg，溶解后，用甲醇
定容于 50 mL的容量瓶中，得到浓度为 0.2 mg/mL
的标准品溶液. 参照文献[8-12]，准确吸取芦丁对
照品溶液 0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于 6
个 10 mL容量瓶中，各加甲醇至 5 mL，再分别加入
质量分数为 5%的NaNO2溶液 0.5 mL，摇匀放置 8
min后，分别加入质量分数为 10%的Al（NO3）3溶液
0.5 mL，摇匀放置 8 min，再分别加入质量分数为
4%的 NaOH溶液 4.0 mL，摇匀放置 15 min后，在
498 nm波长处测定溶液的吸光度值A，同时进行空
白对照.以芦丁对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐
标，溶液的吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线图.
2.1 测定波长的选择
精密吸取芦丁对照品溶液 3.0 mL于 10 mL的
容量瓶，加甲醇至5 mL，余下按1.3项操作，在波长
为400~600 nm的范围内进行波长扫描（见图1），实
验证明，对照品溶液在498 nm处有最大吸收峰，故
选择波长498 nm作为白千层枝和叶提取液中总黄
酮含量的测定波长.
2.2 标准曲线与回归方程
按 1.3项所述方法测定对照品吸光度，得到标
准曲线，见图2.结果表明，对照品浓度在0~100 mg/
L的范围内线性关系良好，其线性回归方程为 A=
0.01022C+0.0165，r=0.9995.
2.3 稳定性实验
精密量取对照品溶液和样品溶液各3.0 mL，按
1.3项下方法处理，每隔 5 min测定 1次吸光度，结
果表明，在测定时间 5~80 min内，吸光度值A基本
稳定.
2.4 精密度实验
精密量取白千层技和叶提取液，按 1.3项方法
处理，平行操作5次，分别测定吸光度A，结果见表
1.白千层枝和叶提取液的测定相对标准偏差RSD
分别为0.66 %（n=5）和0.48 %（n=5），精密度良好.
2.5 白千层总黄酮含量测定
精密量取白千层枝和叶样品溶液各3份，每份
3.0 mL，按1.3项所述方法处理，在498 nm波长处测
定吸光度，结果见表2.结果表明，白千层枝的总黄
酮质量分数为 0.69%，相对标准偏差RSD=0.83%；
叶的总黄酮质量分数为0.63%，RSD=0.90%.
2.6 加标回收率实验
精密量取白千层枝、叶的提取液各 5份，每份
3.0 mL，准确加入一定量的芦丁对照品，按1.3项方
法处理，结果见表 3.白千层枝和叶提取液的平均图1 波长扫描曲线Fig.1 Wavelength scanning curve
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2 600550500450400
吸
光
度
A
图2 标准曲线图
Fig.2 Standard curve
0.8
0.6
0.0
0.4
0.2
吸
光
度
A
1.0
100806040200
浓度C（mg/L）
枝提取液
叶提取液
0.861
0.779
0.858
0.782
0.849
0.776
0.864
0.784
0.859
0.785
0.858
0.781
0.66
0.48
提取部位 吸光度（A） 平均值 RSD（%）
表1 精密度实验
Tab.1 Precision test
2 结果与讨论
64 海南师范大学学报（自然科学版） 2012年
加样回收率分别为 99.91%，RSD=0.17%（n=5）和
99.99%，RSD=0.036%（n=5）.
以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH体系为显色剂，采
用紫外分光光度法，测定海南产白千层枝和叶中总
黄酮的含量，结果表明，白千层叶中总黄酮的总质
量分数为 0.63%，枝中总黄酮的总质量分数为
0.69%.该法操作简便，精密度高、重复性好，结果
稳定可靠.本文方法可用于白千层药材的总黄酮含
量的测定和质量控制.
参考文献:
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
[10]
[11]
[12]
表2 样品黄酮含量
Tab.2 Determination results of total flavonoid
in the stems and leaves
样品 吸光度（A） 平均值 RSD% 黄酮总含 平均
量（%）值（%）
0.855
0.866
0.875
0.786
0.793
0.797
0.868
0.861
0.872
0.772
0.788
0.775
0.857
0.838
0.860
0.776
0.795
0.789
0.860
0.855
0.869
0.778
0.792
0.787
0.83
0.90
0.688
0.684
0.695
0.621
0.632
0.628
0.69
0.63
枝
叶
提取 黄酮含 加入对照 测得量 回收率平均回收 RSD（%）
物 量（μg）品量（μg） （μg） （%） 率（%）
82.57
82.69
82.58
82.49
82.62
75.22
74.98
75.31
75.26
74.88
100
100
100
100
100
100
100
100
100
100
182.53
181.97
182.52
182.53
182.60
175.21
175.03
175.27
175.16
174.91
99.98
99.61
99.97
100.02
99.99
99.99
100.03
99.98
99.94
100.02
枝
叶
99.91
99.99
0.17
0.036
表3 加样回收率实验
Tab.3 Recovery test
朱亮锋,陆碧瑶. 芳香植物及其化学成分[M]. 海口:海南
人民出版社,1988:54．
陈海燕,梁忠云,黄耀恒,等. 不同种源和家系白千层芳香
油组分及含量初探[ J ]. 天然产物研究与开发,2003,15
（5）:408－410．
范超君,鲍长余,毕和平,等. 紫外分光光度法测定白千层
枝和叶总三萜酸含量[ J ]. 林产化学与工业,2011,31(4):
75-78.
邬文瑾,王鹏.白千层精油的化学成分比较[ J ].云南植物
研究,2002,24（1）:133-136．
董晓敏,刘偲翔,刘布鸣. 广西产白千层挥发油的化学成
分研究[ J ].广西中医药,2009,32（5）:56-58.
华辉,郭勇. 黄酮类化合物药理研究进展[ J ]. 广东药学,
1999,9(4):9-12.
姚新生,吴立军. 天然药物化学[M]. 北京:人民卫生出版
社,2003.
毕和平,韩长日,张连华,等. 海南木莲总黄酮含量的测定
[ J ].海南师范大学学报:自然科学版,2005,18(4):347-350.
毕和平,韩长日,廖家旺,等. 穿心莲中总黄酮含量的测定
[ J ].光谱实验室,2006,23(2)∶356-359.
责任编辑：黄 澜
毕和平,韩长日,王芳,等.分光光度法测定破布叶中总黄
酮[ J ].广东化工,2006,33(3):43-45.
郗玉玲,缪红,商亚珍.紫外分光光度法测定半枝莲总黄
酮含量[ J ].承德医学院学报,2009,26(1)∶66-67.
潘天玲,李坤平,贲永光,等.正交试验法优化布渣叶总黄
酮提取工艺的研究 [ J ]. 广东药学院学报,2008,24(5):
454-456.
3 结论
第1期 范超君等：白千层枝和叶总黄酮含量的测定 65