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植物狼毒大戟对钉螺及血吸虫毛蚴的影响



全 文 :基金项目:国家大学生创新性实验计划项目(091048926)资助。
作者简介:王彬(1987 -) ,男,湖北宜昌人,从事动物医学研究。* 通讯作者 收稿日期:2010 - 04 - 21
植物狼毒大戟对钉螺及血吸虫毛蚴的影响
王 彬 赵红梅* 卢 昊
(长江大学动物科学学院,湖北荆州 434025 )
摘 要:为了探讨植物狼毒大戟对钉螺及血吸虫毛蚴的影响,分别用大戟科大戟属狼毒大戟根的提取物 1 与提取物 2
液萃取物配制成的 5. 0,2. 5,1. 25,0. 625,0. 3125 g /L的药液浸杀钉螺及血吸虫毛蚴,并测定了被浸杀钉螺体内糖原与
蛋白质的含量,同时检测了该药对水生动物鱼的毒副作用。试验结果显示,狼毒大戟根水煮液在浓度为 2. 5g /L 时经
过 24 h,48 h,72 h浸杀钉螺的死亡率分别为:36. 7%,66. 7%,93. 3%。而以 70%乙醇提取液经过相同时间浸杀钉螺
的死亡率分别为:43. 3%,86. 7%,96. 7%。同时被狼毒大戟水煮液浸杀的钉螺体内糖原含量明显下降,减少幅度从
9. 61%到 33. 60%,表明狼毒大戟通过影响钉螺的能量代谢而抑制其生长。蛋白质的含量减少不显著。
关键词:狼毒大戟;钉螺;血吸虫毛蚴
中图分类号 Q946. 761. 1 文献标识码 A 文章编号 1007 - 7731(2010)11 - 46 - 03
Euphorbia Fischeriana Steud on Killing Oncomelania Snails and Miracidiums of Schistosoma
Wang bin et al.
(College of animal science Yangtze university,Jingzhou 434025,China)
Abstract:In order to investigate the impact of euphorbia fischeriana steud to oncomelania snails and miracidiums of schis-
tomsoma,we used the drug liquids prepar solutions of 5. 0,2. 5,1. 25,0. 625,0. 3125g /L concentrations which prepared by
the boiled liquids of euphorbiaceae,euphorbia,the roots of euphorbia fischeriana steud and 70% extracts of alcohol solution
to kill oncomelania snails and miracidiums of schistomsoma,and assayed the contents of sugar and protein in killed oncomel-
ania snails and then checked the toxic side effect of the aquatic animal fish. The results showed that the mortality rate were
36. 7%,66. 7%,93. 3% respectively of killing snails 24h,48h,72h with 2. 5g /L of the euphorbia fischeriana steud water ex-
tract. The mortality rate were 43. 3%,86. 7%,96. 7% of the euphorbia fischeriana steud to 70% extracts of alcohol solution
in the same time. Meanwhile the glycogen content in oncomelania snails decreased significantly,ranging from 9. 61% to 33.
60%,it indicated that the euphorbia fischeriana steud can restrain Oncomelania hupensis’s life by impact their energy me-
tabolism. It was significantly reduce the glycogen content but not significant reduce in protein content and toxic side effect of
the aquatic animal fish. The test result showed the euphorbia fischeriana steud can be the medicine to kill oncomelania snails
and miracidiums of schistomsoma.
Key words:Euphorbia fischeriana steud;Oncomelania snails;Miracidiums of schistomsoma
狼毒为瑞香科狼毒属植物称瑞香狼毒(Stellera cham
aejasme L.)或大戟科大戟属植物称狼毒大戟(Euphorbia
fischeriana Steud.)。《本草纲目》记载的瑞香狼毒有逐水、
祛痰、破积、杀虫之功效;狼毒大戟有散结、杀虫之功效,外
用于淋巴结结核、皮癣、灭蛆。近年来 ,研究发现狼毒有
治疗皮肤病、结核病、肿瘤等作用,还有杀虫、杀菌、散结的
作用,现代医学研究发现其具有抗肿瘤及抗病毒作用。本
研究应用狼毒大戟有效成分浸杀钉螺及血吸虫毛蚴,为植
物灭螺提供了新的理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材料 钉螺、新鲜牛粪,都采自湖北省荆州市荆州区
太湖港滩。挑选活力强,钉螺年龄相仿的成螺。狼毒大戟
有效成分的提取,根据文献[1]的方法进行。
1. 2 方法
1. 2. 1 钉螺浸杀试验 量取狼毒大戟有效成分 1 和有效
成分 2,用蒸馏水配成浓度分别为 5. 0、2. 5、1. 25、0. 625、
0. 3125 g /L待用。将 100 mL不同质量浓度的狼毒大戟的
有效成分 1和有效成分 2,分别到入 100 mL的烧杯中,再
放入 30 只钉螺,上盖塑料纱网防止钉螺爬出液面。设空
白对照组(太湖港水)及化学灭螺药物氯硝柳氨 0. 5 mg /L
对照。在 25℃的恒温室浸泡钉螺 24 h、48 h、72 h 和 96 h
后,倒去药液,清水冲洗钉螺,按敲击法鉴别钉螺死活,计
64 安徽农学通报,Anhui Agri. Sci. Bull. 2010,16(11)
DOI:10.16377/j.cnki.issn1007-7731.2010.11.034
算死亡率。
1. 2. 2 毛蚴浸杀试验 三角瓶沉淀孵化法孵毛蚴,采取
血吸虫感染的水牛的新鲜粪便 100 g,置于烧杯中,加 500
mL饱和食盐水后搅拌均匀,以 60目的金属筛过滤入另一
烧杯中,舍去粪渣静置粪液。30min 后倒去一半上层液,
再加去氯自来水静置,经 20 min后再倒去一半上层液,以
后每经 15 min换水一次,直至水色清凉透明为止。最后,
将粪渣至于 500 mL三角瓶中,加水至管口 2 cm 处,于室
温 25 ± 1℃﹑有一定光线条件下孵化。孵化于 3 h用放大
镜进行观察,若发现距液面 1 ~ 2 cm 处有白色小点在来
回游动,则毛蚴已孵化。在距离水面 4 cm处,用吸管吸取
0. 5 mL 分别滴于 5 个载玻片上,计数,加入浓度分别为
5. 0、2. 5、1. 25、0. 625、0. 3125g /L 的狼毒大戟有效成分 1
和有效成分 2,在 25℃的恒温室浸泡 1min、5min、15min,光
学显微镜观察毛蚴的活动情况。设生理盐水对照。
钉螺体内糖含量的测定,按文献[2]的方法进行;钉
螺体内蛋白质含量的测定按文献料[2,10]提供的方法
进行。
2 结果与分析
2. 1 狼毒水煮液浸杀湖北钉螺及血吸虫毛蚴的效果 有
效成分 1,在室温 25 ± 1℃,水温 23 ± 1℃的条件下,加药后
钉螺的上爬率和封盖率较高,死亡率相对降低。狼毒大戟
的有效成分 1 杀螺效果较好,其在浓度为 2. 5g /L 时经过
24 h、48 h、72 h 的浸杀钉螺的死亡率分别为 36. 7%、
66. 7%、93. 3%,杀灭血吸虫毛蚴的效果也较好,浓度越高
杀灭毛蚴效果越明显(见表 1)。
表 1 狼毒大戟水煎液浸杀钉螺及血吸虫毛蚴试验结果
药物浓度
(g /L)
观察螺数
(只)
钉螺死亡率(%)
24h 48h 72h
观察毛蚴数
(个)
毛蚴死亡率(%)
1min 5min 15min
5. 0 30 60 93. 3 100 40 ~ 50 46 90 100
2. 5 30 36. 7 66. 7 93. 3 40 ~ 50 22 76 98
1. 25 30 20 46. 7 73. 3 40 ~ 50 20 48 84
0. 625 30 13. 3 30 56. 7 40 ~ 50 15 36 70
0. 3125 30 6. 7 23. 3 40 40 ~ 50 8 20 54
氯硝柳氨 30 100 100 100
太湖港水 30 0 3. 3 6. 7 40 ~ 50 0 2 10
注:室温 25 ± 1℃,水温 23 ± 1℃。
2. 2 有效成分 2 浸杀钉螺的效果 在室温 25 ± 1℃,水温
23 ± 1℃的条件下,加药后钉螺的上爬率和封盖率较高,死
亡率相对降低。用有效成分 2 杀螺效果较好,其在浓度为
1. 25 g /L时经过 24 h、48 h、72 h 的浸杀钉螺的死亡率分
别为 43. 3%、86. 7%、96. 7%,杀灭血吸虫毛蚴的效果也较
好,浓度越高杀灭毛蚴效果越明显,如表 2所示。
2. 3 大戟狼毒有效成分 1处理后钉螺的软体组织重量
钉螺经不同浓度大戟狼毒处理后的软体组织平均干重、湿
重、干湿比如表 3 所示。由表 3 可知,不同浓度大戟狼毒
处理后钉螺软体的含水量未见明显变化,其干重约为湿重
的 1 /5 ~ 1 /3。钉螺经狼毒大戟处理 2 d 后糖原含量的变
化如表 4所示。
表 2 狼毒大戟 70%乙醇提取液浸杀钉螺及血吸虫毛蚴试验结果
药物浓度
(g /L)
观察螺数
(只)
钉螺死亡率(%)
24h 48h 72h
观察毛蚴数
(个)
毛蚴死亡率(%)
1min 5min 15min
5. 0 30 90 100 100 40 ~ 50 56 98 100
2. 5 30 63. 3 93. 3 100 40 ~ 50 40 90 100
1. 25 30 43. 3 86. 7 96. 7 40 ~ 50 32 64 96
0. 625 30 30 56. 7 83. 3 40 ~ 50 24 56 90
0. 3125 30 16. 7 43. 3 66. 7 40 ~ 50 18 48 86
氯硝柳氨 30 100 100 100
太湖港水 30 0 3. 3 6. 7 40 ~ 50 0 2 10
注:室温 25 ± 1℃,水温 23 ± 1℃。
表 3 钉螺的软体组织重量
狼毒大戟浓度(g /L) 湿重(mg) 干重(mg) 干湿比(%)
5. 0 12. 96 3. 01 23. 23
2. 5 12. 43 3. 06 24. 62
1. 25 13. 48 3. 15 23. 37
0. 625 13. 36 2. 97 22. 23
0. 3125 12. 34 3. 00 24. 31
对照 13. 35 3. 03 22. 70
表 4 钉螺软组织中糖原含量
狼毒大戟浓度(g /L) 干粉含量(%) 处理后的变化率(%)
5. 0 7. 53 33. 60
2. 5 9. 86 13. 05
1. 25 9. 18 19. 05
0. 625 8. 95 21. 06
0. 3125 10. 25 9. 61
对照 11. 34
2. 4 狼毒大戟处理对钉螺蛋白质影响的测试结果及分析
钉螺经狼毒大戟处理 2d 后蛋白质含量的变化如表 5
所示。
表 5 钉螺软组织中蛋白质含量
狼毒大戟浓度(g /L) 干粉含量(%) 处理后的变化率(%)
5. 0 29. 13 14. 47
2. 5 27. 14 20. 32
1. 25 29. 35 13. 83
0. 625 28. 25 17. 06
0. 3125 26. 27 22. 87
对照 34. 06
3 讨论与小结
近年来,由于洪水频发,钉螺不断沿江、湖从上游向
下游及通江、湖的河道内扩散,使血吸虫病疫情不断上升,
故消灭钉螺仍是当前控制血吸虫病传播的主要有效措
施[2 - 4]。氯硝柳胺是 WHO 唯一推荐使用的杀螺药,国内
主要用氯硝柳胺杀灭钉螺,但该药难溶于水,40 多年来一
直未能得到妥善解决,同时药物价格较贵,困扰药物灭螺
工作的开展。
本次实验配制的各浓度狼毒大戟水煎液及 70%乙醇
提取的有效成份,都对钉螺及血吸虫毛蚴有显著的杀灭作
用。结果显示狼毒大戟水煎液及以 70%乙醇提取的有效
成份分别在 2. 5 g /L 和 1. 25 g /L时,72 h 即杀死 90%以
上的钉螺;其浓度分别在 1. 25 g /L 和 0. 625 g /L时,5 min
7416 卷 11 期 王彬等 植物狼毒大戟对钉螺及血吸虫毛蚴的影响
即可杀死 50%以上血吸虫毛蚴。实验表明了狼毒大戟对
钉螺和血吸虫毛蚴的显著杀灭作用。经狼毒大戟水煎液
处理后钉螺软体的糖原含量明显下降,减少幅度从
9. 61%到 33. 60%,表明狼毒大戟处理影响钉螺的能量代
谢而抑制其生长。影响糖代谢的因素错综复杂,王宏[6]认
为植物提取物使钉螺软组织糖原减少的原因可能有: (1)
影响钉螺的肝功能,使局部肝细胞坏死,直接影响糖原合
成;(2)激活或钝化某些酶,促进糖原分解和抑制糖原合
成,导致糖原含量下降;(3)影响消化道功能,引起摄食量
减少,细胞摄取葡萄糖减少,糖原合成下降。狼毒大戟能
够在一定程度上降低钉螺体内的蛋白质含量,与夹竹桃枫
杨等灭螺植物提取物的效果差不多[7],但较正常螺的减少
量不及糖原那样显著,不能与其死亡率体现相应的变化。
但彭卫平等[8]研究表明兴林垦种区钉螺的总蛋白含量显
著降低,林地螺营养不良可能是螺口密度下降的主要原因
之一,两者的作用机理可能不同。
王根法等报道有机灭螺药物溴乙酰胺对钉螺软体蛋
白质和脂类基本无影响,说明不是所有具有灭螺活性的药
物都能减少钉螺软体的蛋白质含量,但都能显著降低钉螺
软体的糖原含量,表明灭螺药物对钉螺的致死作用可能更
多地与钉螺组织细胞中的能量代谢有关,但对钉螺能量代
谢过程的影响还需进一步探讨。
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(责编:张琪琪)
(上接 39页)足,不利于蒺藜种子的生根发芽及幼苗的成活,
从而导致了野生蒺藜空间分布很不均匀,表现出团块的聚集。
图 2 蒺藜的 Kriging图
4 结论
研究结果表明,宁夏野生蒺藜空间异质性主要由随机
因素所引起,对空间的占据能力较强,且种群呈旺盛趋势。
蒺藜种群间的相关性距离在 0 ~ 61. 5m,当蒺藜种群间的
距离大于 61. 5m时,样点内蒺藜株数的变化失去了自相关
关系。不同尺度的宁夏野生蒺藜分布格局的研究,可以为
正确制定蒺藜利用、管理、保护措施提供一定的理论依据。
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Chinese). (责编:张琪琪)
84 安徽农学通报,Anhui Agri. Sci. Bull. 2010,16(11)