全 文 :书基于血清药理学方法的头花蓼抗炎有效提取物筛选
徐丹1,2,赵菲菲1,3,杨馨1,3,李靖1,2,徐国波1,2,廖尚高1,2* (1.贵州医科大学药学院,贵州贵阳 550004;2.民族药
与中药开发应用教育部工程研究中心,贵州贵阳 550004 ;3.贵州省药物制剂重点实验室,贵州贵阳 550004)
摘要 [目的]通过血清药理学方法,研究头花蓼不同提取物及热淋清颗粒含药血清对小鼠单核巨噬细胞(RAW264. 7细胞)释放炎症因
子的影响,筛选出头花蓼抗炎有效提取物。[方法]采用头花蓼血清药理学评价方法,10 ng /mL 脂多糖(LPS)建立 RAW264. 7细胞炎症
损伤模型,MTT法检测细胞存活率,Griess试剂法检测细胞上清液中 NO的释放量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中 TNF - α
和 IL -6的释放量,以考察头花蓼水提物、水提醇沉提取物、水提醇沉沉淀物及热淋清颗粒含药血清(WEPS、PCWEPS、DPCWEPS、RLQS)
对巨噬细胞释放炎症因子的影响。[结果]与模型组比较,WEPS、PCWEPS、DPCWEPS、RLQS均能显著抑制 LPS刺激的 RAW 264. 7 细胞
释放炎症因子 NO、TNF - α和 IL -6,PCWEPS组抑制细胞释放 NO、TNF - α和 IL -6的作用最强。[结论]头花蓼水提醇沉提取物为头
花蓼主要的抗炎有效提取物。
关键词 头花蓼;热淋清颗粒;血清药理学;RAW 264. 7细胞;炎症因子
中图分类号 S567. 23 + 9 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2016)17 -134 -03
Screening of Effective Anti-inflammatory Extracts from Polygonum capitatum Based on Serum Pharmacological Method
XU Dan1,2,ZHAO Fei-fei1,3,YANG Xin1,3,LIAO Shang-gao1,2* et al (1. School of Pharmacy,Guizhou Medical University,Guiyang,
Guizhou 550004;2. Engineering Research Center for the Development and Application of Ethnic Medicines and TCM,Ministry of Education,
Guiyang,Guizhou 550004;3. Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics,Guiyang,Guizhou 550004)
Abstract [Objective]To research the effects of different extracts from Polygonum capitatum and drug-containing serum of Relinqing granules
on releasing inflammatory factor of mouse monocyte-macrophage(RAW264. 7 cell)by serum pharmacological method,and to screen effective an-
ti-inflammatory extracts from P. capitatum. [Method]Serum pharmacological evaluation method of P. capitatum was adopted. The inflammatory
cell model was produced by LPS (10 ng /mL)-treated RAW264. 7 cells. The cell viability was detected by MTT method. NO production was de-
tected by the Griess assay,TNF-α and IL-6 were quantitated by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)in the cell culture supernatant
to investigate the effect of drug-containing serum of Polygonum capitatum of its water extract (WEPS),protein-free water extract (PCWEPS),
deposition of protein-free water extract (DPCWEPS)and Relinqing granules (RLQS)on inflammatory cytokines in macrophage cells. [Result]
The drug-containing serums could significantly inhibit the release of NO,TNF-α and IL-6 in LPS-induced RAW264. 7 cells compared with the
model group (P <0. 05,P <0. 01),in which PCWEPS had the best effect on NO,TNF-α and IL-6 inhibitory. [Conclusion]Protein-free water
extract of Polygonum capitatum is the main extract for anti-inflammatory.
Key words Polygonum capitatum;Relinqing granules;Serum pharmacology;RAW264. 7 cells;Inflammatory cytokines
基金项目 国家自然科学基金项目(81160516,81560570)。
作者简介 徐丹(1991 - ) ,女,江苏镇江人,硕士研究生,研究方向:药
物化学。* 通讯作者,教授,博士,硕士生导师,从事天然药
物的化学、药理和代谢研究。
收稿日期 2016-05-16
头花蓼为蓼科蓼属植物头花蓼的全草,是贵州地道药
材,收载于 2003版《贵州省中药、民族药质量标准》,对泌尿
系统感染类疾病有独特疗效。致病体长期侵袭尿路粘膜或
组织会产生炎症,造成尿路感染,持续的炎症反应还将加重
泌尿系统感染[1]。抑制炎症反应,防止泌尿系统感染的恶
化,对此类疾病的治疗具有重要意义。以头花蓼水提物为主
要原料的热淋清颗粒在临床上用于治疗泌尿系统感染,并收
载于 2010年版《中国药典》。研究表明,热淋清颗粒具有显
著的抗炎活性[2],但临床中每天的服用量较大[3]。为研究头
花蓼水提物经醇沉后对其本身抗炎活性的影响,该研究采用
能较好地模拟药物在体内环境中产生药理效应真实过程的
血清药理学方法[4],考察头花蓼不同提取物含药血清,即水
提物、水提醇沉提取物、水提醇沉沉淀物及热淋清颗粒含药
血清(WEPS、PCWEPS、RLQS)对脂多糖(lipopolysaccharide,
LPS)刺激的小鼠单核巨噬细胞(RAW264. 7 细胞)释放炎症
因子 NO、TNF - α和 IL - 6 的影响,从而筛选出头花蓼的抗
炎有效提取物。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 细胞株与动物。小鼠单核巨噬细胞株购自中国科学
院上海生命科学研究院细胞资源中心;Wistar 大鼠,雌雄各
半,体重(200 ±20)g,SPF级,由贵州医科大学实验动物中心
提供,动物合格证号 CXK(黔)2012 -0001。
1. 1. 2 药材。头花蓼药材购于贵州省施秉县头花蓼 GAP种
植基地,由贵州医科大学生药学教研室龙庆德副教授鉴定为
蓼科蓼属植物头花蓼 Polygonum capitatum Buch - Ham. ex
D. Don的全草。
1. 1. 3 试剂。DMEM 高糖培养基(Gibco 公司) ,胎牛血清
(Hyclone公司) ,LPS(Sigma公司) ,MTT(Sigma公司) ;磺胺、
N -(1 -萘基)-乙二胺、二甲基亚砜(DMSO)均为国药集团
产品;小鼠 TNF - α ELISA试剂盒(RayBio公司) ,小鼠 IL - 6
ELISA试剂盒(RayBio公司)。醋酸地塞米松磷酸钠注射液
(贵州光正制药有限责任公司) ,热淋清颗粒(贵州威门药业
股份有限公司)。
1. 1. 4 仪器。CO2 培养箱(美国 Thermo scientific 公司) ,倒
置显微镜(日本 Nikon公司) ,低速台式离心机(上海安亭科
学仪器厂) ,水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司) ,超低温冰
箱(Thermo Fisher 公司) ,680 型酶标仪(上海伯乐生命医学
产品有限公司) ,数显立式压力蒸汽灭菌器(上海博讯实业有
限公司医疗仪器厂) ,超净工作台(北京东联哈尔仪器制造有
责任编辑 黄小燕 责任校对 况玲玲安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2016,44(17):134 - 136,150
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.17.044
限公司) ,所用细胞培养瓶、培养板、离心管均为美国 Corning
公司产品。
1. 2 方法
1. 2. 1 头花蓼提取物的制备。头花蓼全草粉末(一号筛)水
提取 4次,每次 2 h,合并滤液回收至浸膏得头花蓼水提物
(WEP) ,此为头花蓼单方制剂热淋清颗粒的主要成分;水提
物用水溶解后加入 3 倍量 95%乙醇沉淀 24 h,过滤,合并滤
液回收至浸膏得头花蓼水提醇沉提取物(PCWEP) ,滤渣则
为头花蓼水提醇沉沉淀物(DPCWEP)[5]。
1. 2. 2 空白血清和含药血清的制备。SD大鼠 50 只雌雄各
半,随机分为 5组,灌胃前 12 h禁食不禁水,分别灌胃给予超
纯水、头花蓼水提物、水提醇沉提取物、水提醇沉沉淀物以及
热淋清颗粒药液[生药量 6 g /(kg·d) ,头花蓼单方制剂热淋
清颗粒的临床剂量],每天 2 次,连续 4 d[6],末次给药后
90 min,尾静脉取血,以 2 000 r /min、4 ℃离心 10 min分离上
层血清,过滤除菌,分装,-20 ℃保存备用。
1. 2. 3 RAW264. 7 细胞的体外培养。RAW264. 7 细胞培养
于含 10%胎牛血清、100 μg /mL 青霉素及 100 μg /mL 链霉素
的 DMEM细胞培养液中,置于温度为 37 ℃、5% CO2 培养箱
中培养。取对数生长期细胞用于试验。
1. 2. 4 空白血清及含药血清对 RAW264. 7 细胞的影响。
RAW264. 7细胞用 0. 25%的胰蛋白酶消化,以 2 × 105个 /mL
的浓度接种于 96 孔培养板中,每孔 100 μL,细胞培养 24 h
后,弃去上清。试验分为:①正常对照组(CON 组) ,无大鼠
血清的培养基;②试验组,不同体积分数(0. 5%、1. 0%、
1. 5%、2. 0%)的空白血清或含药血清(WEPS、PCWEPS、
DPCWEPS、RLQS) ,培养 24 h后,每孔加入终浓度为 2. 5 g /L
的 MTT,继续孵育 4 h,弃上清液,加入 100 μL DMSO,振荡
10 min后,在 490 nm用酶联免疫检测仪测定各孔吸光度值
A,每组设 6个平行孔。按照公式:细胞存活率(%)= 试验
组 A /对照组 A平均值 × 100%,计算细胞存活率。
1. 2. 5 空白血清对 RAW264. 7 细胞释放 NO的影响。参照
“1. 2. 4”项,每孔体积 100 μL。试验分为:①对照组(CON -
1) ,无大鼠血清的培养基;②空白血清组(CON - 2) ,体积分
数为 1. 5%的空白血清培养液;③无血清模型组(LPS - 1) ,
终浓度为 10 ng /mL 的 LPS溶液;④空白血清模型组(LPS -
2) ,终浓度为 10 ng /mL的 LPS和空白血清体积分数为 1. 5%
的培养液。细胞培养 24 h后,吸取细胞培养液上清 50 μL至
酶标板中,加入等体积的 Griess 试剂(1%磷酸磺胺溶液与
0. 1% N -(1 -萘基)-乙二胺等体积混合液) ,室温反应
10 min后于 540 nm 处测定各孔吸光度 A,每组设 6 个平行
孔。用浓度为 1. 56、3. 12、6. 25、12. 50、25. 00、50. 00 μmol /L
NaNO2 溶液绘制标准曲线,根据 NaNO2 标准曲线计算细胞
培养液上清中 NO的释放量。
1. 2. 6 头花蓼及热淋清颗粒含药血清对细胞释放 NO的影
响。参照“1. 2. 5”项,试验分为①正常对照组(CON 组) ,无
大鼠血清的培养基;②模型组(LPS组) ,培养基中加入终浓
度为 10 ng /mL 的 LPS;③地塞米松组(DEXA组) ,培养基中
加入终浓度为 50 μg /mL 的地塞米松和 10 ng /mL 的 LPS共
培养;④头花蓼及热淋清颗粒含药血清组,培养基中分别加
入体积分数为 1. 5% 的含药血清(WEPS、PCWEPS、DPC-
WEPS、RLQS)和 10 ng /mL LPS共培养。每组设 6个平行孔。
根据 NaNO2 标准曲线计算细胞培养液上清中 NO的释放量。
1. 2. 7 头花蓼及热淋清颗粒含药血清对细胞释放 TNF - α
和 IL -6的影响的影响。参照“1. 2. 6”项,每组设 6 个平行
孔,收集细胞上清液,按照相应的 ELISA 试剂盒说明书方法
进行测定,根据试剂盒标准曲线计算各组细胞上清中 TNF -
α和 IL -6的释放量。
1. 3 数据处理 采用 SPSS19. 0 统计软件进行分析。结果
用珋x ± S表示。单因素方差分析(One - Way ANOVA)后,用
Dunnetts test分析方法比较组间差异。两组间比较采用 T -
test法。P <0. 05时具有统计学意义。
2 结果与分析
2. 1 空白血清及含药血清对 RAW264. 7细胞的影响 由表
1可知,当空白血清及含药血清的体积分数为 0. 5% ~ 1. 5%
时,作用细胞 24 h,与对照组(CON - 1)比较,细胞存活率无
显著性差异。表明在此体积范围内空白血清及含药血清对
于 RAW264. 7细胞本身的生长无显著影响。超过此添加量,
随着血清体积的增加,RAW264. 7 细胞的生长受到显著影
响。为有效反映药物的药效,在后续试验中,血清体积分数
设定为 1. 5%。
表 1 空白血清及含药血清对细胞存活率的影响(n =6)
Table 1 Effects of blank serum and drug-containing serum on the via-
bility of RAW264. 7 cells
组别
Group
体积分数
Volume
fraction∥%
细胞存活率
Cell viability
%
对照组 Control group(CON -1) — 100. 00 ±0. 50
空白血清组 0. 5 100. 76 ±0. 36
Blank serum group(CON -2) 1. 0 100. 93 ±0. 37
1. 5 99. 62 ±0. 25
2. 0 94. 32 ±0. 43**
WEPS组WEPS group 0. 5 100. 35 ±0. 30
1. 0 100. 18 ±0. 43
1. 5 98. 83 ±0. 30
2. 0 95. 84 ±0. 27**
PCWEPS组 PCWEPS group 0. 5 100. 38 ±0. 29
1. 0 100. 05 ±0. 27
1. 5 99. 24 ±0. 20
2. 0 95. 29 ±0. 25**
DPCWEPS组 DPCWEPS group 0. 5 100. 74 ±0. 36
1. 0 100. 46 ±0. 24
1. 5 99. 83 ±0. 28
2. 0 94. 82 ±0. 54**
RLQS组 RLQS group 0. 5 100. 46 ±0. 22
1. 0 100. 25 ±0. 18
1. 5 99. 04 ±0. 43
2. 0 95. 47 ±0. 50**
注:**表示与对照组比较 P <0. 01。
Note:Compared with control group,** was P < 0. 01.
53144 卷 17 期 徐 丹等 基于血清药理学方法的头花蓼抗炎有效提取物筛选
2. 2 空白血清对 RAW264. 7细胞释放 NO的影响 由表 2
可知,采用 1. 5%体积的空白血清作用于 10 ng /mL LPS诱导
的 RAW264. 7细胞 24 h,与空白对照组比较,无血清模型组
(LPS -1,相对于 CON -1)和空白血清模型组(LPS - 2,相对
于 CON -2)均有显著性差异(P < 0. 01) ,表明细胞炎症模型
建立成功;空白血清组(CON -2)与对照组(CON - 1)比较无
显著性差异,空白血清模型组(LPS - 2)与无血清模型组
(LPS - 1)比较也无显著性差异,表明当空白血清体积为
1. 5%时,既不影响 RAW264. 7细胞的生长,也不影响 LPS刺
激所产生的 NO释放的检测,以此确定试验中含药血清的添
加体积为 1. 5%。同时,采用无血清模型组(LPS - 1)作为后
续试验的模型组(LPS)。
表 2 空白血清对 RAW264. 7细胞释放 NO的影响(n =6)
Table 2 Effect of blank serum on NO production in RAW264. 7 cells
组别
Group
体积分数
Volume
fraction∥%
NO
μmol /L
对照组 Control group(CON -1) — 2. 12 ±0. 55
空白血清组 Blank serum group(CON
-2) 1. 5 1. 85 ±0. 56
无血清模型组 No serum model group
(LPS -1) — 18. 58 ±1. 34
##
空白血清模型组 Blank serum model
group(LPS -2) 1. 5 18. 13 ±1. 29
**
注:##表示与 CON - 1 组比较 P < 0. 01;**表示与 CON - 2 组比较
P <0. 01。
Note:Compared with CON-1 group,## was P < 0. 01. Compared with
CON -2 group,** was P < 0. 01.
2. 3 头花蓼及热淋清颗粒含药血清对细胞释放 NO 的影
响 由表 3可知,与对照组比较,模型组(LPS 组)显著诱导
RAW264. 7细胞释放 NO(P < 0. 01) ;与模型组比较,WEPS、
PCWEPS、RLQS均能不同程度地抑制 RAW264. 7 细胞释放
NO(P <0. 05或 P < 0. 01) ;与 PCWEPS 组比较,WEPS 组和
RLQS组 NO 的释放量具有显著性差异(P < 0. 01)。因此,
PCWEPS具有较强地抑制细胞释放 NO的作用。
表 3 含药血清对 RAW264. 7细胞释放 NO的影响(n =6)
Table 3 Effect of drug-containing serum on NO production in
RAW264. 7 cells
组别
Group
体积分数
Volume
fraction∥%
NO
μmol /L
对照组(CON)Control group — 2. 08 ±0. 26
模型组(LPS)Model group — 16. 93 ±0. 45##
DEXA组 DEXA group — 5. 57 ±0. 30**
WEPS组WEPS group 1. 5 15. 61 ±0. 26*△△
PCWEPS组 PCWEPS group 1. 5 13. 95 ±0. 18**
DPCWEPS组 DPCWEPS group 1. 5 16. 37 ±0. 33
RLQS组 RLQS group 1. 5 15. 41 ±0. 31**△△
注:##表示与对照组比较 P < 0. 01;* 、**分别表示与模型组比较
P <0. 05、P <0. 01;△△表示与 PCWEPS组比较 P <0. 01。
Note:Compared with control group,## were P < 0. 01. Compared with
model group,* and ** was P <0. 05 and P <0. 01,respectively.
Compared with PCWEPS group,△△ indicated P <0. 01.
2. 4 头花蓼及热淋清颗粒含药血清对细胞释放 TNF -α和
IL -6的影响 由表 4可知,与对照组比较,模型组显著诱导
RAW264. 7细胞释放 TNF - α和 IL - 6(P < 0. 01) ;与模型组
比较,WEPS、PCWEPS、DPCWEPS、RLQS 均能不同程度地抑
制 RAW264. 7细胞释放 TNF - α和 IL - 6(P < 0. 01) ;与 PC-
WEPS组比较,WEPS、DPCWEPS、RLQS 组 TNF - α 和 IL - 6
的释放量具有显著性差异(P <0. 05或 P <0. 01)。因此,PC-
WEPS具有较强地抑制细胞释放 TNF - α和 IL -6的作用。
表 4 含药血清对 RAW264. 7细胞释放 TNF -α和 IL -6的影响 (n =6)
Table 4 Effect of drug - containing serum on TNF-α and IL-6 production in RAW264. 7 cells
组别
Group
体积分数
Volume fraction∥%
TNF - α
pg /mL
IL -6
pg /mL
对照组(CON)Control group — 1 296. 01 ±38. 24 97. 34 ±0. 95
模型组(LPS)Model group — 11 413. 77 ±37. 80## 963. 26 ±1. 43##
DEXA组 DEXA group — 2 759. 78 ±62. 31** 174. 33 ±1. 09**
WEPS组WEPS group 1. 5 9 227. 17 ±64. 79**△△ 861. 70 ±1. 93**△△
PCWEPS组 PCWEPS group 1. 5 8 000. 73 ±42. 69** 772. 77 ±1. 32**
DPCWEPS组 DPCWEPS group 1. 5 10 933. 70 ±76. 71**△△ 930. 52 ±1. 37**△△
RLQS组 RLQS group 1. 5 8 256. 16 ±51. 50**△ 824. 23 ±1. 23**△△
注:##表示与对照组比较 P <0. 01;**表示与模型组比较 P <0. 01;△、△△分别表示与 PCWEPS组比较 P <0. 05、P <0. 01。
Note:Compared with control group,## were P <0. 01. Compared with model group,** were P <0. 01. Compared with PCWEPS group,△ and△△ indica-
ted P <0. 05 and P <0. 01,respectively.
3 讨论与结论
LPS诱导 RAW264. 7 细胞的体外炎症模型被广泛用于
抗炎药物的评价[7]。当机体发生炎症时致炎物质和炎症介
质会增加 NO的合成和释放,过量的 NO 及其稳定性衍生物
过氧亚硝基阴离子对细胞具有毒性作用,因此限制 NO的过
量释放可以预防和治疗炎症[8];TNF - α 作为一个重要的早
期炎症因子可诱发 IL - 6 以及继发性炎症介质 NO 的释
放[9],因此抑制 TNF - α 的释放在治疗炎症的过程中也显得
尤为重要;现有研究表明在多种炎症相关疾病中均伴有明显
的 IL -6水平升高,因此 IL - 6 表达水平也是常用的抗炎检
测指标[10]。该研究发现,头花蓼各提取物及热淋清颗粒含
药血清均能够抑制 RAW264. 7 细胞释放炎症因子 NO、
TNF - α及 IL - 6,其中头花蓼水提醇沉提取物含药血清抑制
细胞释放炎症因子的作用最强,因此其为头花蓼主要的抗炎
有效物质。
(下转第 150页)
631 安徽农业科学 2016年
3 结论与讨论
通过 NaNO2 - Al(NO3)3 - NaOH 法,以芦丁为对照品,
在 510 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总
黄酮的含量,发现总黄酮含量在假蒟叶中最高(1. 18%) ,其
次是茎(0. 33%) ,根中最低(0. 25%)。
通过溴甲酚绿酸性染料比色法,以盐酸小檗碱为对照
品,在 420 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部
位总生物碱的含量,发现总生物碱含量在假蒟叶中最高
(0. 19%) ,其次是茎(0. 03%) ,根中最低(0. 01%)。
通过香草醛 -冰醋酸酸性染料比色法,以人参皂苷 Re
为对照品,在 544 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟
不同部位总皂苷的含量,发现总皂苷含量在假蒟叶中最高
(4. 33%) ,其次是根(4. 13%) ,茎中最低(1. 71%)。
通过 Folin - Ciocalteu比色法,以没食子酸为对照品,在
765 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总酚
的含量,发现总酚含量在假蒟叶中最高(2. 42%) ,其次是茎
(1. 08%) ,根中最低(0. 68%)。
通过磷钼钨酸 -干酪素比色法,以没食子酸为对照品,
在 765 nm处用紫外可见分光光度计测定了假蒟不同部位总
鞣质的含量,发现总鞣质含量在假蒟叶中最高(1. 69%) ,其
次是茎(1. 21%) ,根中最低(0. 72%)。
综上所述,假蒟不同部位总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚、
总鞣质含量具有显著的差异性。试验结果表明,5种方法均具
有精密度高、稳定性好、重现性好、操作简便、效率高、测定结果
可靠的优点,适用于假蒟中总黄酮、总生物碱、总皂苷、总酚、总
鞣质的定量分析,可为假蒟药用质量评价提供参考依据,也为
假蒟次生代谢产物的进一步开发利用提供基础资料。
参考文献
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995 -999.
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4组含药血清抑制 LPS 刺激 RAW264. 7 细胞释放 NO、
TNF - α、IL -6的作用强度从强到弱依次为 PCWEPS、RLQS、
WEPS、DPCWEPS。头花蓼水提醇沉沉淀物中主要为多糖和
蛋白类化合物,其抗炎活性较弱。热淋清颗粒以头花蓼水提
物为主要原料,可能是由于热淋清颗粒的制备工艺较为成熟
使其更易于吸收,导致其含药血清的抗炎活性略优于头花蓼
水提物含药血清的抗炎活性。PCWEPS的抗炎活性最强,可
能是由于乙醇沉淀法有效除去蛋白质、多糖、鞣质等杂质,有
效成分得到富集[3],其中富含槲皮素、没食子酸、山奈酚、儿
茶素以及多种酚酸类等化合物[11],使其含药血清的抗炎活
性得到较大程度的提高,这为改善热淋清颗粒临床用量较大
提供了理论依据。
综上所述,头花蓼水提物、水提醇沉提取物、水提醇沉
沉淀物及热淋清颗粒含药血清均能不同程度地通过抑制炎
症因子 NO、TNF - α和 IL - 6的释放而发挥抗炎作用,其中
头花蓼水提醇沉提取物为头花蓼主要的抗炎有效物质,因
此采用水提后醇沉的方法能够提高头花蓼的抗炎活性,这
为从细胞水平上深入探讨头花蓼在治疗泌尿系统感染中的
作用奠定了基础,也为头花蓼的进一步开发应用提供了理
论依据。
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051 安徽农业科学 2016年