全 文 ：第 33 卷 第 5 － 6 期
2012 年 11 月
内 蒙 古 农 业 大 学 学 报
Journal of Inner Mongolia Agricultural University
Vol． 33 No． 5 － 6
Nov． 2012
狼毒大戟生药提取物抑菌活性的初步研究
*
庞丽纹1， 丁立军2， 简 丽3， 张前程3
(1． 内蒙古化工职业学院化工系，呼和浩特 010011;2． 内蒙古农业大学 理学院，呼和浩特 010018;
3． 内蒙古工业大学 化工学院，呼和浩特 010062)
摘要: 本文以金黄色葡萄球菌、表面葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌、志贺氏与宋内氏痢疾菌为受试菌种，对狼毒大
戟生药的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇提取部位和狼毒大戟水提液及狼毒大戟中提取物 β －香树脂醇乙酸酯，3，3＇－
二乙酰基 － 4，4＇－二甲氧基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷、2，4 －二羟基 － 6 －甲氧基 － 3 －甲基苯乙酮和未知物 J采
用圆滤纸片法进行抑菌实验研究。实验结果表明:除狼毒大戟生药的石油醚部位外，其他不同提取部位及水提取液
对不同的菌种均有不同程度的抑制作用;单体化合物除未知物 J对志贺氏与宋内氏痢疾菌、金黄色葡萄球菌和绿脓
杆菌有抑制作用外，其余均无抑制作用。
关键词: 狼毒大戟; 生药提取物; 圆滤纸片法; 抑菌活性
中图分类号: R284． 2;Q949． 753． 5 文献标识码: A 文章编号:1009 － 3575(2012)05，06 － 0253 － 04
PRIMARY DETERMINATION OF BACTERIOSTATIC
ACTIVITY OF EXTRACT OF RAW PLANT
FROM EUPHORBIA FISCHERIANA
PANG Li － wen1， DING Li － jun2， JIAN Li3， ZHANG Qian － cheng3
(1． Inner Mongolia Vocational College of Chemical Engineering，Huhhot 010011，China;
2． College of Sciences of Inner Mongolia Agricultural University Huhhot 010018，China;
3． School of Chemical Engineering，Inner Mongolia University of Technology，Huhhot 010062，China)
Abstract: The bactericidal characters of β － amyrinacetate 2，4 － didroxy － 6 － meth － oxy － 3 － methyl acetophenone 3，3＇－ diacetyl
－ 4，4＇－ dimethoxy － 2，2＇，6，6＇－ tetrahydroxy diphenyl methane were compared by the filter paper method，The inhibition effects of pe-
troleum ether，chloroform，ethyl acetate and alcohol fractions of Euphorbia fischeriana Steud． were compared by on Staphylococcus au-
reus，Staphylococcus epidermidis，Proleus vulgaris，Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae． Results of experiments on an-
tibacterial activities showed that extracts of chloroform，ethyl acetate，alcohol fractions and extract of water had existed to varying de-
grees bacteriostasis effects against different bacteria and that only unknown J was inhibit effective against Staphylococcus aureus Pseudo-
monas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae．
Key words: Euphorbia fischeriana steud．; extract of raw plant; filter paper method; antibacterial activity;
狼毒大戟(Euphorbia fischeriana Steud．)又名东
北狼毒，为大戟科大戟属植物，是中药“狼毒”3 种原
植物之一。主要化学成分有二萜、三萜、甾醇、鞣质
等化合物。东北民间用其水煎液治疗胃癌、肠癌、肺
癌、骨结核等疾病［1 ～ 5］。
狼毒大戟生药及其制剂在临床上已有较多应
用，如抗肿瘤、治疗慢性支气管炎、坐骨神经痛、癫
痫、结核病、妇科病、皮肤病等，均已取得了良好效
果，无不良反应［69］。特别是对抑菌、抗肿瘤方面，表
现出很强的生物活性，充分表明狼毒是很有前途的
中草药。有望成为未来的主流抑菌、抗癌新药，因此
深度开发狼毒的药用价值以便广泛应用于医疗领
域，具有重要的社会意义和经济价值。
抑菌作用是狼毒大戟生药的主要活性之一，目
* 收稿日期: 2011 － 12 － 22
基金项目: 内蒙古自然科学基金项目(200208020205) ;内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJ03015)
作者简介: 庞丽纹(1977 －) ，女，化学工程系讲师，硕士研究生，主要从事化工工艺方面的教学和研究．
前对狼毒抑菌作用的虽有一定的研究，但是还不够
系统［10 ～ 13］。为了确定狼毒大戟抑菌活性物质的主
要部位和活性成分，本文以金黄色葡萄球菌、表面葡
萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、志贺氏与宋
内氏痢疾菌为菌种，对狼毒大戟的不同提取部位，即
石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、水部位的抑菌作用进
行了初步研究;为了进一步确定狼毒大戟的活性成
分，我们又对从狼毒大戟中分离得到的活性成分 β
－香树脂醇乙酸酯(compound 1) ，3 3＇－二乙酰基 －
4，4＇－二甲氧基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷(com-
pound 2) ，2 4 －二羟基 － 6 －甲氧基 － 3 －甲基苯乙
酮(compound 3)和未知物(compound 4)的体外抑菌
活性进行了研究。其单体的提取、分离过程为:狼毒
大戟的干燥根粉末，用乙酸乙酯超声提取得到提取
液，提取液减压浓缩，得棕黑色浸膏。将浸膏依次用
石油醚、乙酸乙酯、甲醇进行萃取得到不同的部分，
其中石油醚萃取部位在石油醚:乙醚(15:1)洗脱部
分得到 β －香树脂醇乙酸酯;乙酸乙酯萃取部位在
石油醚:氯仿(1:1)洗脱部分得到 2，4 －二羟基 － 6
－甲氧基 － 3 －甲基苯乙酮，在氯仿洗脱部分得到 3，
3＇－二乙酰基 － 4，4＇－二甲氧基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基
二苯甲烷，在乙醚洗脱部分得到未知物［14］。
1 材料、药品与仪器
1． 1 材料与药品
本实验所用植物材料狼毒大戟购买于内蒙古通
辽市扎鲁特旗医药支公司，经鉴定为狼毒大戟的干
燥根。
营养肉汤培养基 蛋白胨 10． 0g、牛肉浸膏 3． 0g、
氯化钠 5． 0g，加入到 1 000mL 蒸馏水中，调 pH 值到
7． 4 ～ 7． 6。
牛肉膏蛋白胨固体培养基 蛋白胨 10． 0g、牛肉
浸膏 3． 0g、氯化钠 5． 0g、琼脂 20． 0g 加入到1 000mL
蒸馏水中，调 pH值到 7． 4 ～ 7． 6。
变形杆菌(Proteus vulgaris)、金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus aureus)、表面葡萄球菌(Staphylococ-
cus epidermidis)、绿脓杆菌(Pseudomonas aerugino-
sa)、志贺氏与宋内氏痢疾菌(Klebsiella pneumoni-
ae)。
以上菌种均由内蒙古医学院微生物实验室提供。
供试药物:狼毒大戟的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、
乙醇提取部位及狼毒大戟的水提取液。狼毒大戟中
分离得到的单体化合物，自制，已检测，分别为 β －
香树脂醇乙酸酯，3，3＇－二乙酰基 － 4，4＇－二甲氧基
－ 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷，2，4 －二羟基 － 6 －甲
氧基 － 3 －甲基苯乙酮和未知物 J。
1． 2 仪器
空气浴振荡器(HZO － C 型)哈尔滨东明医疗
仪器厂;电热培养箱(1414 型)东台赤峰电器设备
厂;超净工作台(SW － CJ － 2FD 型)苏州净化设备
有限公司;立式压力蒸汽灭菌器(LS － B50L型)上海
医用核子仪器厂
2 实验方法
2． 1 狼毒大戟的不同提取部位及水提取液的
抑菌研究
2． 1． 1 药物稀释液及菌悬液的制备 称取狼毒大
戟生药 50g，依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、超
声提取完全，更换溶剂前，材料自然风干。所得各提
取液减压浓缩、干燥，得各提取部位。另称取狼毒大
戟生药 50g，用蒸馏水超声提取完全，所得提取液减
压浓缩得水提取液。取上述狼毒大戟的各提取部分
及水提取液，分别用肉汤培养基溶解或悬浮(以 DM-
SO助溶，含量为 1%) ，制成浓度为每毫升含 2． 00、
1． 00、0． 50、0． 25g的稀释液。
将实验菌株接种于肉汤斜面于 37℃进行活化培
养，经活化培养的菌种转接入液体肉汤培养基，37℃
振荡培养 24h后，用肉汤培养基稀释至 106cfu． mL －1
～ 107cfu． mL －1，置于 4℃冰箱备用。将厚度为1． 5
mm的滤纸，用打孔器打成直径为 12mm 的圆片，将
滤纸片灭菌、烘干，备用。
2． 1． 2 抑菌实验 将 12mm 灭菌滤纸片分别放入
各不同浓度的提取液中，浸泡 2h，备用。将各种待试
菌液各取 0． 5mL，置于培养皿(直径 90mm)中，再向
培养皿中分别倒入 40℃ ～ 50℃溶化的培养基，轻轻
摇荡，使菌液与培养基混合均匀，厚度约 4mm ～
5mm，冷却。用无菌镊子将浸透各种浓度药液的滤
纸片贴在含菌平板上，每个平板按浓度梯度等距离
放 5 片滤纸片，其中 1 片为在生理盐水中浸泡过的
空白对照。每组做 3 个平行平板。而后把每个处理
过的培养皿放在 37℃的恒温箱中倒置培养 24h后观
察结果。
2． 2 狼毒大戟活性成分的抑菌研究
2． 2． 1 药物稀释液及菌悬液的制备 精确称取 β
－香树脂醇乙酸酯，3，3＇－二乙酰基 － 4，4＇－二甲氧
基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷，2，4 －二羟基 － 6 －
甲氧基 － 3 －甲基苯乙酮和未知物 J各 20mg，分别用
肉汤培养基溶解或悬浮(以 DMSO 助溶，含量为
1%) ，制成浓度为每毫升含 20． 0、15． 0、10． 0mg 的生
药稀释液。将实验菌株接种于肉汤斜面于 37℃进行
活化培养，经活化培养的菌种转接入液体肉汤培养
基，37℃振荡培养 24h，用肉汤培养基稀释至 106 ～
452 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 2012 年
107cfu． mL －1，置于 4℃冰箱备用。
2． 2． 2 抑菌实验 抑菌实验操作同 2． 1． 2
3 结果与讨论
3． 1 狼毒大戟的不同提取部位及水提取液的
抑菌结果
狼毒大戟的乙酸乙酯、乙醇部位及水提取液对
志贺氏与宋内氏痢疾菌、变形杆菌、金黄色葡萄球
菌、绿脓杆菌、表面葡萄球菌均有不同程度的抑制作
用;氯仿部位对志贺氏与宋内氏痢疾菌、金黄色葡萄
球菌、绿脓杆菌有不同程度的抑制作用，在相同条件
下对变形杆菌和表面葡萄球菌没有抑制作用;石油
醚部位相同条件下对以上菌种均无抑制作用，实验
结果见表 1。
由表 1 中数据可以看出，乙醇提取液对以上菌
种的抑菌活性最强;乙酸乙酯提取液和水提取液的
抑菌活性次之。其抑菌总趋势是药液浓度大则抑菌
圈较大，浓度小则抑菌圈较小，故提高药液浓度可提
高抑菌效果。以上供试药液部分抑菌现象见图 1。
其中，每个平板中央的滤纸片为空白对照样。
表 1 狼毒大戟不同浓度提取液对不同细菌的杀菌活性数据(C，g /mL)
Tab． 1 The antibacterial date of various extraction from Ef． (C，g /mL)
原料 浓度(g /mL)
志贺氏与
宋内氏痢疾菌
(抑菌圈 /mm)
变形杆菌
(抑菌圈 /mm)
金黄色葡萄球菌
(抑菌圈 /mm)
绿脓杆菌
(抑菌圈 /mm)
表面葡萄球菌
(抑菌圈 /mm)
氯仿部位
2． 0 12． 5 17 12． 5
1． 5 13
乙酸乙酯部位
2． 0 12． 5 12． 5 17． 5 13 18
1． 5 13 14
1． 0 12． 5
乙醇部位
2． 0 16 17 22． 5 20 18
1． 5 12． 5 15 16 15． 5 14． 5
1． 0 13 12． 8 12． 8 13
水提液 2． 0 12． 5 13 13． 5 13． 5 13
图 1 各供试药液抑菌图片
Fig． 1 antibacterial pictures of extractions from Ef．
据文献报道［15］，狼毒大戟抑菌的主要成分是脂
溶性成分，且氯仿部位对金黄色葡萄球菌、表面葡萄
球菌具有很好的抑制作用，在本试验中，脂溶性成分
的抑菌活性较好，但乙醇提取液抑菌活性最强，而氯
仿部位对表面葡萄球菌没有抑制作用。其原因可能
是狼毒大戟的产地不同，化学成分略有不同所致。
3． 2 狼毒大戟活性成分的抑菌结果
单体化合物 β －香树脂醇乙酸酯，3，3＇－二乙酰
基 － 4，4＇－二甲氧基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷和
2，4 －二羟基 － 6 －甲氧基 － 3 －甲基苯乙酮在上述
浓度内对以上菌株均无抑制作用;未知物 J 对表面
葡萄球菌和变形杆菌没有抑制作用，但对志贺氏与
宋内氏痢疾菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑制
作用，未知物 J抑菌实验结果见表 2。
552第 5 － 6 期 庞丽纹等: 狼毒大戟生药提取物抑菌活性的初步研究
表 2 化合物 J的抑菌活性数据(c，mg /mL)
Tab． 2 The antibacterial date of compound J
原料
浓度
(mg/mL)
志贺氏与宋内氏痢疾菌
(抑菌圈 /mm)
金黄色葡萄球菌
(抑菌圈 /mm)
绿脓杆菌
(抑菌圈 /mm)
化合物 20 18 20 13
J 15 13 13
未知物 J对志贺氏与宋内氏痢疾菌和金黄色葡萄球菌抑菌实验现象见图 2。
图 2 未知物 J抑菌图片
Fig2 antibacterial pictures of compound J
从乙酸乙酯提取液中分离得到的单体化合物 β
－香树脂醇乙酸酯、3，3＇－二乙酰基 － 4，4＇－二甲氧
基 － 2，2＇，6，6＇－四羟基二苯甲烷和 2，4 －二羟基 － 6
－甲氧基 － 3 －甲基苯乙酮没有抑菌活性，未知物虽
有抑菌活性，但所需药液浓度较高，分析其原因可能
是狼毒大戟中的抑菌作用是由多种化合物之间协同
作用的结果，因此有必要对其抑菌机制做进一步的
研究。
4 结论
通过对狼毒大戟不同溶剂提取部位、水提取液
和乙酸乙酯提取部分分离得到的单体进行抑菌实验
的研究结果表明，除狼毒大戟生药的石油醚部位外，
其他不同提取部位及水提取液对不同的菌种均有不
同程度的抑制作用;但是乙酸乙酯提取部分得到的
单体化合物除未知物 J 对志贺氏与宋内氏痢疾菌、
金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑制作用外，其余均
无抑制作用。
参 考 文 献:
［1］ 简丽，张前程，马惠言． 狼毒的有效成分及药理活性
研究进展［J］．西北药学杂志． 2003，18(4):185 － 187．
［2］ 简 丽，丁立军，庞丽纹，等．狼毒大戟水提取物中化学
成分的分离与鉴定［J］．精细化工． 2005，22(9):675 －
677．
［3］ 陈志宝，赵岩，邓旭明，等． 狼毒大戟的化学成分、药理
作用及临床应用［J］．黑龙江八一农垦大学学报． 2001，
13(3):52 ～ 57．
［4］ Chuntao M，Tianxi Z，Qinggao M，etal． Diterpenes and aro-
matic compoundsfrom Euphorbia fischeriana［J］． Phyto-
chem，1999，52:117 ～ 121．
［5］ 王晓峰，狼毒大戟化学成分与抗菌杀虫作用的研究进
展［J］． 农业科技与装备． 2011，2:50 ～ 52．
［6］ 刘文粢，何风雷，阮子镛． 狼毒大戟的化学成分研究
［J］． 中国中药杂志． 2001，26(3):180 ～ 182．
［7］ 崔晞，衣乐然，王淑娥，等． 狼毒大戟对 L615 白血病
患鼠细胞增殖及肝肾中 SOD，GSH － Px 活性的恢复作
用［J］． 山东医科大学学报． 1998，36(4):289 ～ 291．
［8］ 刑世江，王镜，李兴玉． 复方狼毒对小鼠移植性肿瘤
生长的影响［J］． 兰州医学院学报． 1998，24(1):13 ～
14．
［9］ W． K． Liu，J． C． K． Ho，Guowei Qin，et al． JolkinolideB
induces neuroendocrine differentiation of human prostate
LNCaP cancer cell line． Biochemical Pharmacology．
2002，63(5):951 ～ 957．
［10］ 浮光苗．狼毒类活性成分研究和黑面神化学资源化学
研究［D］．南京:中国药科大学博士学位论文． 2003:
29 ～ 30．
［11］ 何华红，刘肃，李薇，等．月腺大戟及狼毒大戟体外
抗肿瘤药理活性对比研究［J］． 中药材． 2011，34
(6):950 ～ 952．
［12］ 甄占萱，邓淑华，李娜，等．狼毒大戟水浸液对金黄
色葡萄球菌和大肠杆菌体外杀菌效果的研究［J］． 安
徽农业科学． 2011，39(30):18561 ～ 18562．
［13］ 王莉平，王义善，张国营，等．狼毒对荷瘤小鼠体内
恶性黑色素瘤细胞的抑制作用及其分子机制研究
［J］． 时珍国医国药． 2011，22(11):2677 ～ 2680．
［14］ 庞丽纹．狼毒大戟活性成分研究［D］．呼和浩特:内蒙
古工业大学硕士士学位论文． 2006:14 ～ 15．
［15］ 浮光苗． 狼毒大戟化学成分与药理作用［J］． 国外医
药·植物药分册． 2003，18(3):101 ～ 103．
652 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 2012 年