全 文 ：大黄酚:Y =5 641 015X - 14 686 , r =0. 999 9 ,
线性范围 0. 007 52 ～ 0. 052 64 g L-1 。
图 1　HPLC色谱图
A-对照品;B-一清软胶囊;C-阴性对照;1-大黄素;2-大黄酚
2. 4　精密度试验　精密吸取对照品溶液 10 μL ,重
复进样 5次 ,按供试品测定项下测定峰面积 ,测得大
黄素 RSD为 0. 89%,大黄酚 RSD为 0. 72%。
2. 5　稳定性试验 　精密吸取同一供试品溶液 10
μL ,分别在 0 ,1 , 2 , 4 ,8 和 12 h 进样 ,测定峰面积 ,结
果大黄素 RSD 为 1. 23%,大黄酚 RSD为 1. 06%。
结果表明 ,供试品溶液在 12 h 内基本稳定 。
2. 6 　重复性试验 　取同一批号供试品(批号
040301),照供试品测定项下方法测定 5份 ,结果大黄
素平均含量为 0. 174 mg 粒-1 ,RSD为 1. 92%;大黄
酚平均含量为 0. 267 mg 粒-1 , RSD 为 1. 43%。结
果表明 ,本方法重复性良好。
2. 7　加样回收率试验　分别精密量取对照品贮备液
3 ,5和 7 mL ,置具塞锥形瓶中 ,挥干溶剂 ,取已知含
量的供试品 ,研细 ,混匀 ,取约 0. 5 g ,精密称定 ,置上
述锥形瓶中 ,自“精密加乙醇 25 mL 起” ,照供试品溶
液的制备项下操作 ,测定峰面积 ,代入回归方程计算 ,
结果见表 1 ,表 2。结果表明本方法加样回收率良好。
2. 8　供试品测定　取 3批样品 ,按样品测定方法进
行测定 ,测定结果见表 3。
表 1　大黄素回收率试验结果
序号 样品取样量 /g
样品中含
量 /mg
加入量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/% 平均值
RSD
/%
1 1. 561 2 0. 543 3 0. 409 8 0. 949 8 99. 2
2 1. 560 7 0. 543 1 0. 409 8 0. 941 0 97. 1
3 1. 543 8 0. 537 2 0. 546 4 1. 075 4 98. 5
4 1. 544 4 0. 537 4 0. 546 4 1. 066 9 96. 9 98. 2 2. 0
5 1. 556 8 0. 541 8 0. 683 0 1. 197 5 96. 0
6 1. 560 2 0. 542 9 0. 683 0 1. 234 8 101. 3
表 2　大黄酚回收率试验结果
序号 样品取样量 /g
样品中含
量 / mg
加入量
/ mg
测得总量
/mg
回收率
/% 平均值
RSD
/%
1 1. 561 2 0. 833 7 0. 616 8 1. 436 9 97. 8
2 1. 560 7 0. 883 4 0. 616 8 1. 449 6 99. 9
3 1. 543 8 0. 824 4 0. 822 4 1. 632 0 98. 2
4 1. 544 4 0. 824 7 0. 822 4 1. 657 7 101. 3 99. 1 2. 0
5 1. 556 8 0. 831 3 1. 028 1. 825 3 96. 7
6 1. 560 2 0. 833 1 1. 028 1. 876 5 101. 5
表 3　一清软胶囊含量测定结果
批号
大黄素
含量 /mg 粒-1 RSD /% 　
大黄酚
含量 / mg 粒-1 RSD /%
总含量
/ mg 粒-1
040301 0. 174 1. 87 0. 267 1. 65 0. 441
040302 0. 182 1. 65 0. 253 1. 97 0. 435
040303 0. 168 1. 86 0. 238 1. 82 0. 406
3　讨论
①本制剂直接用酸水解测定大黄素和大黄酚含
量 ,其回收率在 67. 3%～ 70. 8%之间 ,曾试验增加水
解时酸用量 ,回收率没有明显改变。分析原因可能是
制剂中含有大量的油脂类成分 ,影响了结合型大黄素
和大黄酚的水解 。
②用氯仿脱脂可消除油脂类成分对大黄素和大
黄酚测定的影响 ,还可消除此类成分对色谱柱的损
坏 ,延长色谱柱的使用时间 。
③近年来中药软胶囊制剂发展较快 ,对其有效成
分的测定常因其含大量的基质而受到影响 , 本方法
为软胶囊中大黄素和大黄酚的测定提供一种思路。
参考文献:
〔1〕　中国药典 2000 年版[ S] .一部 . 2000. 18～ 19.
〔2〕　杨云 , 张晶 , 陈玉婷. 天然药物化学成分提取分离手册
[ M] .北京:中国中医药出版社 , 2003. 33 ～ 34.
(收稿日期:2006-08-02)
溪黄草提取物成分预试及对羟自由
基的清除作用
段志芳 ,彭宝玲 ,林丽莎(广东肇庆学院生物医药工程
中心 , 广东 肇庆 526061)
摘要:目的　初步测定溪黄草提取物的化学成分类型及其对
羟自由基的清除作用。方法　用水 、乙醇和石油醚对溪黄草
进行提取 , 根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分
的类型 , 利用结晶紫作显色剂的分光光度法研究各提取物对
羟自由基的清除作用。结果　溪黄草水提取物对 Fenton 反
应产生的羟自由基具有清除作用 , 而乙醇和石油醚提取物对
羟自由基的清除作用不明显。结论　溪黄草中的水溶性成分
对羟自由基具有清除作用。
关键词:溪黄草;提取物;成分预试;羟自由基
基金项目:肇庆市科技局基金资助项目(203E501)
中图分类号:O657. 3　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2007)04-0174-03
174 西北药学杂志　2007 年 8 月　第 22 卷　第 4 期
中药溪黄草(Rabdosia serra (Maxim. )Hara)为唇
形科香茶菜属植物 ,属于民间习用草药 ,药用全草 ,具
有清热解毒 、退黄祛湿 、凉血散瘀的功效〔1〕 ,临床用于
治疗急性肝炎 、胆囊炎 、痢疾 、肠炎等症〔2〕 。目前已开
发出以其为主要原料的保健品 ,具有较大的市场潜力。
羟自由基与衰老 、肿瘤 、辐射损伤和细胞吞噬等
有关 ,它可以通过电子转移 、加成以及脱氧等方式与
生物体内的多种分子作用 ,造成糖类 、氨基酸 、蛋白
质 、核酸和脂类等物质的氧化性损伤 ,使细胞坏死或
突变 ,羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要
指标〔3〕 。笔者用水 、乙醇和石油醚对溪黄草进行提
取 ,根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分
的类型 ,并采用结晶紫作显色剂的分光光度法测定各
提取物对 Fenton 反应产生的羟自由基的清除率 ,初
步研究溪黄草提取物的抗氧化性能 ,以期为溪黄草的
开发利用寻找新的途径。
1　仪器 、材料与试剂
1. 1　仪器　UV-2550型紫外-可见分光光度计(日本
岛津);FA2004N 、FA1604 电子分析天平(上海精密
科学仪器有限公司);HH-4型数显恒温水浴锅(常州
国华电器有限公司);ZKJ-1型循环水真空泵(上海嘉
鹏科技有限公司);RE-52AA 旋转式蒸发器(上海嘉
鹏科技有限公司);DJ-10倾倒式粉碎机(上海淀久中
药机械制造有限公司);101-2AS 电热鼓风恒温干燥
箱(上海迅能电热设备有限公司)。
1. 2　材料和试剂 　溪黄草(Rabdosia serra (Max-
im .)Hara)全草购于肇庆市中药材市场 ,经肇庆学院
生物系陈雄伟副教授鉴定;硫酸铜 、酒石酸钾 、碘 、碘
化钾 、氢氧化钠 、盐酸 、硅钨酸 、溴酚蓝 、三氯化铁 、明
胶 、氯化钠 、茚三酮 、三氯化铝 、镁粉 、醋酸镁 、盐酸羟
胺 、苦味酸 、过氧化氢 、结晶紫 、FeSO 4 7H2O 、三(羟
甲基)氨基甲烷(Tris)、三氯甲烷 、冰乙酸 、甲醇 、丙
酮 、石油醚 、乙醇等均为国产分析纯 。
2　实验方法
2. 1　水提取液　取粉碎的溪黄草 5 g 加水 60 mL ,
在50 ～ 60℃的水浴上加热1 h后过滤 ,此滤液在试管
及滤纸片或薄层上做多糖 、有机酸 、皂苷 、苷类 、酚类 、
鞣质 、氨基酸 、蛋白质 、生物碱显色反应 。
2. 2　乙醇提取液 　取粉碎的溪黄草 10 g ,加乙醇
120 mL ,在水浴上加热回流 1 h , 过滤 ,滤液留 2 mL
进行酚类 、鞣质 、有机酸的预试验。其余浓缩成浸膏 ,
浸膏分为两部分 ,一部分置于研钵中 ,用 2%HCl溶
解 ,过滤 ,取盐酸水溶液进行生物碱预试验 ,附滤纸上
的残渣再以少量乙醇溶解 ,作黄酮 、蒽醌试验;另一部
分浸膏再以少量的乙酸乙酯溶解 ,溶液置分液漏斗中
加适量 5%NaOH 振摇 ,使酚性物质及有机酸等转入
下层氢氧化钠水溶液中 ,乙酸乙酯部分用蒸馏水洗至
中性 ,将乙酸乙酯液 2 ～ 3 mL 在水浴上蒸干 ,以 1 ～ 2
mL 乙醇溶解作香豆素与萜类内酯和强心苷的试验 。
2. 3　石油醚提取液　取粉碎的溪黄草 1 g ,加10 mL
石油醚(沸程 60 ～ 90℃),放置 3 h ,过滤 ,滤液置表面
皿上任其挥发 ,残留物进行甾体或三萜类 、挥发油和
油脂的试验 。
2. 4　溪黄草提取物清除羟自由基研究
2. 4. 1　溪黄草提取物制备　称取已粉碎的溪黄草各
100 g ,分别以水 、乙醇和石油醚提取 2 次(方法同
2. 1 ,2. 2和 2. 3),过滤 ,合并滤液 ,减压浓缩回收溶
剂 ,40 ～ 50℃干燥 ,称重。
2. 4. 2　羟自由基的测定　在 10 mL 具塞比色管中
加入 1. 4 mL 结晶紫溶液(2×10﹣5 mol L﹣1), 1. 0
mL Fe
2+溶液(5 ×10﹣3 mol L﹣1), 0. 4 mL H 2O 2
(1%)溶液 ,1. 0 mL Tris-HCl溶液(pH5. 5),用 2次
蒸馏水稀释到 10 mL 并摇匀 ,放置 5 min后 ,以空白
作参比 ,在波长 588 nm 处测定吸光度 A 。
2. 4. 3　溪黄草提取物清除羟自由基作用　称取一定
量的溪黄草提取物 ,并将各提取物用相应的提取剂溶
解 。在 2. 4. 2体系中 ,加入一定量的溪黄草提取液 ,
测定体系吸光度 As ;未加溪黄草提取物的体系其吸
光度为 A0 ;未加 Fenton试剂和溪黄草提取物的体系
其吸光度为 A ,则清除率 D 按以下公式计算:D =
[(As - A0) /( A - A0)] ×100%。
3　结果
3. 1　水提液的显色反应结果　在水提液化学成分预
试验中 ,取少量提取液 ,加入菲林试剂 ,有砖红色沉淀
生成 ,表明提取液中含有糖;测定 pH 值大约为 6 ～
7 ,同时采用薄层检识 ,溴酚蓝试剂显色 ,有黄色斑点 ,
表明提取液中含有机酸;与 1%FeC l3 试剂进行纸斑
反应 ,显墨绿色 ,表明提取液中含有酚类物质;取少量
提取液放入试管中 ,加入明胶试剂 ,有白色沉淀生成 ,
表明提取液中含有鞣质;采用纸色谱检识 ,茚三酮试
剂显色 ,有浅紫色斑点 ,表明提取液中含有氨基酸;在
试管中进行双缩脲反应 ,呈墨绿色 ,说明蛋白质反应
现象不明显;在试管中进行菲林试验 ,滤液酸化后砖
红色沉淀增多 ,表明提取液中含有苷类;在试管中进
行泡沫试验 ,振荡时泡沫多 ,但很快消失 ,说明皂苷的
反应不明显;取少量提取液放入试管中 ,加入硅钨酸
试剂 ,有灰白色沉淀 ,表明提取液中含有生物碱 。
初步分析表明 ,水提液中蛋白质和皂苷没有明显
的反应现象 ,主要含有机酸 、酚类 、鞣质 、氨基酸 、多
糖 、苷类和生物碱 。
175西北药学杂志　2007 年 8 月　第 22 卷　第 4 期
3. 2　乙醇提取液的显色反应结果　在乙醇提取液化
学成分预试验中 ,酚类 、鞣质和有机酸部分的试验结
果如下:滤液与 1%FeCl3 的纸斑反应显墨绿色 ,表明
含有酚类物质;在试管中与明胶试剂作用 ,有沉淀生
成 ,表明含有鞣质;采用薄层色谱检识 ,溴酚蓝试剂显
色 ,有黄色斑点 ,表明含有机酸。生物碱部分的试验
结果如下:在试管中与硅钨酸试剂作用有灰白色沉淀
生成 ,和鞣酸试剂作用有褐色沉淀生成 ,和苦味酸试
剂反应有棕黄色晶体沉淀生成 ,均表明含有生物碱。
黄酮 、蒽醌部分的试验结果如下:与 1%AlCl3 的纸斑
反应显鲜黄色荧光 ,盐酸-镁粉反应呈红色 ,表明此部
分含有黄酮;与 10% KOH 的纸斑反应显橙色 ,与
0. 5%醋酸镁的纸斑反应显橙色 ,表明此部分含有蒽
醌。香豆素与萜类内酯和强心苷部分的试验结果如
下:在试管中进行开环和闭环反应 ,加入 NaOH 溶液
澄清 ,再加入盐酸溶液变浑浊 ,在滤纸上进行香豆素
的呈色反应为墨绿色 ,进行羟胺反应有红色斑点 ,表
明此部分含有香豆素和萜类内酯;加入苦味酸试剂为
黄绿色 ,表明强心苷没有明显的反应。
上述实验结果表明 ,乙醇提取液中强心苷没有明
显的反应 ,主要含有酚类 、鞣质 、有机酸 、生物碱 、黄
酮 、蒽醌类 、香豆素和萜类内酯 。
3. 3　石油醚提取液的显色反应结果　石油醚提取液
化学成分预试验中 ,在试管中提取液与醋酐-浓硫酸
发生作用 ,下层紫红 ,上层逐渐变绿 ,表明含有甾体或
三萜类;石油醚提取液滴于滤纸片上 ,有油斑出现 ,加
热有部分能挥发 ,表明含有挥发油和油脂。
上述结果表明石油醚提取液中含有甾体或三萜
类 、挥发油和油脂。
3. 4　溪黄草提取物清除羟自由基作用效果
3. 4. 1　溶剂对溪黄草提取率的影响 　分别用石油
醚 、乙醇和水提取溪黄草 ,一定时间后 ,过滤 ,合并提
取液 ,减压浓缩 ,真空干燥后称重 ,计算提取率 ,结果
表明水提取物的提取率最高(15. 20%),乙醇次之(6.
91%),石油醚最小(1. 38%)。
3. 4. 2　溪黄草提取物对羟自由基的清除效果　Fen-
to n反应体系是以过氧化氢为氧化剂 ,以 Fe2+为催化
体系的氧化法〔4〕 :
Fe2++H 2O 2 →Fe3++OH﹣+ OH
三苯甲烷碱性染料结晶紫在 588 nm 处有强烈
吸收 ,它与 OH 反应生成无色物质 ,使体系的吸光
度降低。中药提取物可以清除溶液中的 OH ,从而
使溶液吸光度下降的程度降低 ,据此原理建立了一种
测定中药对 OH 清除率的方法 ,该法操作简便 、测
定快速〔5〕 。采用此方法测定溪黄草提取物清除 Fen-
ton反应产生的 OH ,试验结果见表 1。
表 1　溪黄草提取物对羟自由基清除率结果
质量浓度 / g L-1 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1. 0
水提取物 1 5 7 13 15
乙醇提取物 - 7 - 19 - 29 - 38 - 47
石油醚提取物 - 66 - 76 - 82 - 87 - 93
4　讨论
①在水提液预试验中 ,蛋白质和皂苷的反应现象
不明显 ,酚类 、有机酸 、鞣质 、氨基酸 、苷类 、多糖 、生物
碱都有明显的反应现象。水提取物对 Fenton反应产
生的羟自由基表现出一定的清除能力 ,随着浓度增
大 ,其清除作用增强。在今后的实验中将对此部分生
物活性物质进行深入研究 。
②在乙醇提取液中 ,强心苷没有明显的反应现
象 ,酚类 、鞣质 、有机酸 、生物碱 、黄酮 、蒽醌 、香豆素 、
萜类内酯均与相应试剂有反应。乙醇提取物对 Fen-
ton反应产生的羟自由基清除作用不明显。
③石油醚提取液中含有甾体或三萜类 、挥发油和
油脂 ,在所研究的质量浓度范围内对 Fenton反应产
生的羟自由基没有清除作用。
参考文献:
〔1〕　江苏新医学院. 中药大辞典[ M] . 下册.上海:上海科学
出版社 , 1977. 25.
〔2〕　吴剑峰. 溪黄草的研究综述[ J] . 时珍国医国药 , 2003 ,
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的清除作用[ J] . 化学世界 , 2001(8):421 ～ 422 , 434.
〔5〕　方光荣 ,刘洁 , 刘丽虹 ,等. 分光光度法测定中药对羟自
由基的清除率[ J] . 湖北大学学报(自然科学版), 2004 ,
26(2):151 ～ 154.
(收稿日期:2006-09-19)
温胃胶囊提取工艺研究
何禄仁 ,王兰霞(甘肃省药品检验所 , 甘肃 兰州 730000)
摘要:目的　优选出温胃胶囊挥发油提取和醇提工艺的最佳
参数。方法　采用正交试验法 , 以浸泡时间 、加水量 、提取时
间 3 因素 3 水平 , 以挥发油提取率为考察指标 , 优选挥发油提
取工艺;以乙醇体积分数 、加醇量 、提取时间 3 因素 3 水平 , 以
醇浸膏得率和总黄酮含量为考察指标 , 优选醇提工艺。 结果
与结论　温胃胶囊挥发油提取的最佳工艺参数为浸泡 2 h , 加
10 倍量水 ,水蒸气蒸馏 8 h;醇提最佳工艺参数为加 6 倍量体
积分数 60%乙醇提取 2 h。
关键词:温胃胶囊;正交试验;挥发油;总黄酮
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2007)04-0176-03
176 西北药学杂志　2007 年 8 月　第 22 卷　第 4 期