全 文 ：头花蓼对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的
细胞间隙连接通讯功能的影响
温丽娜１　罗昭逊１△　莫非１　张姝１　张婉颖２　袁昌增２
（１．贵阳医学院医学检验学院，贵州 贵阳５５０００４；２．贵阳医学院医学检验学院临检教研室，贵州 贵阳５５０００４）
　　摘　要　目的 探讨头花蓼对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１细胞间隙连接通讯功能的
影响。方法 采用划痕标记荧光染料示踪技术检测不同比例（幽门螺旋杆菌与细胞之比为２５∶１，５０∶１，１００∶１）的
幽门螺旋杆菌数对胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１细胞作用２４ｈ后间隙连接通讯功能的影响。构建幽门螺旋杆菌相关
性胃炎（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ，ＨＰＡＧ）细胞模型基础上，采用划痕标记荧光染料示踪技术检测不
同浓度的头花蓼（８μｇ／ｍＬ、１６μｇ／ｍＬ、３２μｇ／ｍＬ、６４μｇ／ｍＬ）作用２４ｈ后对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的细胞间隙
连接通讯功能的影响。结果 （１）通过划痕标记荧光染料示踪技术检测结果表明细菌与细胞之比为５０∶１作用２４ｈ
时，减弱了胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１细胞间隙连接通讯功能（Ｐ＜０．０５）；（２）通过划痕标记荧光染料示踪技术检测
结果表明头花蓼（６４μｇ／ｍＬ）作用２４ｈ改善了幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞模型的细胞连接通讯功能（Ｐ＜０．０５）。
结论 头花蓼（６４μｇ／ｍＬ）作用２４ｈ改善了幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞模型的细胞连接通讯功能，为头花蓼对
Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ相关性胃炎的抗菌、抗炎机制奠定了实验基础。
　　关键词　头花蓼；　　ＧＥＳ－１细胞；　　幽门螺旋杆菌相关性胃炎；　　划痕标记荧光染料示踪技术法
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　ｔｏ　ｃｅｌ　ｇａｐ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ
Ｗｅｎ　Ｌｉｎａ１，Ｌｕｏ　Ｚｈａｏｘｕｎ１△，Ｍｏ　Ｆｅｉ　１，Ｚｈａｎｇ　Ｓｈｕ１，Ｚｈａｎｇ　Ｗａｎｙｉｎｇ２，Ｙｕａｎ　Ｃｈａｎｇｚｅｎｇ２．
１．Ｔｈｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４，Ｃｈｉｎａ．２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ　５５０００４，Ｃｈｉｎａ．
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　ｅｆｆｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｇａｐ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ
ｔｈａｔ　ａｍｏｎｇ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ－ＧＥＳ－１ｃｅｌ．Ｍｅｔｈ－
ｏｄ　Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｃｒａｔｃｈ　ｍａｒｋ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｔｒａｃｅｒ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｔｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔ－
ｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ（２５∶１，５０∶１，１００∶１）ｅｆｆｅｃｔ　ｇａｐ　ｊｕｎｃｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ－
ＧＥＳ －１ｒｏｌｅ　ａｆｔｅｒ　２４ｈ，４８ｈ．Ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ　ｃｏｐｉｅｄ，ｔｈｅ　ｓｃｒａｔｃｈ　ｍａｒｋ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｔｒａｃｅｒ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
ｔｅｓｔｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｈｅａｄｄｒｅｓｓ　ｆｌｏｗｅｒ　ｓｍａｒｔｗｅｅｄ　８μｇ／ｍＬ，１６μｇ／ｍＬ，３２μｇ／ｍＬ，６μｇ／ｍＬ）ｅｆｆｅｃｔｅｄ
ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ　ｓｐａｃｅ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ　Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ
ｓｃｒａｔｃｈ　ｍａｒｋ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｔｒａｃｅｒ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｓｈｏｗｎ　ｔｈａｔ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　５０∶１ｅｆｆｅｃｔ　２４ｈ，ｔｈｅ　ｈｅ－
ｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ｎｕｍｂｅｒ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ　ｓｐａｃｅ　ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ
ｃｅｌ－ＧＥＳ－１（Ｐ＜０．０５）．Ｉｔ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ
ｃｅｌｓ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　ｗａｓ　６４μｇ／ｍＬ；ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｃｒａｔｃｈ　ｍａｒｋ　ｆｌｕ－
ｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｔｒａｃｅｒ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＩｔ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏ－
ｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ　ｃｅｌｓ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　ｗａｓ　６４μｇ／ｍＬ　ｉｔ　ｂｕｉｌｔ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ　ｔｏ　Ｈ．ｐ　ｙｌｏｒｉ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ，ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．
　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　Ｃａｐｉｔａｔｕｍ；　　ＧＥＳ－１；　　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ；　　ＳＤＬＴ
　　基金项目：本课题系高等学校特色专业建设点［Ｎｏ：（２０１０）１５］；
贵州省科技厅、贵阳医学院联合基金资助项目［黔科合ＬＧ（２０１２）
０５４号］；贵州省科技厅、贵阳医学院联合基金资助项目［黔科合
ＬＧ（２０１２）０１２号］；贵州省科技计划课题［黔科合Ｊ字（２０１４）２０２７
号］；２０１４年地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目
（２０１４１０６６００１４）
△通信作者，Ｅｍａｉｌ：３９３７７５４２０＠ｑｑ．ｃｏｍ
　　中图分类号：Ｒ５７３．３，Ｒ４６６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－７４４Ｘ（２０１５）０３－０１９８－０５
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ＩＳＳＮ．１０００－７４４Ｘ．２０１５．０３．００２
　　幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感
染已被确认为在人类胃、十二指肠疾病发生发展中
起重要作用［１］。有研究表明［２－４］Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ降低胃黏
膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１细胞间隙连接通讯（ｇａｐ　ｊｕｎｃ－
ｔｉｏｎ　ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，ＧＪＩＣ）功 能。
·８９１· Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１５，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．３
ＧＪＩＣ功能在细胞增殖、分化、内环境稳定过程中起
着重要的调控作用［５］。前期实验表明头花蓼水提物
对 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ有较好的抑菌效果，同时具有影响幽门
螺杆菌相关性胃炎细胞模型增殖、分化作用。本研
究以幽门螺旋杆菌相关性胃炎（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏ－
ｒｉ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ，ＨＰＡＧ）上皮细胞为研究对
象，观察头花蓼对 ＨＰＡＧ上皮细胞ＧＪＩＣ功能的影
响。为揭示头花蓼对 ＨＰＡＧ作用提供实验依据。
１　材料与方法
１．１　材料　来源于人永生化胃黏膜上皮细胞
（ＧＥＳ－１），购于北京肿瘤研究所。头花蓼浸膏由王
子厚教授（原国家药检局新药审评中心研究员）提
供。幽门螺杆菌采用国际标准株 ＡＴＣＣ７００３９２菌
株（ＣａｇＡ＋及ＶａｃＡ＋），由中国疾病控制中心传染
病所张建中教授惠赠。
１．２　主要试剂及仪器　高糖ＤＭＥＭ 培养基，胎牛
血清，谷氨酰胺（Ａｍｒｅｓｃｏ公司），四唑盐（北京奇华
盛生物技术有限公司），荧光黄染料（Ｓｉｇｍａ公司），
人ＩＬ－８定量分析酶联免疫检测试剂盒（上海巧伊生
物科技有限公司）；三气培养箱，ＰＣＳ－１５０型 ＣＯ２
细胞培养箱（日本三洋株式会社），倒置显微镜（日本
Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），酶标仪（ＢＩＯ－ｘＭａｒｋ）。
１．３　方法
１．３．１　胃黏膜上皮细胞ＧＥＳ－１的培养　人胃黏膜
细胞系ＧＥＳ－１细胞复苏后置于细胞培养瓶内，以
ＤＭＥＭ为培养液（含１０％胎牛血清，ｐＨ７．４），置
３７℃、５％ＣＯ２、９０％相对湿度培养箱中培养，隔天
更换培养液，每３ｄ按１∶２比例传代。
１．３．２　Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ的培养及及定量　从－８０℃冰箱
中取出标准菌株 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ　ＡＴＣＣ７００３９２，室温溶解
后涂布均匀于哥伦比亚血琼脂平皿内，３７℃恒温箱
内培养７２ｈ（５％Ｏ２、１０％ＣＯ２、８５％Ｎ２，相对湿度
９５％以上 ），观察细菌生长情况并进行 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ鉴
定实验。将鉴定结果均为阳性的细菌进行传代培
养。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ在哥伦比亚琼脂血平板微需氧培养
７２ｈ后刮取菌落，加入到事先配制好的不含双抗的
ＤＭＥＭ培养液中混匀。使用酶标仪检测菌液 ＯＤ
值，将菌液稀释得到３×１０８　ＣＦＵ／ｍＬ，１５ｍｉｎ内完
成。
１．３．３　划痕标记荧光染料示踪技术（ＳＬＤＴ）法检
测不同比例的幽门螺旋杆菌数对胃黏膜上皮细胞
株－ＧＥＳ－１细胞间隙连接通讯功能　用胰酶消化对
数期细胞，制成细胞悬液，细胞计数调其浓度为５．０
×１０４ 个／ｍＬ。接种于６孔培养板，每孔体积２ｍＬ，
细胞过夜贴壁后，取出６孔培养板，弃去孔内原有的
培养基，ＧＥＳ－１细胞与 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ按细菌／细胞比例
（２５∶１、５０∶１、１００∶１）共培养２４ｈ后，弃原培养
基。然后 ＰＢＳ清洗后弃净液体，加入含 Ｌｕｃｉｆｅｒ
Ｙｅｌｏｗ（０．５ｍｇ／ｍＬ）的ＰＢＳ液，每孔２ｍＬ，用锐利
刀刃轻轻划痕，放置６０ｍｉｎ，ＰＢＳ清洗。最后用倒
置荧光显微镜观察摄像。
选４条划痕，每条选平滑处计数１个视野中带有
荧光的细胞个数及层数，通过观察荧光染料扩散的距
离及扩散的细胞数，反映细胞ＧＪＩＣ功能状况。结果
判断：（－）：荧光染料只限于划痕边沿单列细胞；
（＋）：荧光染料向邻近传递２列细胞；（＋＋）：荧光染
料向邻近传递３列细胞；（＋＋＋）：荧光染料向邻近
传递４列细胞及以上。荧光染料向邻近细胞传递列
数越大，扩散的细胞数越多，ＧＪＩＣ功能越强；反之，
ＧＪＩＣ功能越弱。
１．３．４　构建 ＨＰＡＧ细胞模型及鉴定　ＧＥＳ－１细胞
与Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ按细菌／细胞比例５０∶１共培养２４ｈ后，
抽取上清进行快速尿素酶试验；Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ培养，并对
培养７２ｈ后的菌落进行鉴定；ＥＬＩＳＡ试验（根据试剂
盒的说明书操作）来鉴定ＨＰＡＧ细胞模型。
１．３．５　划痕标记荧光染料示踪技术检测不同浓度
的头花蓼对幽门螺旋杆菌相关性胃炎的细胞间隙连
接通讯功能　用胰酶消化对数期细胞，制成细胞悬
液，细胞计数调其浓度为５．０×１０４ 个／ｍＬ。接种于
６孔培养板，每孔体积２ｍＬ，细胞过夜贴壁后，取出
６孔培养板，弃去孔内原有的培养基，ＧＥＳ－１细胞与
Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ按细菌／细胞比例５０∶１共培养２４ｈ后，
加入不同浓度的头花蓼（８μｇ／ｍＬ 、１６μｇ／ｍＬ、
３２μｇ／ｍＬ、６４μｇ／ｍＬ），培养２４ｈ后弃原培养基。
然后ＰＢＳ清洗后弃净液体，加入含Ｌｕｃｉｆｅｒ　Ｙｅｌｏｗ
（０．５ｍｇ／ｍＬ）的ＰＢＳ液，每孔２ｍＬ，用锐利刀刃轻
轻划痕，放置６０ｍｉｎ，ＰＢＳ清洗。最后用倒置荧光
显微镜观察摄像。
２　结　果
２．１　ＳＬＤＴ法检测不同比例的幽门螺旋杆菌数对
胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１作用２４ｈ后细胞间隙连
接通讯功能的影响　２４ｈ时对照组荧光染料通过
细胞间隙进入细胞，镜下细胞发黄绿荧光，荧光染料
向邻近细胞最远传递至４列（见图１），荧光扩散平
均细胞数（见表１）；细菌与细胞之比为２５∶１与对
照组比，荧光染料向邻近细胞传递情况（见图１），荧
·９９１·贵州医药２０１５年３月第３９卷第３期
光扩散平均细胞数（见表１，Ｐ＞０．０５）无明显变化，
ＧＪＩＣ功能无明显改变。细菌与细胞之比为５０∶１、
１００∶１与对照组比荧光染料向邻近细胞传递减弱
（见图１），荧光扩散平均细胞数（见表１，Ｐ＜０．０５）
有明显变化，荧光扩散平均细胞数减少，ＧＪＩＣ功能
减弱。且图１所示细菌与细胞之比为１００∶１时，细
胞大部分死亡且表１所示荧光扩散平均细胞数太
少。所以细菌与细胞之比为５０∶１时，此幽门螺旋
杆菌数减弱胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１细胞间隙连
接通讯功能。
图１　不同比例的幽门螺杆菌对ＧＥＳ－１细胞作用２４ｈ后ＧＪＩＣ功能的改变
表１　不同比例的幽门螺杆菌对ＧＥＳ－１细胞作用
２４ｈ后ＧＪＩＣ功能的改变
组别
荧光扩散平均细胞数
－ ＋ ＋＋ ＋＋＋
对照组 １６．２５　 ７．７５　 ３．７５　 ７．５０
２５∶１组 ２０．００　 ６．２５　 １．００　 ４．５０
５０∶１组＊ ２０．００　 １．７５　 ０．７５　 ０．００
１００∶１组＊ ９．００　 ０．７５　 ０．５０　 ０．２５
　　注：与对照组比较，＊Ｐ＜０．０５。
　　综上所述，细菌与细胞之比为５０∶１，作用２４ｈ
时，此幽门螺旋杆菌数明显减弱胃黏膜上皮细胞株－
ＧＥＳ－１细胞间隙连接通讯功能。
２．２　鉴定 ＨＡＧ 细胞模型　通过对上清液进行
Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ微需氧培养、快速尿素酶试验阳性及ＩＬ－８
的检测，鉴定感染细胞模型，结果见图２所示检测的
ＯＤ值跟所含ＩＬ－８的浓度成线性关系，且５０∶１的
ＯＤ值与对照组相比，Ｐ＜０．０５，数值差异有统计学
意义，所以细菌与细胞之比为５０∶１，感染的细胞上
清中ＩＬ－８的浓度与对照组比，有统计学意义，感染
了人胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１。Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ尿素酶
试验阳性。抽取的上清中有幽门螺杆菌生长。综上
所述幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞模型构建成功。
图２　ＩＬ－８的检测结果
２．３　ＳＬＤＴ检测头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎
作用２４ｈ后细胞间隙连接通讯功能的影响　如图３
所示２４ｈ时对照组荧光染料通过细胞间隙进入细
胞，镜下细胞发黄绿荧光，荧光染料向邻近细胞最远
传递４列，荧光扩散平均细胞数（见表２）；模型组与
对照组比，模型组荧光染料向邻近细胞传递减弱，最
远传递３列（见图３），荧光扩散平均细胞数（见表２，
·００２· Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１５，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．３
Ｐ＜０．０５）有明显变化，荧光扩散平均细胞数减少。
所以模型组减弱了胃黏膜上皮细胞株－ＧＥＳ－１的细
胞间隙连接通讯功能。不同浓度头花蓼的药物组与
模型组比，头花蓼浓度为６４μｇ／ｍＬ时荧光染料向
邻近最远细胞传递４列，有明显改善（见图３），荧光
扩散平均细胞数（见表２，Ｐ＜０．０５）有明显变化，荧
光扩散平均细胞数增多。头花蓼浓度为６４μｇ／ｍＬ
时改善了 ＨＡＧ细胞模型组的细胞连接通讯功能。
表２　不同浓度的头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎作用
２４ｈ后ＧＥＳ－１细胞ＧＪＩＣ功能改变
组别　
荧光扩散平均细胞数
－ ＋ ＋＋ ＋＋＋
对照组 ５６．００　 ８．００　 １．５０　 ３．５０
模型组＊ ２７．７５　 ４．００　 ０．５０　 ０．００
６４μｇ／ｍＬ组▲ ５５．７５　 ８．７５　 ０．７５　 ０．２５
３２μｇ／ｍＬ组 ４３．５０　 ３．７５　 ０．００　 ０．００
１６μｇ／ｍＬ组 ４５．２５　 １３．００　 ０．５０　 ０．００
８μｇ／ｍＬ组 ４０．７５　 １０．００　 ０．００　 ０．００
　　注：与对照组相比，＊Ｐ＜０．０５；与模型组相比，▲Ｐ＜０．０５。
图３　不同浓度的头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎作用２４ｈ后ＧＥＳ－１细胞ＧＪＩＣ功能改变
　　综上所述，头花蓼（６４μｇ／ｍＬ）作用２４ｈ能在
一定程度上改善幽门螺杆菌相关性胃炎的ＧＪＩＣ功
能障碍。
３　讨　论
自１９８３年澳大利亚学者 Ｍａｒｓｈａｌ 和 Ｗａｒｒｅｎ
首次从胃炎和胃溃疡患者的胃黏膜活检标本中成功
分离出Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ之后，开始了细菌感染与胃部疾病
相关研究的新领域。目前文献［６］称这类胃炎为
Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ相关性胃炎，即 ＨＰＡＧ与 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ感染
显著相关。
采用抗生素治疗 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ后，耐药性强、易导
致菌群失调、根治成功率逐年下降等问题越来越严
重。近１０年的大量研究表明，中医药在治疗幽门
螺杆菌相关性胃炎方面存在着很大潜力。因此越来
越多学者开始试图从中医药角度寻求治疗Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ
相关性胃炎的新方法和新药物，希望从中寻求一定
的突破［７］。头花蓼对多种细菌具有抑菌作用［８］。前
期实验研究显示头花蓼水提物作用于 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ参
考株ＡＴＣＣ７００３９２　７２ｈ后 ＭＩＣ为４ｍｇ／ｍＬ，从细
胞水平用 ＭＴＴ比色法得出头花蓼高于１２８μｇ／ｍＬ
时，对ＧＥＳ－１细胞增殖有明显的抑制作用。
本实验检测结果显示了 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ参考株
ＡＴＣＣ７００３９２感染引起的胃黏膜上皮细胞间隙连
接通讯功能的抑制，因此 ＨＰＡＧ的细胞间隙连接通
讯功能较正常胃上皮细胞是减弱的。如果在
Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ感染早期根除 Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ或通过药物诱导
增强连接蛋白的表达，改善胃上皮细胞ＧＪＩＣ功能，
将为临床治疗胃炎的提供新的思路，防治其进一步
发展为胃癌。结果显示头花蓼改善了幽门螺旋杆菌
相关性胃炎细胞间隙连接通讯功能的抑制，能有效
治疗幽门螺杆菌感染的早期胃炎。有文献报道［９］大
·１０２·贵州医药２０１５年３月第３９卷第３期
蒜素可杀灭 Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ，减低 Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ对ＧＪＩＣ功能
的抑制，改善 ＭＧＣ－８０３细胞间隙连接通讯功能。
本实验头花蓼和大蒜素相似，都是通过影响细胞间
隙链接发挥作用，改善细胞间隙连接通讯功能。
本研究采用的划痕标记荧光染料示踪技术是一
种检测各种贴壁细胞间隙连接通讯的方法，其采用
的荧光染料不能透过完整的细胞膜，必须通过划痕
损伤的细胞膜才能进入细胞内，经细胞间隙连接传
递至相邻的细胞使之标记，在荧光显微镜下观察，通
过测定荧光染料扩散的距离，反应细胞 ＧＪＩＣ功能
状况。头花蓼改善了幽门螺旋杆菌相关性胃炎细胞
间隙连接通讯功能的抑制，进一步深入研究和明确
头花蓼、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ与胃上皮细胞间隙连接通讯功能
之间的关系和作用机制，可能为以后对细胞连接的
研究奠定了基础，可能为临床胃炎的治疗提供新的
思路和有效途径。
参考文献
［１］　Ｋｕｉｐｅｒｓ　ＥＪ．Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｉｓｋ　ａｎｄ　ｍａｎ－
ａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｄｉｓｅａｓｅｓ：ｇａｓｔｒｉｔｉｓ，ｕｌｃｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ，
ａｔｒｏｐｈｉｃ　ｇａｓｔｒｉｔｉｓ　ａｎｄ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｌｉｍｅｎｔ　Ｐｈａｒ－
ｍａｃｏｌ　ｔｈｅｒ，１９９７，１１（４）：７１－８８．
［２］　陈玉林．不同类型幽门螺杆菌对 ＧＥＳ－１细胞 Ｃｘ３２、
Ｃｘ４３表达及ＧＪＩＣ功能的影响［Ｄ］．中南大学研究生
院，２０１０．
［３］　Ｔａｏ　Ｒ，Ｈｕ　ＭＦ，Ｌｏｕ　ＪＴ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｈ　Ｐｙｌｏｒｉ　ｉｎ－
ｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｇａｐ－ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎｔｅｒｃｅｌｕｌａｒ　ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．
Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００７，１３（４１）：５４９７－５５００．
［４］　陶然，方平楚，叶少著．幽门螺杆菌感染与胃上皮细胞
间隙连接功能的体外研究［Ｊ］．实用肿瘤杂志，２００５，２０
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（收稿日期：２０１５－０１－０３）
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·２０２· Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１５，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．３