全 文 ：黄珠子草总黄酮含量测定
谢 珊 龙 国 友 导师:杨基森
(贵阳中医学院二附院 贵州贵阳 550003)
关键词:黄珠子草 黄酮
大戟科 Euphobiceae叶下珠属 Phyllanthus植
物在全世界有 600种 ,分布于热带地区 ,我国有
30余种 , 盛产于长江以南各省 。该属植物多有
平肝清热 、利水解毒之功效 ,民间常用于治疗多
种疾病 ,如结肠节性溃疡 、疮疡 、疟疾 、黄疸 、肝
炎和肠炎腹泻等 , 也可作为解毒药和利尿药。
早在两千多年前印度民间就开始使用苦味叶下
珠 (Phyllanthus amurus)治疗黄疸及肝脏疾
病(1)。我国无苦味叶下珠 , 有同属植物叶下珠
(Phyllanthus Urianria L.又名珍珠草)治疗肠
炎 、痢疾 、肝炎 、肾炎等疾病的记载(2)。 贵州民
间用叶下珠 (Phyllanthus Urianria L.又名山皂
角)治疗泌尿系感染 、 肠炎 、结膜炎 、黄疸型肝
炎(3)。
国内外自 40年代就开始对该属植物进行
化学成分及药理研究 , 发现该属植物含有多种
类型的化学成分 ,并有多种生理活性 ,特别是抗
病毒作用(4)。本属植物虽多 ,但至今对其研究的
也只有 8种 , 其中对珠子草研究最为深入全
面 。珠子草(Phyllanthus Urianria L.)化学成分的
研究共分得 11个化合物(5), 其中 2个为首次报
道的新化合物系去氢诃子次酸甲酯 , 短叶苏木
酚酸甲酯。其它化合物分别为正十八烷 ,β -谷
甾醇 、鞣花酸 、胡萝卜甙 、山奈素 、槲皮素 、没食
子 酸和芸 香甙 (6)。 从同属 植物 蜜柑草
(Phyllanthus matsumurae Hayata)的干燥全草中
共分得 10个化合物。其中有 4个黄酮 、6个多酚
类成分(7)。
黄珠子草(Phyllanthus Virgatus Forst.f.)据
报道在体外有较好的抗HBV的作用(8), 但未曾
见有对其化学成分的报道 , 根据文献对该属植
物化学成分报道 , 我们首先对黄珠子草进行了
成分预试 , 并对该植物主要的化学成分和该属
植物有主要药理作用的黄酮类进行了总含量的
测定 。现报道如下:
1 实验材料 、仪器 、试剂
1.1 仪器 、试剂
752紫外光栅分光光度计;分析天平;
对照品芦丁 , 北京药品生物制品检定所提
供。批号:760706其它试剂 、试药 、溶剂均为分
析纯 。
1.2 生药
黄珠子草购于贵阳南明药市 , 由中医学院
鉴定教研组杨锦刚教授鉴定为大戟科 Eupho-
biceae 叶下珠属黄珠子 (Phyllanthus Virgatus
Forst.f.)的干燥全草。
2 实验方法
2.1 黄酮总含量测定
2.1.1 标准曲线绘制
精密称取在 120℃干燥至恒重的芦丁标准
品 19.9mg , 置 100ml容量瓶中 , 精密量取甲醇
10ml使溶解 , 后加蒸馏水至刻度 , 得标准品
液。取芦丁标准品液 0.0 、1.0 、2.0 、3.0、 4.0、
5.0 、5.0ml分别置于 25ml容量瓶中 , 按顺序分
别在容量瓶中加 5%NaNO2 液和 10%AlNO3 液
各 1ml , 摇匀 , 放置 6min , 然后加 4%NaOH液
10ml ,用蒸馏水稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 5min ,以
0.0ml作空白 , 在 510nm处测定吸收度(A), 绘
制标准曲线 ,在 0.199mg/ml～ 0.995mg/ml内成
线性 ,线性回归得直线言程。
W=-7.557 ×10 -3+2.0977A r =
0.9997(n=5)
2.1.2 测定
2.1.2.1 正交试验设计最佳提取方案
第 22卷 第 1期 贵阳中医学院学报 No.1 Vo.22
·60· 2000年 3月 JGCTCM March 2000
DOI :10.16588/j.cnki.issn1002-1108.2000.01.044
因素 、水平见表 1。
表 1 因素 、水平
乙醇浓度(A)提取时间(B) 溶剂量(C) 提取次数(D)
1 60% 1h 8倍 1
2 70% 1h 10倍 2
3 80% 1h 12倍 3
选用 L9(34)表头设计见表 2。
表 2 选用 L9(34)表头设计
试验号 A(1) B(2) C(3) D(4) E样品总黄酮含量mg/ g
1 1 1 1 1 13.2326
2 1 2 2 2 14.4128
3 1 3 3 3 15.5573
4 2 1 2 3 21.4941
5 2 2 3 1 18.7403
6 2 3 1 2 20.1351
7 3 1 3 2 22.8889
8 3 2 1 3 22.7458
9 3 3 2 1 19.7774
Ⅰ 43.2027 57.6156 56.1135 51.7503
Ⅱ 60.3693 55.8989 55.6843 57.2938
Ⅲ 65.4121 55.4698 57.1865 59.7972
Ⅰ 14.4009 19.2052 18.7045 17.2501
Ⅱ 20.1232 18.633 18.5614 19.0979
Ⅲ 21.804 18.4899 19.0622 19.9324
R 7.4031 0.7153 0.5008 2.6823
2.1.2.2 样品含量测定
分别精密称取 70℃干燥至恒重黄珠子草
粗粉(20目)3份 ,每份 5g ,根据正交试验得到的
最佳提取方案 A3B1C3D3 ,即每次用 80%的乙醇
60ml回流提取三次 , 每次一小时 , 合并滤液 ,浓
缩至 50ml(已无醇味), 用石油醚萃取 3次除去
色素 , 每次 20ml , 取水层浓缩成干膏状 ,用甲醇
溶解 , 过滤 , 置 50ml容量瓶中溶解至刻度作样
品供试液 。取样品供试液 1ml , 标准品供试液
5ml(0.206mg/ml), 按标准曲线项下方法测定 ,
测定结果见表 3。
从所验证的结果 3次总黄酮平均含量为
24.02mg/g , RSD值 4.1%。与正交表中结果相吻
合。
表 3 总黄酮含量结果
试验号 样品A值 样品A值样品含量(mg/g)平均值 RSD
1 0.645 0.288 23.0677
2 0.670 0.288 23.9618 24.0214 4.1%
3 0.700 0.288 25.0341
3 讨论
通过对黔产黄珠子草总黄酮 (含量
24.0214mg/g)的测定得出结果表明 , 黔产黄珠
子草总黄酮含量较高。因此黔产黄珠子草很具
深入研究的价值 , 今后我们将继续进行黄酮类
成分单体化合物的分离及抗乙肝病毒的药理试
验。
参考文献
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胞培养中抗 HBV作用的初步研究.广州中医药大学学报
.1997, 14(2):102
(收稿日期:1999年 12月)
第 1期 谢 珊 、龙国友 .黄珠子草总黄酮含量测定 ·61·