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2008年第 6期
10　 　
调查研究
superoxidedismutaseactivityofakaryocyte, significantdifference(P<0.01)werefoundbetweenmiddledosagegroupandthe
control, orbetweenhighdosagegroupandthecontrol.Whilemalondialdehydecontentsofmiddleandhighdosagegroupwere
lower(P<0.05)thanthecontrolinantioxidationfunctiontest.Conclusion:Goatplacentalpreparationshaveefectsofrelievingfa-
tigueandantioxidation.
Keywords:goatplacentalpreparations;relievingfatigue;antioxidation
溪黄草对三黄肉仔鸡免疫功能的影响
张继东 ,何春兰 ,林红英
(广东海洋大学农学院 , 广东湛江　524088)
　　摘　要:　为测定溪黄草对三黄肉仔鸡免疫功能的影响 , 将 1日龄三黄肉仔鸡 210只随机分为 7组 , 每组 3
个重复 , 每个重复 10只。 Ⅰ组饲喂基础日粮 , Ⅱ组添加 0.2%恩诺沙星 , Ⅲ组添加 1%双黄连 , Ⅳ -Ⅶ 组分别在日
粮上添加 0.5%、1%、2%和 4%溪黄草。分别测定免疫器官指数 、新城疫 HI抗体滴度和 T淋巴细胞转化 OD
570
值。结果显示 , 溪黄草以 2%剂量添加时可不同程度地刺激 28日龄前三黄肉仔鸡的免疫器官发育 , 延长 ND-HI
抗体存留时间和抑制 T淋巴细胞增殖 ,其它添加剂量对三黄肉仔鸡免疫功能也产生一定影响。
　　关键词:　溪黄草;免疫功能;三黄肉仔鸡
　　中图分类号:S852.4　　　　 　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2008)06-0010-03
　　溪黄草〔Robdosiaserra(Maxim.)Hara〕系唇形科香茶菜
属植物 ,抗菌谱广 , 已有学者通过体外抑菌试验证明其提取
物对多种试验细菌 , 无论是球菌 、杆菌 , 还是革兰氏阳性菌 、
阴性菌均具有明显的抑制效果 ,但有关溪黄草对三黄肉仔鸡
免疫功能的研究尚未见报道。本试验通过研究不同添加剂
量的溪黄草对三黄肉仔鸡的作用 ,揭示溪黄草对三黄肉仔鸡
免疫功能的影响 ,探讨溪黄草的最适添加量 , 以期为溪黄草
在畜禽饲料添加剂中的应用提供理论依据。
1　材料和方法
1.1　供试药物
溪黄草 , 采自广东省清远市 , 阴干处理 , 粉碎 , 过 20目
筛;恩诺沙星 , 为抗生素对照药物;双黄连 ,为中药对照药物。
1.2　试验动物与试验设计
选择健康 1日龄三黄肉仔鸡(公雏)210只 , 随机分为 7
个处理组 ,每个处理组设 3个重复 ,每个重复 10只。 Ⅰ组为
空白对照 ,饲喂基础日粮;Ⅱ组为抗生素对照 , 在基础日粮上
添加 0.2%恩诺沙星;Ⅲ组为中药对照 , 在基础日粮上添加
1%双黄连;Ⅳ -Ⅶ 组为试验组 , 分别在基础日粮上添加
0.5%、1%、2%和 4%溪黄草。
1.3　试验基础日粮配制
参考 《中华人民共和国农业行业标准 》 (NY/T33 -
2004)黄羽肉鸡饲养标准 , 结合文献报道和实际情况设计了
本试验的日粮配方(见表 1)。
1.4　测定指标及方法
1.4.1　免疫器官指数　分别于 28、 49日龄采血后 , 每个重
收稿日期:2008-06-04
基金项目:广东省科技计划项目(2006B20301017)
作者简介:张继东(1961-),男 , 教授 ,主要从事中兽医学教学与研
究 , E-mail:zjd0305@ 126.com。
表 1　基础日粮组成及营养水平
日粮组成 配比 /%
0-3w 4-7w 营养水平　 0-3w 4-7w
玉米粉 62.04 67.79 代谢能 /MJ· kg-1 11.88 12.20
小麦麸 3.10 1.50 粗蛋白 /% 20.21 18.95
大豆粕 28.00 24.00 钙 /% 0.99 0.88
鱼粉 4.00 4.50 可消化磷 /% 0.46 0.39
磷酸氢钙 1.00 0.61 赖氨酸 /% 1.11 1.03
贝壳粉 1.20 1.19 蛋氨酸 /% 0.47 0.41
蛋氨酸 0.13 0.08 蛋 +胱 /% 0.80 0.72
食盐 0.20 0.00
50%氯化胆碱 0.20 0.20
复合多维 0.03 0.03
微量元素 0.10 0.10
　　注:每千克日粮中微量元素和维生素分别为:Cu8mg, Mn60mg,
Fe80mg, Zn40mg, Se0.15mg, I(KI)0.35mg;维生素 A2 700u,维生
素D400u,维生素E10u,维生素K0.5mg, 维生素 B11.8mg,维生素
B23.6mg,维生素 B63mg,维生素 B120.009mg,生物素 0.15mg,叶
酸 0.55mg,烟酸 27mg,泛酸钙 10mg, 50%氯化胆碱 1 000mg。
复抽取 2只接近平均体重的鸡按常规方法屠宰, 摘取胸腺 、脾
脏 、法氏囊并称重 ,计算胸腺指数 、脾脏指数 、法氏囊指数 [ 1] 。
1.4.2　新城疫(ND)抗体滴度　分别于新城疫病毒人工免
疫后第 7、 14、 21、 28、 35、 42天(记为 D7 、D14、D21、D28、D35、
D42)清晨 , 每个重复随机抽取 2只鸡心脏血取血清。 ND抗
体滴度的测定按照《中华人民共和国国家标准新城疫检疫技
术规范》(GB/T1655021996年)的规定 [ 2] ,采用血凝和血凝
抑制试验方法测定 ,结果以 log
2
X的几何均值表示。
1.4.3　外周血 T淋巴细胞增殖率　分别于试验鸡 35、42、 49
日龄时 ,每组随机抽取 6只 , 无菌采抗凝血后与等量 Hank′s
液混匀 ,小心沿管壁重叠于等体积的淋巴细胞分离液上 , 离
心后吸取中间云雾状白细胞层 ,用 Hank′s液洗涤 2次 ,然后
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调查研究
用台盼蓝拒染法检测淋巴细胞活率 , 取活率在 95%以上的细
胞液 ,配成 1 ×107个 /mL淋巴细胞悬液 , 最后用 MTT比色
法 [ 3 , 4]测定外周血 T淋巴细胞增殖率 。
1.5　数据处理
原始数据经 Excel初步处理后 , 用 SPSS11.5进行单因
素方差分析 , F检验差异显著者则以 LSD法进行多重比较 ,
结果以平均数 ±标准误表示。
2　结果
2.1　溪黄草对三黄肉仔鸡免疫器官指数的影响
结果见表 2。由表 2可知 , 溪黄草对 28日龄前三黄肉仔
鸡的胸腺和法氏囊发育有显著促进作用 , 并以 2%添加量效
果最好 ,优于恩诺沙星和双黄连 , 而对脾脏和 49日龄时胸腺
的发育则影响不大。
2.2　溪黄草对三黄肉仔鸡 ND抗体滴度的影响
结果见表 3。由表 3可知 , 溪黄草能使三黄肉仔鸡 ND
抗体滴度维持在一个较高水平 , 但随着日龄的增长 , 添加过
低剂量(0.5%)和过高剂量(4%)的溪黄草均不利于抗体水
平的维持 ,添加 1% ～ 2%溪黄草比较适宜 。
表 2　溪黄草对三黄肉仔鸡免疫器官指数的影响
组别 28日龄胸腺指数　　 脾指数 法氏囊指数　
49日龄
胸腺指数 脾指数 法氏囊指数
Ⅰ 4.30±0.11c 1.17±0.01 2.29±0.07cB 4.42±0.46 1.44±0.26 2.00±0.19
Ⅱ 5.12±0.29ab 1.32±0.10 2.34±0.11cAB 5.13±0.61 1.69±0.19 2.11±0.25
Ⅲ 5.00±0.43abc 1.18±0.04 2.35±0.03cAB 4.74±0.63 1.51±0.16 2.50±0.37
Ⅳ 4.37±0.04bc 1.19±0.01 2.32±0.11cB 5.08±0.52 1.51±0.08 2.13±0.09
Ⅴ 5.07±0.25abc 1.20±0.01 2.39±0.11bcAB 5.60±0.37 1.69±0.26 2.34±0.21
Ⅵ 5.19±0.35a 1.24±0.02 2.73±0.11aA 5.21±0.87 1.71±0.07 2.73±0.38
Ⅶ 4.45±0.27abc 1.20±0.03 2.66±0.15abAB 4.94±0.58 1.83±0.30 2.36±0.22
　　注:同一列数据右肩标大写字母不同者 ,表示差异极显著(P<0.01);小写字母不同者 ,表示差异显著(P<0.05)。
表 3　溪黄草对三黄肉仔鸡 ND抗体滴度的影响(log
2
x)
免疫后时间 / d 　　D7 　　D14 　　D21 　　D28 　　D35 　　D42Ⅰ 5.00±0.26b 5.83±0.17cB 5.50±0.22bB 5.00±0.26b 4.50±0.22b 3.83±0.31c
Ⅱ 5.17±0.31ab 6.00±0.37bB 6.50±0.22aAB 5.67±0.33ab 4.67±0.212ab 4.33±0.21abc
Ⅲ 5.33±0.21ab 6.33±0.42bAB 6.17±0.17abAB 5.50±0.22ab 5.00±0.26ab 4.33±0.21abc
Ⅳ 5.00±0.37b 6.00±0.37bB 6.17±0.31abAB 5.67±0.21ab 5.00±0.26ab 4.17±0.40abc
Ⅴ 5.67±0.21ab 6.83±0.31abAB 6.50±0.50aAB 6.17±0.40a 5.33±0.42a 4.67±0.21ab
Ⅵ 6.00±0.26a 7.33±0.21aA 6.83±0.31aA 6.00±0.37a 5.17±0.17ab 4.83±0.17a
Ⅶ 5.33±0.49ab 6.83±0.48abAB 6.50±0.34aAB 5.67±0.42ab 4.50±0.22b 4.00±0.26bc
　　注:同一列数据右肩标大写字母不同者 ,表示差异极显著(P<0.01);小写字母不同者 ,表示差异显著(P<0.05)。
2.3　溪黄草对三黄肉仔鸡外周血 T淋巴细胞增殖的影响
结果见表 4。由表 4可知 , 溪黄草在一定程度上抑制了
三黄肉仔鸡外周血 T淋巴细胞增殖 , 且以 2%添加量效果明
显 ,优于双黄连。
表 4　各日龄外周血 T淋巴细胞转化的动态变化(OD570值)
组别 日龄 /d
35 42 49　　
Ⅰ 0.167±0.005a 0.142±0.008a 0.103±0.007aA
Ⅱ 0.137±0.023ab 0.107±0.023ab 0.077±0.007cB
Ⅲ 0.128±0.003b 0.098±0.003ab 0.086±0.005bcAB
Ⅳ 0.150±0.010ab 0.120±0.010ab 0.097±0.006abAB
Ⅴ 0.144±0.012ab 0.114±0.023ab 0.087±0.003abcAB
Ⅵ 0.124±0.010b 0.094±0.011b 0.084±0.004bcAB
Ⅶ 0.146±0.016ab 0.106±0.012ab 0.076±0.006cB
　　注:同一列数据右肩标大写字母不同者 , 表示差异极显著
(P<0.01);小写字母不同者 , 表示差异显著(P<0.05)。
3　讨论
3.1　对免疫器官指数的影响
本试验发现 ,溪黄草不同程度地促进了 28日龄前的三
黄肉仔鸡免疫器官发育 , 但对 49日龄时的器官发育影响不
大 ,这提示了溪黄草通过刺激免疫器官在生长旺盛期迅速发
育 ,延缓其在生长后期过早萎缩 , 使鸡群在生长全期都能保
持较高免疫力 ,保证鸡群健康生长。 49日龄时 , 溪黄草对免
疫器官发育影响不大 ,这可能与机体适应性有关。溪黄草促
进免疫器官发育的功能 ,可能是由于溪黄草含有多种营养成
分和免疫活性物质 ,能够促进正常或免疫机能低下的动物免
疫器官的发育 ,激活免疫器官的免疫功能 , 从而提高机体的
免疫力 ,但其机理有待进一步研究 。
3.2　对 ND抗体滴度的影响
鸡在初次使用 ND疫苗后通常于 6-10 d即可检测到血
清抗体 ,高峰期一般在第 3-4周出现 [ 5] ,本试验测定结果与
其相符。本试验中 , 鸡群免疫后体内 ND滴度的变化符合抗体
消长规律;试验组抗体水平高于空白对照组 ,说明溪黄草对
ND疫苗免疫后抗体的维持有一定的作用 , 尤其以 1% ～ 2%
的剂量添加 ,其维持抗体水平的效果明显优于空白对照组。
这一方面可能是由于血清中 GLO水平与 ND抗体水平呈正
相关 ,溪黄草通过提高血清 GLO水平从而提高肉仔鸡的体液
免疫应答能力;另一方面 , 可能是溪黄草通过刺激三黄肉仔鸡
生长早期阶段法氏囊和脾脏的发育 , 充分发挥法氏囊和脾脏
参与体液免疫反应的能力 , 提高鸡群 ND抗体滴度 ,延长抗体
存留时间 ,从而提高鸡群对特异性疾病的抵抗力 [ 6] 。
3.3　对外周血 T淋巴细胞增殖的影响
本试验中 ,试验组 OD值均较空白对照组有不同程度的
下降 ,说明溪黄草在一定程度上抑制了三黄肉仔鸡外周血 T
淋巴细胞增殖 ,这可能是由于溪黄草通过其有效成分对 T淋
巴细胞生长周期产生影响 , 抑制T淋巴细胞有丝分裂 , 从而
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调查研究 抑制其增殖。张艳等人曾报道三种溪黄草有效单体成分 En-
mein, Nodosin和 Oirdonin对 T淋巴细胞的增殖具有抑制作
用 , 且呈现浓度依赖性和时间依赖性 , 赵爱华等人 [ 7]通过体
外细胞增殖试验证明溪黄草水提液及醇提液的含药血清均
能抑制 T淋巴细胞增殖 ,具有细胞免疫抑制作用 ,推测其可能
是一种潜在的免疫抑制剂。本试验结果与上述报道的结果一
致 ,提示溪黄草也有可能作为一种免疫抑制剂应用于兽医临
床 ,抑制细胞免疫的异常亢进 ,调节免疫系统使之恢复平衡 ,
防止自身免疫性疾病的发生 ,从而促进鸡的正常生长发育。
参考文献:
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EfectsofRabdosiasera(Maxim.)Haraonimmunefunctionofthree-yelowbroilers
ZHANGJi-dong, HEChun-lan, LINHong-ying
(AgriculturalColegeofGuangdongOceanUniversity, ZhanjiangGuangdong524088, China)
Abstract:TostudytheefectsofRabdosiaserra(Maxim.)Haraontheimmunefunctionofthree-yelowbroilers, 210 one-
day-oldthree-yellowchickenswererandomlydividedinto7 groupsandeachgrouphad3duplicates.GroupⅠ wasgivenbasaldi-
et, grouopⅡandⅢ wereadded0.2% enrofloxacinand1% Shuanghuanglianpowdertothebasaldietrespectively.GroupsⅣ to
Ⅶ wereadded1%, 2%and4%Rabdosiaserra(Maxim.)Haratobasaldietrespectively.Someimmunologicparameters, suchas
immuneorganindexes, ND-HIantibodytitersandlymphocytetransformationratesweremeasured.Resultsshowedthat2% Rab-
dosiaserra(Maxim.)Haracouldstimulatethedevelopmentofimmuneorgans, prolongthepersistenceofND-HIantibodyandin-
hibittheproliferationofT-lympholeukocyteinthree-yelowchickenswhichwereyoungerthan28-day-old, otherdosagescould
alsoefecttheimmunefunctionofthree-yellowchickenstosomeextent.
Keywords:Rabdosiaserra(Maxim.)Hara;immunefunction;three-yelowbroilers
DNA指纹技术对近交系小鼠生产扩大群的遗传检测
段天林 1, 3 ,刘　英1 ,范晓梅 2 ,王　芳3
(1.甘肃农业大学动物医学院 , 甘肃兰州　730070;2.兰州肺科医院;3.兰州大学医学实验中心)
　　摘　要:　采用生物素标记的(GGAT)
4
寡核苷酸探针对 C
57
BL/6J、BALB/c和 DBA/2三种近交系生产扩大群 F
4
代小鼠进行了 DNA指纹图分析。结果显示(GGAT)4寡核苷酸探针对上述三种近交系小鼠产生的 DNA指纹图的图带
数均为 10-12条 ,具有良好的多态性,品系内平均 DNA指纹图的相似系数(X)在 0.88-0.95的范围内 ,具有相同指纹
图的概率(P)均在 0.35以上 ,极显著地高于品系间的相似系数(0.18-0.31)和相同指纹图的概率(P﹤ 8.4×10-7)。研
究结果表明(GGAT)4寡核苷酸探针可用于制作近交系小鼠生产扩大群的DNA指纹图,以对其进行遗传检测。
　　关键词:　近交系小鼠;DNA指纹技术;生产扩大群;遗传检测
　　中图分类号:Q95-33　　　　 　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2008)06-0012-04
　　目前 ,常用的实验动物遗传学质量的检测方法存在精确
收稿日期:2008-08-07
项目来源:甘肃省科技厅事业费项目资助
作者简介:段天林(1972-),男 , 在读博士研究生 ,研究方向:实验动
物遗传学 , E-mail:duantl@lzu.edu.cn。通讯作者:刘英 ,
E-mail:Liuy11@gsau.edu.cn
度不高 、检测位点及反映遗传概貌有限等不足。自 1985年
Jefreys等 [ 1]报道了人类基因组高变区小卫星 DNA和 DNA
指纹技术以来 , DNA指纹技术因其高变异性 、多位点性 、简单
而稳定的遗传性等优点已广泛应用于各个领域。笔者等用
非放射性标记人工合成的寡聚核苷酸探针(GGAT)
4
制作了
近交系生产扩大群 F4代小鼠的 DNA指纹图 , 以探讨该探针