全 文 ：［成分分析］
ＲP-HPLC法测定狼毒大戟中 4 种松香烷岩大戟二萜内酯
王灿坚， 江英桥* ， 严小红
(广州市药品检验所，广东 广州 510160)
收稿日期:2013-01-07
基金项目:国家科技支撑计划项目 (2006BAI14B01)
作者简介:王灿坚 (1985—) ，男，硕士，从事中药质量标准研究。Tel:18270999866，E-mail:wangcanjianabc@ 163. com
* 通信作者:江英桥 (1967—) ，男，主任中药师，主要从事中药分析及质量标准研究。E-mail:jiangyq@ gzfda. gov. cn
摘要:目的 建立同时测定狼毒大戟中 4 种松香烷岩大戟二萜内酯的方法。方法 采用 Agilent ZOＲBAX SB C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以水 (A)-乙腈 (B)为流动相梯度洗脱［10% ～ 60% B (0 ～ 30 min) ，60% ～ 85% B
(30 ～ 50 min) ，85% ～100% B (50 ～ 55 min) ，100% B (55 ～ 70 min) ］，体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 240 nm，柱
温 30 ℃。结果 17-acetoxyjolkinolide A、17-hydroxyjolkinolide B、jolkinolide B和 jolkinolide A线性范围分别为0. 034 2 ～
0. 308 2 μg (r = 0. 999 9)、0. 040 8 ～ 0. 367 0 μg (r = 0. 999 9)、0. 049 9 ～ 0. 448 9 μg (r = 0. 999 9)和 0. 022 8 ～ 0. 205 4
μg (r = 1. 000) ，平均回收率分别为 97. 0% (ＲSD为 0. 95%，n = 6)、97. 0% (ＲSD为 1. 54%，n = 6)、96. 8% (ＲSD
为 1. 50%，n = 6)和 97. 2% (ＲSD为 1. 32%，n = 6)。结论 该方法同时测定 4 种有效成分，结果稳定，重复性好。
关键词:狼毒大戟;松香烷岩大戟二萜内酯;高效液相色谱法;定量测定
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)10-2196-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2013. 10. 029
Determination of four ent-abietane jolkinolides diterpene lactones
from Euphorbia fischeriana Steud． by ＲP-HPLC
WANG Can-jian， JIANG Ying-qiao* ， YAN Xiao-hong
(Guangzhou Institute for Drug Control，Guangzhou 510160，China)
ABSTＲACT:AIM To develop an HPLC method for detemining four ent-abietane jolkinolides diterpene lactones
from Euphorbia fischeriana Steud． METHODS The column was an Agilent ZOＲBAX SB-C18 column (4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)． The mobile phase consisted of water (A)and acetonitrile (B)． The HPLC elution condition was
optimized as follows:10% -60% B (0-30 min) ，60% -85% B (30-50 min) ，85% -100% B (50-55 min) ，100%
B (55-75 min)． The flow rate was at 1. 0 mL /min． The detection wavelength was set at 240 nm with the column
temperature of 30 ℃ ． ＲESULTS The linear range was 0. 034 2-0. 308 2 μg (r = 0. 999 9)for 17-acetoxyjolkino-
lide A with the mean recovery of 97. 0% (ＲSD of 0. 95%，n = 6)． The linear range was 0. 040 8-0. 367 0 μg (r =
0. 999 9)for 17-hydroxyjolkinolide B with the mean recovery of 97. 0% (ＲSD of 1. 54%，n = 6)． The linear range
was 0. 049 9-0. 448 9 μg (r = 0. 999 9)for jolkinolide B with the mean recovery of 96. 8% (ＲSD of 1. 50%，n =
6)． The linear range was 0. 022 8-0. 205 4 μg (r = 1. 000)for jolkinolide A with the mean recovery of 97. 2%
(ＲSD of 1. 32%，n = 6)． CONCLUSION The method is accurate，reproducible，and suitable for the determi-
nation of 4 ent-abietane jolkinolide diterpene lactones from Euphorbia fischeriana Steud．
KEY WOＲDS:Euphorbia fischeriana Steud．;jolkinolides;HPLC;assay
狼毒大戟 Euphorbia fischeriana Steud． 为大戟
科大戟属植物，是中药狼毒的原植物之一，主产于
辽宁、吉林、黑龙江、河北等地，具有逐水祛痰，
散结杀虫的功效［1］。狼毒大戟中的松香烷岩大戟
二萜内酯类化合物具有良好的抗肿瘤活性［2-9］，狼
毒大戟水提物在较高剂量下 (360 g /kg)对小鼠有
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致突变作用［10］，并在治疗 T 淋巴细胞性白血病时
产生毒性作用［11］，故对于严格控制狼毒大戟中松
香烷岩大戟二萜内酯的量，保证临床用药安全有着
重要意义。狼毒大戟中 jolkinolide A和 jolkinolide B
的测定方法已有文献报道［12-13］，但同时测定多种
松香烷岩大戟二萜内酯的方法尚未见报道。本实验
建立同时测定狼毒大戟中 4 种松香烷岩大戟二萜内
酯，并对月腺大戟、瑞香狼毒与广东狼毒 (海芋)
中的 4 种成分进行考察。
1 仪器、试剂与药材
Agilent 1200 高效液相色谱仪;日本岛津 LC-
10Avp型高效液相色谱仪 (SPD-M10Avp)。水为超
纯水，乙腈为色谱纯，乙醇为分析纯。17-acetoxy-
jolkinolide A、17-hydroxyjolkinolide B、jolkinolide B
和 jolkinolide A对照品为本实验室自制，其结构经
核磁共振波谱鉴定，纯度经 HPLC 检测均大于
98. 0%。狼毒大戟 E． fischeriana Steud． 的干燥根
由广州市药品检验所侯惠婵和刘伯英主任中药师
鉴定。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 取 17-acetoxyjolkinolide A、
17-hydroxyjolkinolide B、 jolkinolide B 和 jolkinolide
A对照品适量，精密称定，加乙醇制成每 1mL 含
17-acetoxyjolkinolide A 15μg、17-hydroxyjolkinolide
B 20μg、jolkinolide B 25μg和 jolkinolide A 10μg 的
混合溶液，即得。
2. 2 供试品溶液的制备 取药材粉末 (过四号
筛)约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
入乙醇 50 mL，密塞，称定质量，超声处理 (功率
400 W，频率 37 kHz)30 min，取出，放冷，再称
定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，取上清
液，用微孔滤膜过滤 (0. 45 μm) ，取续滤液，
即得。
2. 3 色谱条件与系统适用性试验 Agilent ZOＲB-
AX SB C18色谱柱 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;以
水 (A)-乙腈 (B)为流动相梯度洗脱 ［10% ～
60% B (0 ～ 30 min) ，60% ～85% B (30 ～ 50 min) ，
85% ～ 100% B (50 ～ 55 min) ，100% B (55 ～ 70
min) ］;体积流量 1. 0 mL /min;检测波长 240 nm;
柱温 30 ℃;进样量 10 μL。理论板数按 jolkinolide
B 峰计算应不低于 5 000，分离度大于 1. 5。色谱图
见图 1。
2. 4 线性关系考察 精密称取上述 4 种对照品，
用乙醇配制成标准溶液，17-acetoxyjolkinolide A
1. 17-acetoxyjolkinolide A 2. 17-hydroxyjolkinolide B
3． jolkinolide B 4． jolkinolide A
图 1 HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms
0. 171 2 mg /mL、17-hydroxyjolkinolide B 0. 203 9
mg /mL、jolkinolide B 0. 249 4 mg /mL、jolkinolide A
0. 114 1 mg /mL，分别用乙醇稀释成 6 个系列浓度，
按上述色谱条件，进样 10 μL，以进样量 (Y，
μg)对峰面积 (X)进行线性回归。17-acetoxy-
jolkinolide A线性回归方程为 Y = 4 367X － 30. 221，
相 关 系 数 r = 0. 999 9， 进 样 量 在
0. 034 2 ～ 0. 308 2 μg 范 围 内 线 性 较 好。 17-
hydroxyjolkinolide B 线 性 回 归 方 程 为 Y =
5 993. 2X － 17. 559，相关系数 r = 0. 999 9，进样量
在 0. 040 8 ～ 0. 367 0 μg 范围内线性较好。jolkinol-
ide B线性回归方程为 Y = 4 576. 2X + 0. 363 7，相
关系数 r = 0. 999 9，进样量在 0. 049 9 ～ 0. 448 9μg
范围内线性较好。jolkinolide A线性回归方程为Y =
5 470X － 13. 184，相关系数 r = 1. 000，进样量在
0. 022 8 ～ 0. 205 4 μg 范围内线性较好。
2. 5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液，连
续进样 5 次，测定峰面积，计算 ＲSD 分别为:17-
acetoxyjolkinolide A 0. 96%、17-hydroxyjolkinolide B
0. 45%、 jolkinolide B 0. 63%、 jolkinolide A
1. 15%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取同一样品溶液，分别
在 0、1、2、4、6、12、24 h 进样分析，试验结果
表明样品溶液在 24 h内稳定性良好，ＲSD分别为:
17-acetoxyjolkinolide A 0. 84%、17-hydroxyjolkinol-
ide B 0. 53%、 jolkinolide B 0. 47%、 jolkinolide
A 0. 82%。
2. 7 重复性试验 取同一批样品 (产地:辽宁)
粉末 6 份，分别按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，
进样测得 17-acetoxyjolkinolide A、17-hydroxyjolkino-
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lide B、jolkinolide B 和 jolkinolide A 的含有量分别
为 0. 071%、 0. 102%、 0. 117%、 0. 056%， ＲSD
分别为 2. 18%、1. 24%、1. 19%、3. 07%。
2. 8 加样回收率试验 取已知含有量的狼毒大戟
药材 (辽宁清原英额门采集)粉末 0. 5 g 共 6 份，
精密称定，分别精密加入 17-acetoxyjolkinolide A 对
照品 0. 3 mg、17-hydroxyjolkinolide B 对照品 0. 4
mg、jolkinolide B对照品 0. 5 mg 和 jolkinolide A 对
照品 0. 2 mg，按 2. 2 项下方法制备供试液，进样
测定，计算回收率。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果 (n =6)
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests (n =6)
成 分
取样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
(ＲSD/%)
17-acetoxy- 0. 507 8 0. 383 6 0. 342 3 0. 713 9 96. 89 97. 0%
jolkinolide 0. 501 2 0. 378 6 0. 342 3 0. 711 6 97. 56 (0. 95%)
A 0. 505 6 0. 381 9 0. 342 3 0. 711 7 96. 73
0. 502 8 0. 379 8 0. 342 3 0. 704 9 95. 48
0. 504 7 0. 381 2 0. 342 3 0. 712 9 97. 21
0. 506 1 0. 382 3 0. 342 3 0. 717 8 98. 24
17-hydroxy- 0. 507 8 0. 551 0 0. 407 8 0. 938 7 96. 35 97. 0%
jolkinolide 0. 501 2 0. 543 9 0. 407 8 0. 938 5 97. 58 (1. 54%)
B 0. 505 6 0. 548 6 0. 407 8 0. 932 0 95. 54
0. 502 8 0. 545 6 0. 407 8 0. 930 5 95. 81
0. 504 7 0. 547 7 0. 407 8 0. 953 3 99. 61
0. 506 1 0. 549 2 0. 407 8 0. 942 1 97. 29
jolkinolide 0. 507 8 0. 558 5 0. 498 7 1. 053 0 99. 25 96. 8%
B 0. 501 2 0. 551 2 0. 498 7 1. 035 3 97. 34 (1. 50%)
0. 505 6 0. 556 1 0. 498 7 1. 027 4 95. 08
0. 502 8 0. 553 0 0. 498 7 1. 028 8 95. 87
0. 504 7 0. 555 1 0. 498 7 1. 033 0 96. 25
0. 506 1 0. 556 6 0. 498 7 1. 039 6 97. 17
jolkinolide 0. 507 8 0. 267 3 0. 228 2 0. 485 56 96. 28 97. 2%
A 0. 501 2 0. 263 8 0. 228 2 0. 480 61 95. 67 (1. 32%)
0. 505 6 0. 266 1 0. 228 2 0. 492 35 99. 25
0. 502 8 0. 264 7 0. 228 2 0. 487 61 98. 01
0. 504 7 0. 265 7 0. 228 2 0. 486 57 97. 25
0. 506 1 0. 266 4 0. 228 2 0. 485 85 96. 71
2. 9 样品测定 精密称取 5 批狼毒大戟药材，按
2. 2 项下方法制备供试品溶液，分别测定，计算结
果见表 2。
3 讨论
3. 1 检测波长与流动相的选择 4 种松香烷岩大
戟二萜内酯均在 240 nm 波长下有较强的吸收。考
察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0. 1%冰醋酸和乙腈
－ 0. 2%磷酸作为流动相时对样品中多成分的洗脱
能力，发现乙腈-水系统比较适合于样品中成分的
分离分析。
3. 2 供试品溶液制备条件选择 通过研究发现
jolkinolide B在甲醇溶液中不稳定，长期放置会使
其量降低，故不考虑甲醇作为提取溶剂［14］。供试
品溶液的制备过程中比较了乙醇、丙酮、乙酸乙
酯、三氯甲烷和石油醚 5 种溶剂的提取效果，结果
表明乙醇对 4 种松香烷岩大戟二萜内酯的提取量较
高。考察了超声、回流和索氏提取等方法，结果显
示乙醇超声提取的方法最佳;分别比较了 25、50
和 80 mL乙醇超声提取，发现 50 mL乙醇超声提取
对 4 种松香烷岩大戟二萜内酯成分已提取完全;同
时考察了超声处理 10、20、30、40、50 和 60 min
的提取效果，结果表明超声 30min已将 4 种松香烷
岩大戟二萜内酯成分提取完全。
3. 3 样品测定结果 狼毒大戟中普遍含有 4 种松
香烷岩大戟二萜内酯，而且含有量比较高，这 4 种
成分可以作为狼毒大戟质量控制的主要成分;同时
对月腺大戟 (Euphorbia ebracteolata Hayata)、瑞香
狼毒 (Stellere chamaejasme L．)和海芋 (Alocasis
macrorrhiza (L．)Schott)进行研究，发现月腺大
戟中只含有 jolkinolide B 和 jolkinolide A 这两个成
分，并未发现 17-acetoxyjolkinolide A 和 17-hydroxy-
jolkinolide B，瑞香狼毒和海芋不含有这 4 个成分。
表 2 5 批狼毒大戟药材测定结果
Tab. 2 Determination results of E． fischeriana Steud．
来 源 17-acetoxyjolkinolide A /% 17-hydroxyjolkinolide B /% jolkinolide B /% jolkinolide A /%
辽宁清原英额门采集 0. 071 0. 102 0. 117 0. 056
辽宁新宾铁背岭采集 0. 034 0. 135 0. 097 0. 026
辽阳市弓长岭采集 0. 048 0. 062 0. 085 0. 015
辽宁康辰药业有限公司 (产地:辽宁) 0. 039 0. 082 0. 031 0. 021
辽宁康辰药业有限公司 (产地:辽阳市) 0. 085 0. 093 0. 029 0. 041
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我国甘草酸铵盐原料药质量控制方法的研究探讨
黄 浩1， 程荷珍2， 徐云辉1， 孔德云1， 华茉莉1*
(1． 上海医药工业研究院 创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海 200040;2． 武汉科技大学附属天佑
医院，湖北 武汉 430064)
收稿日期:2012-12-03
基金项目:上海市科委项目 (12401901101)
作者简介:黄 浩 (1986—) ，男，硕士生，研究方向:生药学。E-mail:hh008china@ 163. com
* 通信作者:华茉莉 (1972—) ，女，博士，副研究员，硕士生导师，从事中药新药研究与开发。Tel: (021)62479808-730，E-mail:
huamoli@ sh163. net
摘要:目的 研究探讨甘草酸铵盐原料药的质量控制方法。方法 对市售甘草酸单铵及二铵原料药开展紫外 －可见吸
收光谱、红外吸收光谱、旋光度、有关物质等质量检测，并采用分光光度法、电位滴定法、高效液相色谱法对甘草酸
单铵及二铵原料药的定量测定项进行对比研究。结果 甘草酸单铵及二铵原料药的 UV最大吸收波长、IＲ特征吸收峰
位显示一定差异，旋光度则存在明显差异，HPLC可较好实现对有关物质的检查及对含量的测定。结论 电位滴定实
验表明，甘草酸二铵中的铵基可能只有一个。
关键词:甘草酸单铵;甘草酸二铵;红外吸收;旋光度;电位滴定;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)10-2199-06
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2013. 10. 030
Quality control of ammonium glycyrrhinate
HUANG Hao1， CHENG He-zhen2， XU Yun-hui1， KONG De-yun1， HUA Mo-li1*
(1． State Key Laboratory of New Drug ＆ Pharmaceutical Process，Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry，Shanghai 200040;2． Tianyou Hospital
Affiliated to Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430064，China)
ABSTＲACT:AIM To study the methods for controlling the quality of ammonium glycyrrhinate． METHODS
A series of tests including UV，IＲ，specific optical rotation，related substances and assay with spectrophotometry．
HPLC and potentionmetric titration were carried out to examine monoammonium and diammonium glycyrrhinate．
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