全 文 ：收稿日期:2013-11-06
基金项目:十一五科技支撑项目(2009BAI74B01-4)作者简介:卿　娟(1987-),女 ,在读硕士研究生 ,从事中药与民族
药质量控制与新药研究。通讯作者:张丽艳 ,教授 ,硕士生导师。
头花蓼药材薄层色谱指纹图谱研究
卿　娟1 ,张丽艳1 ,潘文婷1 ,谢　宇2
(1.贵阳中医学院 ,贵阳　550002;2.贵州威门药业股份有限公司 ,贵阳　550018)
摘要:目的:建立头花蓼药材薄层色谱指纹图谱。方法:采用聚酰胺薄层色谱法 , 以正己烷—乙酸乙酯—丁酮
-甲酸(7∶6.5∶2.5∶3)为展开剂 , 温度 20℃,点样量 4μl , 2%AlCl3 为显色剂 ,于 320 nm 下进行紫外检视扫描。
结果:得到 5 个共有峰 ,其伪品与药材不存在共有特征。结论:采用薄层色谱指纹图谱可快速有效地鉴别头花
蓼药材 , 为头花蓼药材质量控制提供参考。
关键词:头花蓼;薄层色谱指纹图谱;聚酰胺薄层色谱法
中图分类号:O657.7　文献标识码:B　文章编号:1005-5320(2014)02-0062-02
　　头花蓼来源于蓼科头花蓼 Polygonum capitatum Buch.
-Ham.ex D.Don 的干燥全草或地上部分 , 为贵州苗族地区
常用药 ,具有抗感染 、解热 、镇痛等药理活性 , 主要用于痈肿
疮疡 、跌打损伤疼痛及泌尿系统方面的疾病[ 1 , 2] 。研究发现
头花蓼的主要化学成分为黄酮类 ,酚酸类化合物[ 3 ～ 5] , 其中
没食子酸 、槲皮素 、槲皮苷等成分具有一定的抗氧化作用[ 6] 。
现行的质量标准均较为简单 ,常用的显微鉴别 、理化鉴别 、含
量测定等方法很难全面准确地反映头花蓼实际质量状况及
“道地” 性 , 也达不到真正控制头花蓼药材内在品质的目
的[ 7] 。本实验以槲皮苷为对照品 , 建立头花蓼药材的薄层指
纹图谱 ,实验设备便宜 , 方法简便易行 , 用于产地 、真伪鉴别
及品质控制[ 8] , 具有广阔的应用前景。
1　仪器与试药
LINOMAT V 半自动点样仪(瑞士卡玛公司);CAMAG
Reprostar3薄层色谱成像系统(瑞士卡玛公司) ;CS -
9301PC 双波长飞点薄层色谱扫描仪(日本岛津公司);薄层
板:聚酰胺薄层板(青岛海洋化工厂);双槽展开箱;Chro-
mafinger 2005 色谱指纹图谱解决方案软件(珠海科曼中药研
究有限公司)。
槲皮苷对照品(批号:111538-200403)由中国药品生物
制品检定所提供 , 供含量测定用。 实验所用试剂均为分析
纯 ,水为蒸馏水。
12 批头花蓼药材采自贵州施秉头花蓼规范化种植研究
与GAP试验示范基地 , 其他头花蓼药材为各地野生。 经贵
阳中医学院魏升华副教授鉴定为蓼科植物头花蓼 Polygon-
um capitat um Buch.-Ham.ex D.Don 的干燥全草或地上部
分;伪品赤胫散为蓼科植物赤胫散 Polygonum runcinatum
Buch.-Ham.var.sinense Hemsl.的干燥全草或地上部分。
样品来源详见表 1。
表 1　样品来源
编号 来源 编号 来源
1 贵州施秉 2 贵州施秉
3 贵州施秉 4 贵州施秉
5 贵州施秉 6 贵州施秉
7 贵州施秉 8 贵州施秉
9 贵州施秉 10 贵州施秉
11 贵州施秉 12 贵州施秉
13 贵州兴义 14 贵州晴隆
15 贵州盘县 16 贵州毕节
17 贵州水城 18 贵州罗甸
19 贵州凯里 20 云南师宗
21 广西田林 22 重庆南川
23 湖南古丈 24 赤胫散(伪品)
2　方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的槲皮苷对照品适量 , 用甲醇制成
浓度为 0.1005 mg/ ml的对照品溶液。
2.2　供试品溶液的制备
精密称取头花蓼药材粉末(过 80 目筛)2 g , 置 100 ml锥
形瓶中 , 精密加入水25 ml , 称定重量 ,超声处理(功率250W ,
频率 33kHz)30 min , 放冷 , 再称定重量 , 用水补足减失的重
量 , 摇匀 ,滤过 , 滤液用乙酸乙酯萃取 3 次 , 每次 25 ml , 合并
乙酸乙酯液 , 蒸干 , 残渣加 5 ml乙酸乙酯使溶解 ,作为头花
蓼药材供试品溶液。
2.3　薄层色谱条件
点样:精密吸取上述各样品供试品溶液 、对照品溶液各
4 μl , 用半自动点样仪成点状点于距聚酰胺薄层板底边 10
mm 处。展开系统:正己烷—乙酸乙酯—丁酮—甲酸(7∶6.5
∶2.5∶3)。控制室内温度 20℃。预平衡 15 min 后 ,上行展开
8 cm ,取出薄层板 ,晾干 , 再用展开剂正己烷—乙酸乙酯—丁
酮—甲酸(7∶6.5∶2.5∶3)二次展开 , 取出晾干。检测条件:喷
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　第 31 卷Vo l.31 　　第 2 期No.2 　 　　　　　　　 微 量 元 素 与 健 康 研 究S tudies of T race Elements and Health　 　　　　　　　　　2014 年　03 月Mar.　2014
以AlCl3试液显色 , 挥尽薄层板上的残留溶剂后置紫外光灯
(320 nm)下检视荧光薄层色谱。
2.4　实验条件的考察
2.4.1　提取方法的考察
取 6份样品 ,分别以 ①乙酸乙酯 , ② 乙醇 , ③甲醇 , ④
丙酮 , ⑤正丁醇超声提取 , 浓缩;⑥水超声提取 , 过滤 , 滤液
加乙酸乙酯萃取 ,分取乙酸乙酯层 , 浓缩 , 蒸干 ,残渣用乙酸
乙酯溶解。依2.3 项操作点于同一硅胶 G 薄层板上 ,在不同
展开系统中展开 ,结果表明:不同提取方法对头花蓼药材的
薄层色谱影响较大 , 其中以方法⑥效果最好 , 斑点容量大。
故确定以水为提取溶剂 ,乙酸乙酯萃取作为提取条件。
2.4.2　展开系统的考察
实验中考察了多种展开系统:正己烷—乙酸乙酯—丁酮
—甲酸(7∶6.5∶2.5∶3), 甲苯—乙酸乙酯—甲酸(10∶11∶3.
1),乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1), 水—95%乙醇—
甲酸—乙酰丙酮(9∶2∶2∶1),甲苯—甲醇 —丁酮—甲酸(7∶1∶
1.5∶0.5), 乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(6∶6∶1∶1),乙酸乙酯
—甲酸—水(8∶1∶1)等 , 结果以正己烷—乙酸乙酯—丁酮—
甲酸(7∶6.5∶2.5∶3)分离 ,展开两次效果最好。
2.4.3　相对湿度及温度对薄层色谱分离效果的影响
考察了 10℃、20℃、30℃下薄层色谱展开情况 , 结果表
明不同温度对薄层色谱的分离效果影响明显 , 在 20℃下能
获得较好的分离度 , 故控制温度在 20℃。湿度对聚酰胺薄
层色谱的影响不明显 , 比较相对湿度在 32%和 88%时的薄
层色谱图 ,均能得到清晰的荧光斑点。因此 , 建议不用对环
境湿度进行控制。
2.4.4　显色剂的选择
比较了 2%AlCl3 、1%三氯化铁 、2%AlCl3 乙醇溶液的喷
雾显色效果 ,用 1%三氯化铁溶液显色不出现荧光斑点 , 2%
AlCl3和 2%AlCl3 乙醇溶液的显色效果相当 , 得到的斑点荧
光颜色明显 ,斑点数清晰 , 最终选取 2%AlCl3作为显色剂。
3　头花蓼药材薄层指纹图谱的建立
按照上述实验条件 , 获得对照品及样品的薄层色谱 , 在
320 nm 下紫外吸收扫描 ,并将扫描图导入 Chromafinger2005
色谱指纹图谱解决方案软件 , 生成灰度扫描图并积分。取
Rf在 0.1～ 0.8 的色谱峰进行分析 , 对比 12 批施秉头花蓼
规范化种植研究与 GAP 试验示范基地样品及 11 批不同产
地野生头花蓼的薄层图谱 , 共得到 5 个特征峰 ,按照 Rf值由
小到大的顺序对特征峰进行编号 , 根据槲皮苷对照品的 Rf
值 ,确定 4号峰为槲皮苷。同一产地不同批次的头花蓼及不
同产地的头花蓼药材的质量差异 , 可以从各特征峰的峰高上
得到反映 ,峰高越高 ,在薄层色谱图上则表现荧光斑点颜色
越深。贵州施秉产的头花蓼药材之间以及不同产地野生头
花蓼之间各特征峰峰高及荧光斑点颜色之间均存在差异 , 与
实验前期研究化学成分含量测定的结果存在差异相一致。
头花蓼的伪品赤胫散在该实验条件下无以上指纹特征 ,可快
速的辨别头花蓼药材的真伪。
4　讨　论
本实验对 12 批同一产地 CAP 种植头花蓼和 11 批不同
产地野生头花蓼药材进行了薄层色谱指纹图谱研究 ,通过荧
光斑点色谱图 , 可快速 、直观地与伪品进行区分。对进一步
扫描轮廓图的研究发现 , 同一产地的药材相似性明显优于不
同来源药材的相似性 , 这为头花蓼药材的 GAP 种植质量监
控提供了依据。将头花蓼药材的薄层色谱指纹图谱运用于
药材的收集采购及质量监控 , 成本低廉 ,便于推广 ,具有良好
的实用价值及参考意义。
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