全 文 ：第 24卷第 10期
2007年 10月
精 细 化 工
FINE CHEM ICALS
Vo.l 24, No. 10
O c.t 2 0 0 7
中药现代化技术
超声波辅助提取狼毒大戟中二萜类物质 Jolk inolide B*
简　丽 ,贾慧凯 ,庞丽纹 ,丁立军 ,张前程
(内蒙古工业大学 化工学院 , 内蒙古 呼和浩特　010051)
摘要:以 w(C2H5OH)=95%的乙醇为提取剂 , HPLC法测定的 Jo lkino lide B提取率为指标 ,考察了利用超声波辅
助技术提取狼毒大戟中二萜类物质的适宜提取条件。测定出狼毒大戟中 w( Jolkino lide B)=0. 0216%。 考察了
提取时间 、提取温度 、料液质量比等因素对 Jolkino lide B提取率的影响。室温下 , 提取时间从 10 m in到 60 m in,
Jo lkino lide B的提取率由 0.014%提高至 0.0149%;温度从室温到 85 ℃, 提取率从 0.014%提高到 0. 020 5%;超
声波辅助提取 10 m in,提取率与浸泡提取 200 h的提取率相当;超声波辅助提取中适宜的 m(狼毒大戟)∶m(提取
剂)=1∶8。该文报告工作的新颖性已为内蒙古自治区科学技术信息技术研究所 2007年 3月 12日出具的第
20071500100031号《科技查新报告》所证实。
关键词:狼毒大戟;超声辅助提取;二萜;Jo lk inolide B;中药现代化技术
中图分类号:S567. 3　　文献标识码:A　　文章编号:1003 - 5214(2007)10 -0972 - 03
U ltrasound-assisted Extraction ofD iterpenoids Jolk inolide B from
Euphorb ia Fischeriana Steud
JIAN Li, JIA Hu i-kai, PANG Li-wen, DING Li-jun , ZHANG Q ian-cheng
(S chool of Chem ica lEngineering , InnerMongolia University of Technology, Huhhot 010051, NeiMonggol, China)
Abstrac t:The process of u ltrasonic-assisted extrac tion o f diterpenoids from Euphorbia fischeriana S teud
w as studied. E thanol 〔w(C2H5OH) =95%〕 was used as ex tractan.t The amount of Jolkino lide B in
Euphorbia fischeriana S teud de term ined by HPLC was w (Jo lkino lide B) =0.0216%. W hen the
ex traction time changed from 10m in to 60 m in, the ex traction rate of Jo lkino lide B a t room temperature
increased from 0.014% to 0.0149%. W hen the extrac tion tempe ratu re changed from room temperature
to 85℃, the ex traction rate increased from 0.014% to 0.020 5%. The ultrasonic-assistedme thod fo r
ex tracting Jo lkino lide B shortened the ex traction time from 200 h to 10 m in. Appropriate ex traction
stock ra tio w asm(Euphorbia fischeriana S teud)∶m (ex tractant)=1∶8.
Key words:Euphorbia fischeriana Steud;u ltrasound-assisted extraction;diterpenoid;Jolkino lide B;
modernization technology of trad itional Chinese medic ines
Foundation item s:G ranted by the found of the Education Bureau of Inne r M ongo lia Autonomous
Reg ion (N J03015) and the natura l science found of Inner M ongo lia Au tonomous Reg ion
(200208020205)
　　二萜内酯是狼毒大戟中的重要生物活性成
分 [ 1 ～ 3] ,其中的 Jo lkino lide B 具有明显的抗癌活
性 [ 4, 5] 。寻找天然抗病药物是现代药物研究的一个
重要途径 ,但能否制得和应用 ,关键还应在提取和分
离技术上做工作 。
目前狼毒大戟中二萜类活性成分的提取主要采
用的是溶剂浸提 [ 6] ,存在耗时长 、效率低等问题。
超声波辅助提取法具有高效 、快速 ,节省时间 、溶剂
和能源等优点 ,采用超声波辅助技术提取狼毒大戟
中二萜类活性成分的研究鲜见报道 ,王玉珍和赵奎
* 收稿日期:2007 - 01 - 23;定用日期:2007 - 05 -11
基金项目:内蒙古教育厅项目(N J03015);内蒙古自然科学基金项目(200208020205)
作者简介:简　丽(1958 -),女 ,教授 ,硕士生导师, 主要从事无机材料和光催化的研究 ,电话:0471 - 6575722, E - mai l:jzh ang@ im u.t
edu. cn。
DOI牶牨牥牣牨牫牭牭牥牤j牣jxhg牣牪牥牥牱牣牨牥牣牥牥牳
君 [ 7, 8]在对狼毒大戟及制剂中的 Jo lk ino lide B成分
分析时对测试样品采用了超声振荡 ,但对提取过程
中的影响因素未做进一步研究 。
本文针对内蒙古扎鲁特旗的狼毒大戟 ,较详细
地研究了超声波辅助提取二萜类活性成分的提取方
式 、温度 、时间及料液质量比对 Jo lk inolide B提取率
的影响 ,为进一步开发狼毒大戟的药用功能做了一
些基础工作 。本文报告工作的新颖性已为内蒙古自
治区科学技术信息技术研究所 2007年 3月 12日出
具的第 20071500100031号《科技查新报告》所证实 。
1　实验部分
1.1　仪器和材料
KQ - 300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司 );SHZ -Ⅲ型循环水真空泵(上海亚
荣生化仪器厂);RE - 52A型旋转蒸发仪 (上海亚荣
生化仪器厂 )。
LC - 10A高效液相色谱 (日本岛津公司), shim-
packV p-ODS色谱柱(150mm ×4.6 mm),流动相为
V(甲醇 )∶V(水 )∶V(乙酸 ) =80∶20∶1 ,流量 1 mL /
m in,柱温 30 ℃,紫外检测器检测波长 56 nm。
狼毒大戟购自内蒙古通辽市扎鲁特旗医药支公
司 ,经鉴定为狼毒大戟的干燥根 。
Jolkino lide B标准品为本实验室制备 ,经核磁共
振鉴定 , HPLC测定其相对质量分数在 95%以上 。
1.2　Jolk inolide B的提取
狼毒大戟粉碎过 60目筛后置于锥形瓶中 ,按一
定的料液质量比加入 w(C2H5OH)=95%的乙醇作
为提取剂 ,在不同温度和时间进行超声辅助提取 。
提取液经过滤 、洗涤及定容后用 HPLC法测定其中
Jolkino lide B的含量[ 7] 。
1.3　标准曲线的绘制
用减量法称取0.001 2 g标准品 ,用氯仿溶解后
转移到 50mL容量瓶中 ,再用氯仿定容后配成质量
浓度为 0.024 g /L的 Jo lk inolide B标准溶液 。按进
样量 1、 2、3、4、 5、6、7、 8 μL进行 HPLC分析。以
Jolkino lide B峰面积为纵坐标 (Y ), Jolkino lide B质
量为横坐标 (X )绘制标准曲线(图 1)。标准曲线的
回归方程为 Y =1598855X -14395,相关系数 R2 =1。
1.4　提取率的测定
称取一定量的狼毒大戟 ,粉碎后超声辅助提取
多次 ,每次 10 m in,提取液经抽滤 、定容 , HPLC测定
Jolkino lide B 的质量。提取次数以提取液中无
Jolkino lide B被检出为限 。将各次的提取液合并 ,得
到狼毒大戟中 Jolkino lide B总质量 。 Jo lk inolide B
提取率按下式计算:
提取率 /%=(提取液中 Jo lkino lide B的质量 /
狼毒大戟的质量 )×100
图 1　 Jo lkino lide B的标准曲线
F ig. 1　S tanda rd curve of Jo lkino lide B
2　结果与讨论
2.1　Jolk inolide B总质量的测定
取 m (狼毒大戟 )∶m (提取剂) =1∶8,水浴温度
分别控制在室温(15 ℃)和 85 ℃,对 20 g狼毒大戟
粉末多次超声提取的结果见表 1。
表 1　 Jo lk ino lide B的总含量测定结果
Tab le 1　To ta l amoun t of Jo lkino lide B
提取次数 室温提取量 /m g 85℃提取量 /m g
1 2. 80 4. 09
2 0. 38 0. 24
3 0. 34 0
4 0. 30 -
5 0. 26 -
6 0. 24 -
7 0 -
提取量合计 /m g 4.32 4. 33
表 1表明 ,室温 (15 ℃)提取 6次 、85 ℃提取 2
次后 ,提取液中已检测不到 Jo lk inolide B ,因此 , 20 g
狼毒大戟中 Jo lkino lide B总质量平均为 4.325 mg,
相当于狼毒大戟中 w (Jolkino lide B) =0.021 6%。
85 ℃下 Jo lkino lide B的一次提取率为 0.020 5%,提
取量占狼毒大戟中 Jo lkino lide B总质量的 94.6%,
而室温下的一次提取率为 0.014 0%,只占总质量的
64.7%。
2.2　提取方式对 Jolk inolide B提取率的影响
称取 3份狼毒大戟各 20 g,粉碎后按 m (狼毒大
戟)∶m (提取剂)=1∶16分 3种方式提取:室温浸泡
200 h;室温浸泡 200 h后超声振荡 10m in;不经浸泡
直接室温超声振荡 10 m in。各提取液分别经抽滤 、
洗涤及定容后 , HPLC测定其中 Jo lk inolide B的质
量 ,结果见表 2。 3种提取方式 Jo lkino lide B的提取
率相差不多 ,但狼毒大戟不经预浸泡而直接超声辅
助提取 ,在保证提取率的前提下极大地缩短了提取
时间 。同时说明超声辅助提取 10 m in已可以将狼
毒大戟中绝大部分的细胞破碎。先用溶剂预浸泡将
973 第 10期 简　丽 ,等:超声波辅助提取狼毒大戟中二萜类物质 Jo lkino lide B
细胞溶胀后再进行超声振荡 ,对提高提取率的促进
作用不大。故本实验中狼毒大戟在超声辅助提取时
不预先浸泡 。
表 2　提取方式对 Jo lkino lide B提取率的影响
Table 2　 Effect o f ex traction m e thod on the extrac tion ra te o f
Jo lkino lide B
提取方式 提取液中
Jo lkinolide B质量 /mg 提取率 /%
室温浸泡 200 h 3. 19 0. 01595
室温浸泡 200 h,超声提取 10 m in 3. 24 0. 01620
不浸泡室温超声提取 10 m in 3. 13 0. 01565
2.3　料液质量比对 Jolk inolide B提取率的影响
称取 3份狼毒大戟各 20 g,按不同料液质量比
室温超声辅助提取 10m in ,提取液经抽滤 、洗涤及定
容后 , HPLC测定 Jo lk inolide B的质量 ,结果见表 3。
表 3　料液质量比对 Jo lkinolide B提取率的影响
Table 3　E ffec t o f stock ratio on the ex traction ra te of Jo lk ino lide
B
m(狼毒大戟)∶m(提取剂)
1∶4 1∶8 1∶16
提取液中 Jolk inolide B的质量 /m g 2. 67 2. 80 3. 13
提取率 /% 0.01335 0.0140 0. 01565
随着料液质量比的增大 ,提取率也略有增大 ,但
得到的提取液体积却增大很多。料液质量比越大 ,
后处理时需要蒸发的溶剂量就越大 ,能耗增加 ,耗时
延长;料液质量比太小 ,浸润程度差。综合考虑 ,适
宜的 m (狼毒大戟 )∶m (提取剂 )=1∶8。
2.4　提取温度对 Jolk inolide B提取率的影响
称取 4份狼毒大戟各 20 g,粉碎后按 m(狼毒大
戟 )∶m(提取剂 )=1∶8分别在不同温度超声辅助提
取 10 m in。各提取液分别经抽滤 、洗涤及定容后 ,
HPLC测定 Jo lkino lide B的质量计算提取率 ,结果见
表 4。
表 4　提取温度对 Jo lkino lide B提取率的影响
Table 4　E ffec t of ex trac tion tem peratu re on the extrac tion rate
of Jo lkino lide B
温度 /℃
15 35 55 85
提取率 /% 0.0140 0. 0153 0. 0168 0. 0205
Jolkino lide B提取率随提取温度的升高而增大 。
温度由室温升至 85 ℃,提取率由 0.014 0%提高至
0.020 5%。温度提高 ,溶剂损失量大 ,还需要回流 。
实验中的最高提取温度不超过 85 ℃。
2.5　提取时间对提取率的影响
称取 5份狼毒大戟各 20 g,粉碎后按 m (狼毒大
戟)∶m (提取剂)=1∶8分别在室温下超声辅助提取
5、10、20、40、60m in。各提取液分别经抽滤 、洗涤及
定容后 , HPLC测定 Jolkino lide B的质量计算提取
率 ,结果见表 5。
表 5　超声提取时间对 Jo lkino lide B提取率的影响
Tab le 5　 E ffect o f ex traction tim e on the ex traction rate of
Jo lkino lide B
时间 /m in
5 10 20 40 60
提取率 /% 0. 01181 0. 0140 0. 01408 0. 01449 0. 01490
室温下超声提取 10m in, Jolkino lide B的提取率
为0.014 0%,提取 60 m in的提取率为 0.014 9%,说
明延长提取时间对提高提取率的促进作用不显著。
实验中的提取时间定为 10 m in。
3　结论
超声辅助对提取狼毒大戟中的 Jo lk inolide B有
明显的促进效果 ,超声辅助 10 m in得到的提取率与
浸泡提取 200 h相当 。延长提取时间对提高提取率
的作用不显著 。
提取温度对提取率的影响较大 ,当 m (狼毒大
戟)∶m (提取剂)=1∶8、提取时间 10 m in时 ,温度由
室温升至 85℃, Jo lk inolide B的提取率由 0.014 0%
提高至0.020 5%。
以 w(C2H3OH)=95%的乙醇为提取剂 ,超声辅
助提取狼毒大戟中 Jo lkino lide B的适宜提取条件
为:狼毒大戟不经预浸泡 , m (狼毒大戟 )∶m (提取
剂)=1∶8,提取温度 85℃,提取时间 10m in。
参考文献:
[ 1] 　刘文粢 ,何风雷 ,阮子镛 ,等.狼毒大戟二萜内酯对人癌细胞体
外抑制作用的研究 [ J] .中药材 , 2000, 23(10):623 - 624.
[ 2] 　刘桂芳.狼毒大戟抗癌活性成分二萜内酯的分离鉴定 [ J] .中
药通报 , 1988, (5):35 - 363.
[ 3] 　师彦平 ,贾忠建. 我国大戟二萜酯及其生理活性研究新进展
[ J] .高等化学学报 , 1997, 18(7):1107 - 1112.
[ 4] 　LiuW K, H o J C K , Q inG , et a l. Jolk inolide B induces
neu roendocrine d ifferen tiat ion ofhum an p rostate LNC aP can cer ce ll
line [ J] . B ioch em Ph arm acol, 2002, 63:951 - 957.
[ 5] 　M a Q -G , LiuW -Z ,W u X -Y , et al. Diterpenoid s from
Euphorbia fischeriana [ J] . Phytochem , 1997, 44(4):663 - 666.
[ 6] 　简　丽 ,丁立军 ,庞丽纹 ,等.狼毒大戟水提取物中化学成分的
分离与鉴定 [ J] .精细化工 , 2005, 22(9):675 - 678.
[ 7] 　王玉珍 ,郭艳玲.狼毒大戟及其制剂中 Jo lkinolide B的高效液
相色谱法测定 [ J] .中草药 , 1991, 22(11):494 - 495.
[ 8] 　赵奎君 ,徐国钧 ,金蓉鸾 ,等.狼毒类生药 Jolk ino lide B的 HPLC
分析 [ J] .中国药科大学学报 , 1994, 25(6):332 - 334.
974 精 细 化 工　FINE CHEM ICALS　　　　　　　　　　　　　　第 24卷