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朱唇的抑菌作用研究



全 文 :广 东 化 工 2016年 第 8期
· 24 · www.gdchem.com 第 43卷总第 322期

朱唇的抑菌作用研究
罗泽萍 1,2,潘立卫 1,2*
(1.河池学院 化学与生物工程学院,广西 宜州 546300;2.广西高校微生物及植物资源开发利用重点实验室,广西 宜州 546300)

[摘 要]目的:研究朱唇的体外抑菌作用。方法:用牛津杯法和二倍稀释法考察朱唇对供试菌的抑菌作用。结果:朱唇提取物对金黄色葡萄
球菌、伤寒沙门菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球菌有不同程度的抑制作用。其中,对伤寒沙门菌的抑菌作用最强;乙
酸乙酯部位抑菌作用最好。结论:朱唇提取物中存在丰富的抑菌活性物质,为寻找新抑菌药物提供物质基础。
[关键词]朱唇;抑菌作用
[中图分类号]R285.5 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2016)08-0024-02

Studies on the Bacteriostatic Action of Salvia Coccinea L.

Luo Zeping1,2, Pan Liwei1,2,*
(1. College of Chemical and Biological Engineering Hechi University, Yizhou 546300;2. Guangxi Colleges Universities Key Laboratory of
Exploitation and Utilization of Microbial and Botanical Resources, Yizhou 546300, China)

Abstract: Objective: To study the bacteriostatic action of Salvia coccinea L. Methods: The bacteriostatic action of Salvia coccinea L. on test organisms were
studied by the oxford cup method and tube double dilution method. Results: The extracts of Salvia coccinea L. had different degree of bacteriostatic action on
staphylococcus aureus, typhoid salmonella, candida albicans, pseudomonas aeruginosa, staphylococcus epidermis and s. pyogenes. Conclusion: Diverse antibacterial
natural products exist in Salvia coccinea L. extracts, which provide a basis for developing new antibacterial drug.
Keywords: salvia coccinea L;bacteriostatic action

朱唇(Salvia coccinea L.)是唇形科鼠尾草属植物,原产于美洲
的一年生或多年生草本植物,该品种通常作为观赏植物,在我国
多地有栽培,如:广东、广西、陕西、浙江、上海、江西、安徽、
等。朱唇全草均有药用价值,具有凉血、止血,清热利湿等功效,
可以用于治疗妇女血崩,高热及腹疼不适[1]等。现代药理研究表
明朱唇水溶性部位可明显提高小鼠耐缺氧能力[2]。目前国内外对
朱唇的研究主要集中在植物资源、组织培养和园林景观等[3-6];而
对其生物活性的研究甚少。基于朱唇有着良好的民间药用基础,
笔者未发现朱唇抑菌作用的相关文献报道。而同是唇形科的许多
植物具有抑菌作用,如薄荷、紫苏、夏枯草、迷迭香及藿香等[7-11]。
因此,本文对朱唇水提物、醇提物的抑菌作用进行初步研究,并
筛选出最佳抑菌作用部位。
1 材料
1.1 药材与供试菌
朱唇采于广西都安县保安村,经河池学院化学与生物工程学
院邓晰朝副教授鉴定为唇形科朱唇(Salvia coccinea L.)。
肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌均购于
上海瑞楚生物科技有限公司;白色念珠菌、绿脓杆菌、表皮葡萄
球菌、化脓性链球菌均购于温州市康泰生物技术有限公司。
1.2 仪器与试剂
LDZX-50 FAS立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂);
SW-CJ-1F超净工作台(苏静集团苏州安泰空气技术有限公司);D 2
KW-4电子恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司);JA 2003 B
电子天平(上海越平科技仪器有限公司);PX-150生化培养箱(上海
跃进医疗器械有限公司);TDL-5 A离心机(上海安宁科学仪器厂);
琼脂粉(天津市致远化学试剂有限公司);蛋白胨(北京奥博星生物
技术有限责任公司);牛肉膏(北京奥博星生物技术有限责任公司);
其他试剂均为国产分析纯。
2 方法
2.1 朱唇提取物及各部位的制备
朱唇粗粉用蒸馏水煎煮 3次,每次 1.5 h,合并滤液,浓缩成
浸膏即为水提物。朱唇粗粉用 75 %乙醇回流提取 3次,每次 1.5 h,
合并滤液,回收溶剂,干燥,即得醇提物。醇提物用蒸馏水充分
溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,各萃取液及水相
回收溶剂,干燥,即得不同极性部位浸膏。各浸膏均配成质量浓
度为 1.00 g/mL溶液,作为供试液,备用。
2.2 培养基的制备[12]
牛肉膏蛋白胨培养基配方:牛肉膏 5 g、琼脂条 25 g、蛋白胨
10 g、氯化钠 10 g、蒸馏水 1000 mL,pH值 7.5;沙保罗式培养
基配方:麦芽糖 40 g、蛋白胨 10 g、琼脂 20 g,蒸馏水 1000 mL。
培养基 121 ℃高温灭菌 30 min后,即得固体培养基(液体培养基
不加琼脂条),细菌用牛肉膏蛋白胨培养基培养,真菌用沙保罗式
培养基。
2.3 菌悬液和含菌培养基的制备[13]
将 8 种供试菌分别划线培养于平板培养基中,在 37 ℃培养
箱中培养 24 h,再转接于斜面培养基中培养 24 h,用 2 mL无菌
水分别洗脱,即得上述 8种细菌的悬菌液。配置固体培养基后,
当培养基冷却到 40 ℃左右,按照无菌操作规程,分别吸取上述 8
种供试悬菌液,按照含菌液 1 %的配比,将悬菌液加入培养基中
摇匀,倒于培养皿中,待冷却凝固,即得含菌平板。
2.4 牛津杯法测定抑菌活性[14]
将灭菌后的牛津杯用镊子夹起来,在酒精灯上迅速过一下后
放到含菌平板上,用移液枪往牛津杯中加入 0.1 mL的药液,再将
平板放置于 37 ℃培养箱中培养 24 h后观察并测量抑菌圈大小。
2.5 MIC测定
MIC值测定用试管二倍稀释法[15],取 9支灭菌试管分别加入
朱唇提取液浓度为(/g·mL-1):1.00、0.5、0.25、0.125、0.0625、
0.03125、0.015625、0.0078125、0。的培养基溶液,并加入 0.1 mL
菌悬液。各试管置于 37 ℃恒温培养箱培养 24 h。实验重复三次,
若试管中药液澄明不浑浊,可直接判定结果,若试管中药液不澄
明,则需接一环在固体培养基上划线培养,若不长菌,即此浓度
为最低抑菌浓度。
3 结果
3.1 朱唇提取物及各部位抑菌效果
由表 1可知,朱唇水提物只对表皮葡萄球菌和化脓性链球菌
有抑菌作用,抑菌圈直径分别为 14.2 mm、11.3 mm,而醇提物对
伤寒沙门菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化脓
性链球菌和白色念珠菌 6种供试菌均有抑菌作用,抑菌圈直径分
别为(/mm):18.9、19.5、18.5、15.3、16.0、17.4。其中,伤寒沙
门菌、绿脓杆菌是革兰氏阴性菌,金黄色葡萄球、表皮葡萄球菌
和化脓性链球菌是革兰氏阳性菌,白色念珠菌是真菌。从抑菌圈
直径看,朱唇醇提物对革兰氏阴性菌抑菌作用强于革兰氏阳性菌。
结果表明:朱唇醇提物比水提物抑菌作用更强、抑菌谱更广。由
于蒸馏水、75 %乙醇提取出来的有效活性成分不一样,抑菌作用
也会有差异,因此,药物的提取方法不能仅限于传统的水提。
由表 1可知,朱唇各部位抑菌作用试验中,以乙酸乙酯部位
抑菌作用最强,对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、白色念珠菌、
绿脓杆菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球菌的抑菌圈直径分别为
(/mm):19.3、21.3、17.5、19.7、13.1、14.0;其次是乙酸乙酯部
位,对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、
表皮葡萄球菌和化脓性链球菌的抑菌圈直径分别为(/mm):16.6、
[收稿日期] 2016-03-04
[基金项目] 广西高校科学技术研究项目(KY2015LX366);生物化工广西重点学科(河池学院)建设基金(201308)
[作者简介] 罗泽萍(1987-),女,梧州人,硕士研究生,主要研究方向为生化药理学。
*为通讯作者:潘立卫(1987-),男,广西都安人,硕士研究生,主要研究方向为中草药有效成分研究。
2016年 第 8期 广 东 化 工
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19.8、17.0、18.0、12.5、13.2。抑菌作用最弱的是石油醚部位,
其只对表皮葡萄球菌和化脓性链球菌有抑菌作用,抑菌圈分别为
(/mm):10.1、10.3。朱唇乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位对
伤寒沙门菌抑菌作用最强,抑菌圈直径≥19.8,表明伤寒沙门菌
可能对朱唇最敏感。本实验中未发现朱唇提取物及各部位对枯草
芽孢杆菌和大肠杆菌有抑菌作用。

表 1 朱唇提取物及各部位抑菌效果
Tab.1 Extract of Salvia coccinea L.and bacteriostasis effec
供试菌种 朱唇提取物及各部位抑菌圈直径/mm 水提物 醇提物 石油醚部位 乙酸乙酯部位 正丁醇部位 水部位
大肠杆菌 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA
枯草芽孢杆菌 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA 6.0±0.0aA
金黄色葡萄球菌 6.0±0.0aA 18.5±0.4bB 6.0±0.0aA 19.3±0.4bC 16.6±0.7bD 6.0±0.0aA
伤寒沙门菌 6.0±0.0aA 18.9±0.4cB 6.0±0.0aA 21.3±0.5cC 19.8±0.4cD 21.2±0.8bC
白色念珠菌 6.0±0.0aA 17.4±0.1dB 6.0±0.0aA 17.5±0.2dB 17.0±0.2bC 6.5±0.2aD
绿脓杆菌 6.0±0.0aA 19.5±0.2cB 6.0±0.0aA 19.7±0.7bB 18.0±0.3dC 11.7±0.8cD
表皮葡萄球菌 14.2±0.5bA 15.3±0.2eB 10.1±0.6bC 13.1±0.7eD 12.5±0.7eE 12.2±0.4cE
化脓性链球菌 11.3±0.5cA 16.0±0.3fB 10.3±0.3bC 14.0±0.5fD 13.2±0.6fE 11.8±0.3dC
注:数据为平均值±标准差,同列不同英文小写字母和同行不同英文大写字母均表示差异显著(P<0.05);
因为牛津杯的直径为 6.0 mm,所以抑菌圈直径为 6.0 mm,表示无抑菌作用。

3.2 朱唇提取物及各部位的MIC
由表 2可知,朱唇醇提物对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、
白色念珠菌、绿脓杆菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球菌的MIC范
围在 0.0625~0.015625 g/mL内,其中对伤寒沙门菌和绿脓杆菌的
抑菌作用最强,MIC均为 0.015625 g/mL。水提物对表皮葡萄球菌
和化脓性链球菌的 MIC 分别为(g/mL):0.0625、0.25,对其余细
菌在本试验最大浓度时,未表现出抑菌作用。朱唇乙酸乙酯部位
在较低浓度下即表现出较强的抑菌作用,对金黄色葡萄球菌、伤
寒沙门菌、白色念珠菌、绿脓杆菌、表皮葡萄球菌和化脓性链球
菌的 MIC 范围为 0.125~0.015625 g/mL,其中,对金黄色葡萄球
菌、伤寒沙门菌和绿脓杆菌的抑菌作用最强,其MIC均为0.015625
g/mL。朱唇石油醚部位抑菌作用最弱,只对表皮葡萄球菌和化脓
性链球菌有抑菌作用,MIC均为 0.25 g/mL。该结果与牛津杯法结
果基本相似。

表 2 朱唇提取物及各部位的MIC
Tab.2 Extract of Salvia coccinea L.and MIC
供试菌种 朱唇提取物及各部位的MIC/(g·mL
-1)
水提物 醇提物 石油醚部 乙酸乙酯部位 正丁醇部位 水部位
大肠杆菌 - - - - - -
枯草芽孢杆菌 - - - - - -
金黄色葡萄球菌 - 0.03125 - 0.015625 0.03125 -
伤寒沙门菌 - 0.015625 - 0.015625 0.015625 0.015625
白色念珠菌 - 0.03125 - 0.03125 0.03125 0.5
绿脓杆菌 - 0.015625 - 0.015625 0.03125 0.25
表皮葡萄球菌 0.0625 0.0625 0.25 0.125 0.125 0. 25
化脓性链球菌 0.25 0.03125 0.25 0.125 0.125 0.25
注:“-”表示朱唇提取液在试验最大浓度时,未表现出抑菌作用。

4 讨论
抗生素滥用产生的耐药性问题使得抗生素的生产研究面临严
峻挑战,科研工作者研发一种新的抗生素大概需要 10年时间,而
耐药性细菌的产生仅需要 2年时间[16]。大部分中草药具有抑菌或
杀菌作用,而且中草药治疗疾病具有多靶点作用,因此细菌不容
易对其产生耐药性[17]。因此,中药作为抗菌物质具有广阔的开发
前景。本研究发现朱唇醇提物不仅对革兰性阴性菌中的伤寒杆菌
和绿脓杆菌有较强的抑菌作用,对革兰氏阳性菌中的金黄色葡萄
球菌、化脓性链球菌、表皮葡萄球菌也有抑菌作用,且对真菌中
的白色念珠菌的抑制作用也很强。可见,朱唇醇提物抑菌谱较广。
在明确了朱唇提取物的抑菌作用后,我们还对石油醚部位、乙酸
乙酯部位、正丁醇部位和水部位的抑菌作用进行评价,筛选出最
佳抑菌作用部位是乙酸乙酯部位。
本实验主要考察了朱唇的抑菌作用,而其抑菌活性物质结构
还未明确,有待进一步的分离纯化及结构鉴定,从而明确抑菌的
物质基础。

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(本文文献格式:罗泽萍,潘立卫.朱唇的抑菌作用研究[J].广
东化工,2016,43(8):24-25)