全 文 ：收稿日期:2014-06-25; 修订日期:2014-12-03
基金项目:贵州省科学技术基金项目
(No．黔科合 J字［2011］2334 号) ;
国家国际科技合作专项资助(No． 2011DFB41640)
作者简介:李占彬(1981-) ，男(汉族) ，辽宁凌源人，贵州省分析测试研究
院助理研究员，硕士学位，主要从事食品分析检测、环境分析检测、中药成
分研究工作．
* 通讯作者简介:谭 红(1959-) ，女(汉族) ，广西玉林人，贵州省分析测
试研究院研究员，学士学位，主要从事食品安全、环境检测、新化学物质毒
理测试研究工作．
贵州特色中药头花蓼中
六种酚酸类有效成分的 HPLC － MS /MS同时测定
李占彬1，2，杨鸿波2，谭 红1，2* ，昝宏强2，冉 艳2
(1．北京化工大学 理学院，北京 100029; 2．贵州省分析测试研究院，贵州 贵阳 550002)
摘要:目的 建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(LC － MS /MS)测定头花蓼中六种有效成分的方法。方法 对样品
的前处理方法及 LC － MS /MS分析条件进行优化，样品以 80%乙醇为提取溶剂，超声提取，LC － MS /MS 多反应监测模式
(MＲM)用于定量测定。结果 头花蓼中六种酚酸类有效成分儿茶酚、槲皮素、槲皮苷、芦丁、原儿茶酸、没食子酸能完全分
离;峰面积与浓度呈良好的线性关系。添加浓度为 5． 0，10． 0，20． 0μg /kg时，六种酚酸物质的平均回收率(n = 6)分别为
86． 90%，94． 70%，85． 07% ，83． 93%，79． 33%，78． 37%。ＲSD 分别为 3． 51%，1． 20%，2． 54%，4． 22%，4． 68%，4． 51%。
结论 该方法前处理简便，结果准确，重现性好，专属性高，可用于头花蓼中多种成分的含量测定和质量控制。
关键词:头花蓼; 酚酸; 液相色谱 －质谱; 多反应监测模式(MＲM)
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 04． 031
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)04-0850-02
头花蓼 Polygonum capitatum又名石莽草、四季红、红酸杆、省
丁草等，属于蓼科(Polygonaceae)蓼属 Polygonum 多年生草本植
物，是贵州省民间常用草药，主要用于泌尿系统感染、泌尿系结石
等症的治疗。目前，头花蓼已经成为贵州省“六大苗药”和重点
培育发展的的品种之一，以头花蓼为主要原料并被国家标准收载
的已有多种药物制剂［1］。
头花蓼的主要成分十分复杂，目前的研究主要集中在提取和
分离黄酮及酚酸类化合物。头花蓼对治疗泌尿系统感染的物质
基础研究中发现，头花蓼的药理性主要与酚酸类成分密切相
关［2］。目前对于头花蓼中酚酸类化合物测定的文献主要有高效
液相色谱法，高效液相色谱串联质谱法等［3 ～ 8］。但都是针对某一
种或几种有效成分进行测定。本文应用高效液相色谱三重四级
杆质谱仪同时测定头花蓼中儿茶酚、槲皮素、槲皮苷、芦丁、原儿
茶酸、没食子酸六种酚酸类化合物(见图 1)，得到了很好的结果，
为头花蓼相关药物的质量控制评价提供检测依据。
1 仪器与试剂
高效液相色谱 － 串联三重四级杆质谱(Agilent 1200 －
6140B，配有电喷雾离子源 ESI，美国安捷伦公司);色谱柱:ZOＲ-
BAX SB － C18，5μm，4． 6 × 250mm;超声清洗仪:SK250H(上海科
导超声仪有限公司)，0． 22μm 聚四氟乙烯过滤头等。甲醇(默
克)和乙腈(默克)均为色谱纯，实验室用水均为超纯水。
头花蓼来自于贵州威门药业股份有限。
对照品:儿茶酚(≥98%)、槲皮素(≥98%)、槲皮苷(≥
98%)、芦丁(≥98%)、原儿茶酸(≥98%)、没食子酸(≥98%)。
六种对照品均购于中国药品生物检定所。
图 1 六种酚酸类物质的结构图
2 方法
2． 1 对照品溶液配制 分别准确称取六种对照品 10． 20 mg(精
确至 0． 0001 g)于 10 ml容量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，作为
标准储备液(1． 0mg /ml)。分别准确量取 0． 10ml 六种储备液于
100ml容量瓶中，甲醇定容。最后得到混合标准溶液浓度为1． 0
μg /ml，混合标准物质的总离子流图及定量离子提取图见图 2。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 4 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 4
图 2 六种酚酸类物质的总离子流图及定量离子提取图
2． 2 色谱质谱条件 色谱柱为 ZOＲBAX SB － C18，5μm，4． 6 ×
250mm，美国安捷伦公司;柱温 35℃;进样体积:10μl;流动相 A:
0． 1%甲酸水溶液;流动相 B:甲醇;洗脱梯度(见表 1)。流速为
0． 3ml /min。
电喷雾离子源(ESI);负离子化模式;多反应监测扫描
(MＲM) ;雾化气:N2;干燥气:N2;离子源温度:350℃ ;干燥气流
量:10L /min，倍增电压:4000V;二级质谱母离子驻留时间:
0． 400s。
表 1 洗脱梯度流动相比例
时间 /min A /% B /%
0 5 95
0． 5 5 95
4 90 10
4． 1 5 95
2． 3 样品前处理 精密称取头花寥样品粉末 1． 00 g，置于 100ml
具塞三角瓶中，加 80%无水乙醇 50ml，冷浸 12 h，再超声提取
30min，过滤。残渣用 80%乙醇洗涤后合并，将过滤液浓缩，残渣
用流动相溶解并转移至 50ml棕色量瓶，定容。样品过膜0． 22μm
有机滤膜，供液相色谱 －质谱分析。
3 结果
3． 1 质谱条件优化 用储备液稀释浓度为 1． 0mg /L 标准溶液。
在质谱上进行全扫描，在负离子模式下得到儿茶酚、槲皮素、槲皮
苷、芦丁、原儿茶酸、丁香酸、没食子酸分子离子峰分别为 289． 3，
301． 1，447． 2，609． 4，153． 1，169． 3。六种酚酸物质的定量和定性
离子及相应的质谱参数见表 2。
表 2 六种酚酸类物质的质谱参数
化合物
母离子
/m/z
离子对
/m/z
驻留时间
/ s
锥孔电压
/V
碰撞电压
/V
儿茶酚 289． 3 289． 3 ＞ 109． 3 200 120 15
289． 3 ＞ 123． 3 200 25
槲皮素 301． 1 301． 1 ＞ 179． 1 200 135 15
301． 1 ＞ 151． 0 200 15
槲皮苷 447． 2 447． 2 ＞ 300． 0 200 135 30
447． 2 ＞ 270． 9 200 45
芦丁 609． 4 609． 4 ＞ 299． 9 200 135 45
609． 4 ＞ 270． 8 200 60
原儿茶酸 153． 1 153． 1 ＞ 109． 0 200 80 15
153． 1 ＞ 98． 9 200 25
没食子酸 169． 3 169． 3 ＞ 125． 3 200 80 5
169． 3 ＞ 79． 1 200 20
3． 2 前处理条件优化
3． 2． 1 提取剂浓度的影响 考察了乙醇不同浓度 20% 乙醇、
40%乙醇、60%乙醇、80%乙醇、100%乙醇提取效果。在 1． 00g
头花蓼中加入 10μg /L六种酚酸类物质混合标准溶液 2ml，待溶
液完全被样品吸收后，在分别用 20%乙醇、40%乙醇、60%乙醇、
80%乙醇、100%乙醇作为提取溶剂，按照前述“2． 3”方法处理样
品，“2． 2”的色谱质谱条件上机测定。结果表明当乙醇浓度为
80%时，对六种酚酸类物质的提取率相对较高，分别为:儿茶酚为
85． 9%，槲皮素为 89． 1%槲皮苷为 83． 6%，芦丁为 90． 5%，原儿
茶酸为 80． 2%，没食子酸为 82． 2． 0%。提取溶液的浓度为 20%
时没食子酸和原儿茶酸的提取率最高，分别为 98． 3%和 92． 5%。
当提取溶剂为 80%乙醇时，回收率大于 80%，也满足分析检测要
求。为实现同时测定六种酚酸类化合物，选用提取溶剂的浓度为
80%乙醇。
3． 2． 2 提取时间的影响 考察了相同频率下，超声波提取 10，
20，30，50，60，80 min时的提取效果，由于几种酚酸的性质不同，
因此随着超声提取时间的变化，回收率各不相同。当超声时间超
过 50min时，六种酚酸物质的回收率基本达到稳定。因此选用超
声时间为 50min为最佳超声时间。
3． 3 线性方程、检出限 配制一系列含六种酚酸化合物的标准溶
液，浓度范围在 0． 005 ～ 0． 1μg /ml之间。在优化的条件下进行测
定，进样量为 10μl，用峰面积对各组分的浓度作图。六种酚酸类
化合物在 0． 005 ～ 0． 1μg /ml范围内呈线性关系，符合定量分析要
求，其线性方程和相关系数见表 3。
采用基质加标方法，以信噪比 S /N = 3 时的含量为方法的检
出限(LOD);以信噪比 S /N = 10 时的含量为方法的定量限
(LOQ)，六种酚酸类化合物的方法检出限和定量限见表 3。
表 3 六种酚酸化合物检测方法的线性范围、检出限和定量限
化合物 线性方程
相关系数 /
Ｒ2
检测限 LOD /
μg·kg － 1
定量限 LOQ /
μg·kg － 1
儿茶酚 Y =345． 74X －112． 45 0． 9997 2． 0 6． 0
槲皮素 Y =235． 02X +37． 02 0． 9999 1． 0 3． 0
槲皮苷 Y =108． 45X26． 43 0． 9998 0． 5 1． 5
芦丁 Y =335． 00X +568． 80 0． 9996 1． 0 3． 0
原儿茶酸 Y =98． 860X －57． 87 0． 9993 2． 0 6． 0
没食子酸 Y =45． 89X +379． 97 0． 9996 2． 0 6． 0
3． 4 回收率及精密度 头花蓼为测试基质，分别添加 3 个浓度水
平的六种酚酸类化合物标准溶液，每个浓度水平做 6 个平行样
品，按照本方法进行准确度和精密度试验，结果见表 4。六种物
质的的平均回收率为:75． 5% ～ 99． 5%，相对标准偏差(ＲSD)均
小于 5． 0%，方法的准确度与精密度均满足日常监测要求。
表 4 头花蓼中六种酚酸类物质的加标回收率和精密度
化合物 添加水平 /μg·kg －1 回收率 /% 相对标准偏差 /%
儿茶酚 5． 0 84． 5 3． 51
10． 0 86． 0
20． 0 90． 2
槲皮素 5． 0 91． 6 1． 20
10． 0 93． 0
20． 0 99． 5
槲皮苷 5． 0 83． 4 2． 54
10． 0 85． 0
20． 0 86． 8
芦丁 5． 0 80． 1 4． 22
10． 0 82． 5
20． 0 89． 2
原儿茶酸 5． 0 77． 6 4． 68
10． 0 78． 1
20． 0 82． 3
没食子酸 5． 0 75． 5 4． 51
10． 0 78． 6
20． 0 81． 0
4 结论
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 4 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 4 期
建立了高效液相色谱 －串联质谱测定头花蓼中儿茶酸、槲皮
素、槲皮苷、芦丁、原儿茶酸、没食子酸六种酚酸类物质的检测方
法，利用 80%乙醇作为提取溶剂，优化的 MＲM 模式去干扰。方
法具有较好的重现性、准确性，可满足实际检测工作的要求，为贵
州省对苗药头花蓼的品质质量控制提供了检测依据。
参考文献:
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国医国药，2010，21(8) :1946．
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医杂志，2002，(3):135
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食子酸的含量［J］．中国中药杂志，2002，27(8) :589．
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学杂志，2005，20(1) :71．
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子酸的含量［J］．华西药学杂志，2006，21(4) :388．
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寥中 3 种有效成分的含量［J］．药物分析杂志，2008，28(11) :1793．
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子酸的含量［J］．华西药学杂志，2007，22(2) :204．
［8］ 吴红梅，贺祝英，王祥森，等．高效液相色谱法测定头花蓼中没食子
酸与槲皮苷的含量［J］．时珍国医国药，2009，20(1) :18．
收稿日期:2014-07-06; 修订日期:2014-12-01
基金项目:国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目
(国中医药人教函〔2012〕149 号)
作者简介:杜艳茹(1969-) ，女(汉族) ，河北石家庄人，河北省中医医院主
任医师，教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中医脾胃病临床及科
研工作．
* 通讯作者简介:李佃贵(1952-) ，男(汉族) ，河北蔚县人，河北省中医医
院主任医师，教授，博士研究生导师，学士学位，主要从事中医脾胃病临床
及科研工作．
化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃动力影响的研究
杜艳茹，李佃贵* ，王绍坡，崔建从，孙润雪
(河北省中医医院，河北 石家庄 050011)
摘要:目的 观察化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃动素、胃排空率及小肠推进比的影响。方法 采用综合造模法复制
大鼠慢性萎缩性胃炎模型，放射免疫法测定血清中胃动素含量，计算胃排空率及小肠推进比。结果 化浊解毒方高、中、
低剂量组与模型组相比均能明显提高大鼠胃动素水平(P ＜ 0． 05);化浊解毒方高、中、低剂量组与对照组相比有明显差异
(P ＜ 0． 05) ;化浊解毒方高、中剂量组之间无显著性差异(P = 0． 27)。化浊解毒方高、中、低剂量组与模型组相比均能明
显改善大鼠胃排空率(P ＜ 0． 05);化浊解毒方高、中剂量组与对照组相比有明显差异(P ＜ 0． 05) ，但两组之间无显著性差
异;化浊解毒方低剂量组与对照组之间无显著性差异。结论 化浊解毒方能明显提高慢性萎缩性胃炎大鼠胃动素含量、
改善胃排空率及小肠推进比，这可能是治疗慢性萎缩性胃炎的机制之一。
关键词:慢性萎缩性胃炎; 胃动素; 胃排空; 小肠推进比
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 04． 032
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2015)04-0852-02
慢性萎缩性胃炎为常见胃部疾病，临床以胃胀、胃痛、嗳气、
烧心、反酸等为主要表现，且病程长，反复发作。本研究观察了化
浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠血清中胃动素含量、胃排空率及
小肠推进比的影响。
1 材料与方法
1． 1 实验药物 化浊解毒方 由茵陈、黄连、藿香、佩兰、白花蛇舌
草、半枝莲、全蝎等中草药组成，使用前水煎成 1kg /L药液。对照
药物胃复春片:批号:001120。
1． 2 实验动物 SPF级健康雄性 Wistar 大鼠 60 只，体重(135 ±
30)g，购于河北医科大学实验动物中心，自购进后适应性喂养一
周。动物合格证号:912010。
1． 3 实验试剂 胃动素(MTL)放免试剂盒，北京普尔伟业生物科
技有限公司提供。
1． 4 实验仪器 γ －放射免疫计数器，FJ － 2021，西安二六二厂;
电子天平 HM －200 日本。
1． 5 实验方法 将 60 只大鼠随即分为 6 组，每组 10 只，分别为
正常组、模型组、化浊解毒方高、中、低剂量组、对照组。采用综合
造模法［1 ～ 3］，造模成功后进行治疗，正常组和模型组给予蒸馏水
4ml，分两次灌胃，低剂量组:每日予中药按 0． 1g∕(kg·d)灌胃，
用蒸馏水配成 4ml，分两次灌胃;中剂量组:每日予中药按 1g ∕
(kg·d)灌胃，用蒸馏水配成 4ml，分两次灌胃;高剂量组:每日予
中药按 3g∕(kg·d)灌胃，用蒸馏水配成 4ml，分两次灌胃。对
照组:每日予 0． 4%胃复春 4ml，分两次灌胃。
1． 6 观察指标及方法 胃动素含量:各组大鼠取血后，用放射免
疫法测定血清中 MTL的含量，具体步骤按试剂盒说明操作。
胃排空率测定:治疗结束后，各组大鼠在末次给药前禁食
18h(自由饮水)，末次给药后 2h予半固体糊(由羧甲基纤维素 2．
5g，奶粉 4g，淀粉 2g，活性炭 1． 5g 加蒸馏水 62． 5ml 配成)按 3ml
∕ kg体重灌胃，40 min后处死大鼠取出全胃后，用滤纸擦干后称
量胃全重，然后沿胃大弯剪开胃体，用生理盐水冲洗胃内容物后
擦干称净重。胃排空率(%)=［1 －(胃全重 －胃净重)/灌胃量］
× 100%
小肠推进比测定:将大鼠处死后，迅速取出小肠，轻轻剥离，
将小肠平直铺于白纸上，然后测量幽门至回盲肠部全长的距离、
幽门至黑色半固体糊前沿的距离，记录数值。小肠推进比(%)
=(炭糊移动距离 /幽 －阑全长)× 100%
1． 7 统计学处理 数据用 SPSS17． 0 统计软件包处理。数据用 珋x
± s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用
LSD方法，P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 4 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 4