全 文 ：狼毒大戟水浸液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌体外杀菌效果的研究
甄占萱1，邓淑华1，李 娜1，宋永学1，霍妍明2，杨贵明1
(1．承德医学院，河北承德 067000;2．承德市农牧局 河北承德 067000)
摘要 ［目的］通过对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的体外药效试验，研究有毒植物狼毒大戟的杀菌效果。［方法］取多年生狼毒大戟的
根制成水浸液，用 24孔板和平坂培养法对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行药效试验。［结果］狼毒大戟对全黄色葡萄球菌的最小抑菌
浓度(MIC)为 0． 7 g /ml;最小杀菌浓度(MBC)为1． 17 g /ml。对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为 1． 17 g /ml;最小杀菌浓度(MBC)为
1． 75 g /ml。［结论］狼毒大戟对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑杀菌作用。
关键词 狼毒大戟(Euphorbia fischeriana Steud．);水浸液;金黄色葡萄球菌;大肠杆菌
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)30 －18561 －02
Effects of Water Extract of Euphorbia fischeriana Steu． on Susceptibility Test in vitro for Staphylococcus aureus and Bacillus coli
ZHEN Zhan-xuan et al (Chengde Medical College，Chengde，Hebei 067000)
Abstract ［Objective］The sterilization effects of E． fischeriana was studied by doing susceptibility test in vitro for S． aureus and B． coli．［Meth-
ods］Water extract was prepared with perennial E． fischeriana． The method of 24 well cell culture plate and cell culture dish was applied to evalu-
ate the sterilization effects on susceptibility test in vitro for S． aureus and B． coli．［Results］The Minimum Inhibitory Concentration (MIC)of E．
fischeriana to S． aureus is 1． 75 g /ml and the Minimum Bactericidal Concentration (MBC)is 1． 17 g /ml． And the Minimum Inhibitory Concentra-
tion(MIC)of E． fischeriana Steud to B． coli is 1． 17 g /ml and the Minimum Bactericidal Concentration(MBC)is 0． 7 g /ml．［Conclusion］The E．
fischeriana has distinctly sterilization effect on S． aureus and B． coli．
Key words E． fischeriana;Water extract;S． aureus;B． coli
基金项目 承德医学院计划项目(200925)。
作者简介 甄占萱(1961 － ) ，女，河北无极人，高级实验师，从事药用植
物研究，E-mail:zhenkon． g@ 163． com。
收稿日期 2011-07-08
狼毒大戟(Euphorbia fischeriana Steud．) ，别名有狼毒、狼
毒疙瘩、猫眼睛等［1］，为大戟科(Euphorbiaceae)多年生草本
植物［2］。全株有毒，根毒性大。从非洲产狼毒大戟得到的有
毒成分为 12-异丁酰基-13-乙酰基-20-当归酰基佛波醇酯，还
有 O-乙酰基-N-L-苯丙氨醇及树脂等［1］。其根含二萜醇类化
合物，并含大戟醇、皂苷酚类及鞣质等，另据《中国经济植物
志》记载:根中含有一种无水酸［2］。狼毒大戟根入药，性平、
味辛、有毒，功能散结、杀虫，外用可治疮毒、淋巴结核、皮癣，
亦可杀鼠、杀蛆、灭孑孓［1 －2］。近年来狼毒大戟作为农药植
物也逐渐受到重视，因此，笔者以承德地区野生有毒植物狼
毒大戟为材料进行杀菌效果研究，以期为今后药用植物在农
业和医学方面的应用奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试菌种。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌由中国药品
生物制品检定所提供，试验在承德医学院中药研究所免疫实
验室中进行。
1． 1． 2 供试植物。在承德围场县坝上地区采收多年生狼毒
大戟根部(Euphorbia fischeriana Steud．) ，新鲜或风干、烘干
均可。
1． 1． 3 阳性对照药。三精牌双黄连口服液，由哈药集团三
精股分有限公司生产，10 ml /瓶，批号 Z10920053，密封保存，
体外药敏试验时煮沸 30 min高压灭菌后使用。
1． 1． 4 主要仪器。电热恒温培养箱(型号 HH-400) ，由上海
跃进医疗器械厂生产;电子天平(型号 JA-2003) ，由上海天平
仪器厂生产;倒置显微镜，由重庆光学仪器厂生产。
1． 1． 5 主要试剂。营养肉汤。BR生化制剂，由北京双旋微
生物培养基制品厂生产(批号 970910) ;胎牛血精(FCS) ，由
北京元亨圣马生物技术研究所生产(批号 070308)。
1． 2 方法
1． 2． 1 供试菌种原液的制备。将菌种接在 MH 培养基
中［3］，放入 37 ℃恒温箱中培养 18 h，进行增菌培养。具体方
法参照邓淑华报道的黄芩茎叶总黄酮抗菌作用的试验
研究［4］。
1． 2． 2 水浸药液原液的制备。药液的制备主要用沸水浸提
法［5］。将有毒植物狼毒大戟作为植物源农药应用于农业，故
在药液的制备方法上选用粗制法［6］。取新鲜狼毒大戟根
200． 00 g，切成长宽 1 ～ 2 cm的块状，放入 2 000 ml 烧杯中，
然后向烧杯中加入一定量的蒸馏水，煮沸 30 min，将煮制好
的药液放至室温后过滤，滤液定容到 700 ml，即得 3． 5 g /ml
的狼毒大戟原溶液。药敏试验前取 30 ml 原液，装于 150 ml
的三角烧杯中进行高压消毒灭菌。
1． 2． 3 最小抑菌浓度(MIC)的测定。①试验在无菌 24孔细
胞培养板中进行。分别以浓度 10% FCS 营养肉汤培养基按
比例(1∶ 1、1∶ 2、1∶ 4、1∶ 8、1∶ 16、1∶ 32、1∶ 64、1∶ 128、1∶ 256，V /V)
将高压消毒后的狼毒大戟水浸液原液稀释至 9 个浓度。取
“1． 2． 1”中制备的金黄色葡萄球菌液 50 μl。另设阳性对照
(营养肉汤中只加细菌液，不加杀菌药液)和阴性对照(营养
肉汤中不加细菌液，也不加杀菌药液)进行试验。用同样方
法在另一 24 孔板中进行大肠杆菌的试验。②取浓度 40
mg /ml双黄连口服液，在另一无菌 24孔细胞培养板中用相应
培养基稀释药液至 9个浓度，以“①”中相同条件加入试验菌
液，观察细菌生长情况。混浊者为有细菌繁殖，记录为“+”;
清纯者为无细菌繁殖，记录为“－”;清纯中略见混浊体者记
录为“±”［7］。“±”为最小抑菌浓度(MIC) (以上细菌生长
的药物最高稀释度对应的浓度为最小抑菌浓度)。
1． 2． 4 最小杀菌浓度(MBC)的测定。①取牛肉营养琼脂加
入到直径为 7． 5 cm的二重皿中，制成固体平板培养基。用
加样枪从“1． 2． 1”操作下各孔中分别取 100 μl 细菌培养液，
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(30):18561 － 18562 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.30.176
放于二重皿固体平板培养基中(简称平板) ，用载玻片将细菌
培养液涂匀(每孔取 2次，分别铺于 2块平板中，作为 2个重
复)。然后将平板放入37 ℃恒温箱中培养18 h后取出，观察
各平板中细菌生长情况，记数菌落。无细菌繁殖者记录为
“○”;繁殖菌落数少于 5 个者记录为“菌落”;繁殖多于 5 个
者记录为“苔”［6］。②双黄连口服液也用“①”中的方法操
作。(以菌落数少于 5个(2复孔平均值)的药物最高稀释度
对应的浓度为该细菌的最小杀菌浓度(MBC)［3］)。
1． 2． 5 对照孔细菌生长情况。阳性对照孔的营养肉汤中只
加细菌液，不加杀菌药液，经过 37 ℃恒温箱中培养 18 h后，
观察细菌生长情况。阴性对照孔的营养肉汤中不加细菌液，
也不加杀菌药液，经过 37 ℃恒温箱中培养 18 h后，观察细菌
生长情况。
2 结果与分析
2． 1 最小抑菌浓度(MIC)的测定 由表 1 可知，狼毒大戟
对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑杀作用，其效果接
近对照双黄连口服液。其最小抑菌浓度(MIC)也就是细菌
生长的药物最高稀释度对应的浓度(表 3)。
表 1 液体药敏试验结果
Table 1 Results of liquid drug sensitive test
细菌名称
Name of
bacteria
药液名称
Name of liquid
medicine
不同稀释比例数
Different dilution proportional numbers
1∶ 1 1∶ 2 1∶ 4 1∶ 8 1∶ 16 1∶ 32 1∶ 64 1∶ 128 1∶ 256
阴性对照
Negative
control
阳性对照
Positive
control
金黄色葡萄球菌 狼毒大戟 － － ± + + + + + + － +
S． aureus 双黄连 － － ± + + + + + + － +
大肠杆菌 狼毒大戟 － ± + + + + + + + － +
B． coli 双黄连 － － ± + + + + + + － +
2． 2 最小杀菌浓度(MBC)的测定 由表 2 可知，狼毒大戟
对金黄色葡萄球菌的抑杀作用比对大肠杆菌强。细菌生长
结果与液体培养结果相同。其最小杀菌浓度(MBC)以菌落
数少于 5个的药物最高稀释度对应的浓度(表 3)。
表 2 固体药敏试验结果
Table 2 Results of solid drug sensitive test
细菌名称
Name of
bacteria
药液名称
Name of liquid
medicine
不同稀释比例数
Different dilution proportional numbers
1∶ 1 1∶ 2 1∶ 4 1∶ 8 1∶ 16 1∶ 32 1∶ 64 1∶ 128 1∶ 256
阴性对照
Negative
control
阳性对照
Positive
control
金黄色葡萄球菌 狼毒大戟 ○ ○ 苔 苔 苔 苔 苔 苔 苔 ○ 苔
S． aureus 双黄连 ○ ○ ○ 苔 苔 苔 苔 苔 苔 ○ 苔
大肠杆菌 狼毒大戟 ○ 苔 苔 苔 苔 苔 苔 苔 苔 ○ 苔
B． coli 双黄连 ○ ○ 菌落 苔 苔 苔 苔 苔 苔 ○ 苔
表 3 狼毒大戟水浸液体外抗菌效果
Table 3 Antiseptic effect of water extract of E． fischeriana in vitro g / ml
细菌菌种
Name of
bacteria
狼毒大戟水浸液
Water extract of E． fischeriana
最小抑菌浓度 /MIC
Minimal inhibitory
concentration
最小杀菌浓度 /MBC
Minimum bactericidal
concentration
双黄连口服液
Shuanghuanglian oral liquid
最小抑菌浓度 /MIC
Minimal inhibitory
concentration
最小杀菌浓度 /MBC
Minimum bactericidal
concentration
金黄色葡萄球菌 S． aureus 0． 70 1． 17 0． 70 0． 70
大肠杆菌 B． coli 1． 17 1． 75 0． 70 1． 17
2． 3 对照孔细菌生长情况 观察显示，在 24 孔细胞培养板
的阴性对照孔中均没有细菌生长，阳性对照中孔中均有细菌
生长;琼脂平板培养基的阴性对照也均没有菌苔生长，阳性
对照均有菌苔生长。试验全过程中无污染现象，结果可信。
3 讨论
(1)试验旨在了解狼毒大戟对大肠杆菌和金黄色葡萄球
菌有无抑杀作用，并不作定量分析，故供试植物狼毒大戟水
浸液原液的制备方面采取的是接近今后开发生产植物型农
药所用的方法。试验没有对煮制形成的药液做进一步浓缩
和定量分析，这一点在今后原液生产标准的制定时还需要进
一步明确。
(2)试验结果显示，有毒植物狼毒大戟的抑杀菌效果接近
于对照双黄连口服液，与白屈菜比较杀菌效果更强［7］。仅从杀
菌效果看，狼毒大戟可以成为一种高效的植物源农药，但对其
残效还没有深入研究，所以不能确定使用方法和效果。
(3)双黄连为复方药剂，通过合理配伍可使杀菌作用表现
的更强、更全面。因此，如果将狼毒大戟作为植物源农药在农
业上应用，也可以考虑与白屈菜或其它有毒植物相配伍，研制
成杀菌效果更强的复方型植物农药，以期达到广谱杀菌的作
用。另外，狼毒大戟的生长环境比较特殊，人工种植成本相对
要高，而白屈菜野生资源丰富，易于种植，产量也高，如果作为
农药植物与狼毒大戟配伍使用，还可以降低成本。
参考文献
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26581 安徽农业科学 2011 年