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HPLC法测定头花蓼中槲皮素与山奈酚的含量
李雨生1，王祥培1，万德光2，吴红梅2
［摘要］目的:同时测定头花蓼中槲皮素与山奈酚的含量。方法:采用 Alltima C18柱(5 μm，4. 6 mm×250 mm) ，流动相为
甲醇－0. 4%磷酸(50 ∶ 50) ，流速 0. 8 mL·min－1，检测波长 360 nm。结果:槲皮素在 0. 0216 μg ～ 0. 389 μg浓度范围内线性
关系良好，r = 0. 9998。平均回收率为 97. 37%，RSD为 1. 88%;山奈酚在 0. 0051 μg ～ 0. 0918 μg浓度范围内线性关系良好，r
= 0. 9993，平均回收率为 97. 09%，RSD为 1. 19%。结论:本方法准确、简捷，可为评价头花蓼质量提供参考。
［关键词］头花蓼;槲皮素;山奈酚;HPLC
［中图分类号］ R 284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1674－926X(2011)03－0024－03
Determination of quercetin and kaempferol in herb of Polygonum capitatum by HPLC /LI Yu-sheng1，
WANG Xiang-pei1，WAN De-guang2，WU Hong-mei2 / /(1． Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiy-
ang 550002，China;2． Pharmacy College，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine;The Ministry of Ed-
ucation Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine;State Key Laboratory Breeding Base of Sys-
tematic Research，Development and Utilization of Chinese Medicine Resources，Chengdu 610075，China)
［Abstract］Objective:To establish a HPLC method for determination of quercetin and kaempferol in herb of
Polygonum capitatum．Method:Alltima C18(5 μm，4. 6 mm×250 mm)column was used in HPLC． Mobile phase
was methanol－0. 4%H3PO4(50 ∶ 50) ，and the flow rate was 0. 8 mL·min
－1 ． The detection wavelength was 360
nm． Result:The calibration curve was linear in the range of 0. 0216 μg ～ 0. 389 μg for quercetin(r = 0. 9998)．
The average recovery rate was 97. 37% and RSD was 1. 88% ． The calibration curve was linear in the range of
0. 0051 μg ～ 0. 0918 μg for kaempferol(r = 0. 9998)． The average recovery rate was 97. 09% and RSD was
1. 19% ． Conclusion:The method is simple，accurate and can be used for the quality study of the Polygonum capi-
tatum．
［Key words］Polygonum capitatum;quercetin;kaempferol;HPLC
［作者单位］ 1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002;2．成都中医
药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室
中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点
实验室培育基地，四川 成都 610075
［作者简介］李雨生(1985-) ，男，安徽界首人，硕士研究生，主
要从事中药质量控制与新药研究
Tel:13765128062 Email:liyusheng2011@ 163． com
［通讯作者］王祥培(1975-) ，男(侗族) ，贵州天柱人，副教授，
博士，主要从事中药及民族药品种品质与资源开
发研究
［收稿日期］ 2011-01-04
头花蓼为蓼科植物头花蓼(Polygonum capitatum
Buch．—Han． ex D． Don)的干燥全草或地上部分，主产
于贵州、云南、四川、西藏、广西等省区。我国民族地
区常将头花蓼用于治疗泌尿系统感染、血尿、湿疹、肾
盂肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿痛、跌打损伤、痄鳃、
疮疡、腹泻和痢疾等［1－2］。其中黄酮类成分为其主要
成分［3－4］。目前文献报道［5－8］测定了不同产地头花蓼
中总黄酮、没食子酸、槲皮苷、槲皮素的含量，但同时
测定不同产地野生与栽培头花蓼中槲皮素与山奈酚
的含量未见报道。本实验采用高效液相色谱法同时
测定 12 批头花蓼中槲皮素与山奈酚的含量，方法灵
敏，数据稳定，可为评价不同产地野生与栽培头花蓼
质量提供参考。
1 仪器与材料
日本岛津 LC－10AT 高效液相色谱仪，SPD－10A
紫外检测器，浙大智达 N2000 色谱工作站，SB2200 型
超声清洗器(上海必能信超声有限公司)。
槲皮素(批号 081 －90003)、山奈酚(批号 0861 －
200002)对照品均为中国药品生物制品检定所提供。甲
醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸镏水。头
花蓼药材:共 12 批样品，分别产自贵州、四川、云南、西
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藏等地，均由贵阳中医学院王祥培副教授教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Alltima C18(5 μm，4. 6 mm×250 mm) ;柱
温:室温;流动相为:甲醇－0. 4%磷酸(50 ∶ 50) ;流速:
0. 8 mL·min－1;检测波长:360 nm。理论塔板数按槲
皮素、山奈酚计算应不低于 4000，在上述色谱条件下，
对照品和样品的色谱图见图 1。
2. 2 线性关系的考察
精密称取槲皮素对照品 10. 8 mg、山奈酚对照品
5. 1 mg，各加甲醇溶解定容至 100 mL，作为贮备溶液。
精密吸取槲皮素贮备液 10 mL、山奈酚贮备液 5 mL混
合，加甲醇定容至 50 mL，摇匀，即得混合对照品溶液。
精密吸取混合对照品溶液 1、3、6、9、12、15、18 μL，依
次进样，以进样量(μg)为横坐标，色谱峰面积为纵坐
标进行回归分析，得槲皮素回归方程为:Y = 1E+06x－
1779. 8，r = 0. 9998，线性范围为 0. 0216 μg ～ 0. 389
μg。山奈酚为:Y = 2E+06x+1758. 1，r = 0. 9993，线性
范围 0. 0051 μg ～ 0. 0918 μg。
2. 3 水解时间的考察
取西藏墨脱产头花蓼粉末 0. 5 g，精密称定，置 50
mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇－25%盐酸溶液(4 ∶
1)混合液 25 mL，称定重量，置水浴中加热回流提取
(分别进行 0. 5 h，1. 0 h，1. 5 h，2. 0 h的时间考察) ，放
冷，称重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密
吸取续滤液 5 mL至 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，用微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，取续滤液，即得。按
2. 1 项下色谱条件，分别进样对照品与供试品溶液 10
μL测定峰面积，并计算其含量，数据结果见表 1。
表 1 酸水解时间考察结果(n=3)
水解时间(h) 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0
槲皮素含量 0. 521% 0. 632% 0. 628% 0. 631%
山奈酚含量 0. 0285% 0. 0313% 0. 0315% 0. 0306%
2. 4 供试品溶液制备
取头花蓼细粉 0. 5 g，精密称定，置 50 mL 具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇－25%盐酸溶液(4 ∶ 1)混合液
25 mL，称定重量，置水浴中加热回流 1. 0 h，放冷，称
重，用提取液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取
续滤液 5 mL至 25 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，
用微孔滤膜(0. 45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2. 5 精密度试验
吸取对照品溶液 10 μL，连续进样 5 次，记录色谱
图，结果槲皮素、山奈酚峰面积的 RSD分别为 0. 96%、
1. 27%。
2. 6 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在 0、1、2、4、8、12 h 进
样，记录色谱图，结果槲皮素、山奈酚峰面积的 RSD分
别为 1. 45%、1. 26%。表明供试品溶液在 0 ～ 12 h 内
稳定性良好。
A B
A．样品 B．对照品 1．槲皮素 2．山奈酚
图 1 头花蓼的 HPLC色谱图
2. 7 重复性试验
取同批药材 5 份，精密称定，按 2. 3 项下供试品溶
液制备方法制备并测定，槲皮素平均含量为 0. 529%，
RSD为 1. 12%;山奈酚平均含量为 0. 033%，RSD 为
1. 95%。
2. 8 回收率试验
取已知含量头花蓼粉末 6 份，每份约 0. 25 g，精密
称定，分别添加浓度为 0. 108、0. 051 mg·mL－1槲皮
素、山奈酚对照品溶液 10 mL、2 mL，按 2. 3 项下供试
品溶液制备方法制备并测定，计算，槲皮素、山奈酚的
平均回收率分别为 97. 37%、97. 09%，其 RSD 分别为
1. 19%、1. 88%，表明该方法回收率较好。结果见表
2、表 3。
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表 2 槲皮素回收率试验结果
序号 称样量(g) 样品中槲皮素含量(mg) 加入槲皮素量(mg) 测得槲皮素量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1
2
3
4
5
6
0. 2497
0. 2506
0. 2511
0. 2501
0. 2496
0. 2509
1. 3249
1. 3297
1. 3323
1. 3270
1. 3244
1. 3313
1. 0800
1. 0800
1. 0800
1. 0800
1. 0800
1. 0800
2. 3877
2. 3796
2. 3654
2. 3915
2. 3701
2. 3852
98. 41
97. 21
95. 66
98. 56
96. 82
97. 58
97. 37 1. 19
表 3 山奈酚回收率试验结果
序号 称样量(g) 样品中山奈酚含量(mg) 加入山奈酚量(mg) 测得山奈酚量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1
2
3
4
5
6
0. 2497
0. 2506
0. 2511
0. 2501
0. 2496
0. 2509
0. 0824
0. 0827
0. 0829
0. 0825
0. 0824
0. 0828
0. 1020
0. 1020
0. 1020
0. 1020
0. 1020
0. 1020
0. 1807
0. 1815
0. 1844
0. 1796
0. 1835
0. 1802
96. 37
96. 86
99. 50
95. 20
99. 12
95. 49
97. 09 1. 88
2. 9 样品含量测定
精密吸取对照品溶液与 12 批头花蓼药材供试品
溶液各 10 μL，按上述色谱条件测定，并计算槲皮素、
山奈酚的含量。结果见表 4。
表 4 不同地区头花蓼中槲皮素与山奈酚含量(n=3)
序号 产地 槲皮素含量% 山奈酚含量%
1 贵州安顺(野生) 0. 471 0. 0114
2 贵州剑河(野生) 0. 553 0. 0147
3 贵州锦屏(野生) 0. 531 0. 0331
4 贵州贵阳(野生) 0. 433 0. 0149
5 贵州盘县(野生) 0. 696 0. 0361
6 贵州施秉(栽培) 0. 603 0. 0255
7 四川米易(野生) 0. 618 0. 0122
8 四川峨眉(野生) 0. 672 0. 0136
9 四川成都(栽培) 0. 534 0. 0136
10 云南昆明(野生) 0. 613 0. 0143
11 西藏墨脱(野生) 0. 632 0. 0313
12 云南大理(野生) 0. 412 0. 0115
3 讨论
2003 年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》只
规定了头花蓼药材中槲皮素含量。本研究同时进行
了槲皮素与山奈酚的含量测定，在上述色谱条件下，
待测成分与相邻峰达到基线分离，且回收率高，重复
性好，为更好地控制头花蓼药材及其制剂的内在质量
提供了依据。在检测样品的制备方法上，比较了加热
回流 0. 5 h、1. 0 h、1. 5 h、2. 0 h，结果 1 h以上，黄酮苷
水解基本完全，盐酸的浓度不宜再高，酸性太强对仪
器和色谱柱腐蚀作用大。
根据实验的数据结果可知，产于贵州盘县的野生
头花蓼中槲皮素、山奈酚含量较高，贵州施秉栽培的
头花蓼较四川成都栽培头花蓼的槲皮素、山奈酚含量
高，但所收集的 12 批样品中槲皮素的含量均大于
0. 1%，均符合 2003 年版《贵州省中药材、民族药材质
量标准》的规定，可为头花蓼资源的开发、利用提供数
据参考依据。
致谢
西藏墨脱县墨脱镇人民政府王祥森同志提供西
藏样品。
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(责任编辑:李芸霞)
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