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狼毒大戟治疗白血病时的毒性作用研
究
于勇1 ,卢佃华1 ,姚苹2 ,刘萍2 ,王永康3 ,崔唏2(1.德州市
人民医院药剂科 ,山东 德州 253014;2.山东大学公共卫生学院 ,山东
济南 250012;3.山东省立医院病理科 ,山东 济南 250000)
中图分类号:R979.1 文献标识码:A 文章编
号:1001-2494(2002)12-0958-02
作者简介:于勇 ,男 ,副主任药师 Tel:(0534)2621202-6267
以 L615白血病小鼠为动物模型 ,探讨狼毒大戟(Euphor-
bia fisheriana Steud , EFS)在治疗 T 淋巴细胞性白血病时的
毒性作用。
1　材料与方法
1.1　实验动物　615 近交系小鼠 50 只 , 体重(19.5±0.5)
g , 2 ～ 3月龄 , ♀♂各半(中国医学科学院动物繁育场)。 ♂昆
明种近交系小鼠 50 只 ,(32.5±2.3)g , 3 月龄(山东医科大
学实验动物中心)。
1.2　瘤株　L 615白血病瘤株由中国医学科学院血液病研究
所引入。
1.3　药品　狼毒生药(济南市药品公司 , 经山东医科大学药
学院中草药生药教研室鉴定为狼毒大戟)。分别取生药 12 ,
20 g 文火煎后 ,过滤 ,加蒸馏水至 100 mL , 制成相当生药 LS-
1(0.12 g·mL-1), LS-2(0.2 g·mL-1)狼毒煎液 ,供中枢神经
细胞毒性实验用。生药 60 , 360 , 720 g 文火煎煮 , 过滤 , 加蒸
馏水至 100 mL ,制成相当生药 0.6 , 3.6 , 7.2 g·mL-1水煎液
供生殖毒性实验用。
2　实验方法
2.1　中枢神经细胞毒性实验　50只 615小鼠平衡饲养 1 周
后 ,随机分为 5 组:正常对照组(n =10), 肿瘤对照组(n =
10), LS-1组(n=10), LS-2(n=10),药物(LS-2)对照组(n =
10)。正常对照组和药物对照组每只鼠左腋皮下注射生理盐
水 0.1 mL , 其余 3组在相同部位接种1×105·mL-1 L615细胞
0.1 mL , 24 h 后正常对照组和肿瘤对照组每只小鼠每日胃饲
生理盐水 0.3 mL , LS-1 组 , LS-1(0.12 g·mL-1 , 0.001 8 g·
g -1), LS-2 组及药物对照组 LS-2(0.2 g·mL-1 , 0.003 g·
g
-1),共 7 d。瘤株接种后第 7 天 , 常规处死动物 ,取大脑 、小
脑及延髓组织 , 分别进行 HE 染色。光镜下与正常组对照 ,
观察组织中病理学病变 ,资料采用χ2 检验。
2.2　机体脂质过氧化实验　动物饲养同“ 2.1” 。第 7 天处
死小鼠 ,解剖取肝 、肾 , 用冰冷生理盐水冲洗 , 制成匀浆介质 ,
采用南京建成生物工程公司试剂盒 , 按说明书操作 , 硫代巴
比妥酸(TBA)缩合法测定其丙二醛(MDA)含量。数据采用
t检验。
2.3　生殖细胞毒性实验　50只♂昆明小鼠 , 随机分为 5 组 ,
每组 10 只。 Ⅰ组为阴性对照组 , 给予蒸馏水;Ⅱ组为阳性对
照组 ,给予环磷酰胺 50 mg·kg-1腹腔注射;Ⅲ , Ⅳ , Ⅴ组为低 、
中 、高剂量组 ,分别以 30 , 180 , 360 g·kg -1(0.6 , 3.6 , 7.2 g·
mL-1 , 0.5 mL·10 g-1)灌胃给予狼毒大戟水提物。 连续给
药 5 d , 1 次·d-1 , 灌胃前禁食 2～ 3 h。4 周后处死 , 取小鼠双
侧附睾剪碎于盛有磷酸盐缓冲液的表面皿中每只小鼠计数 1
000 个精子 , 观察形态并计算精子畸形率 。数据采用χ2 检
验。
3　结果与讨论
3.1　狼毒大戟对白血病中枢神经系统损伤的保护作用　接
种瘤株的各组动物引起中枢神经系统损害极为明显 , 四格精
确概率法分析其与药物及正常对照组的差异在统计学上有
显著意义 ,在动物用狼毒大戟后 , 大脑软脑膜肿瘤细胞的浸
润明显改善 ,从弥漫性浸润转为局灶性 , 病变进而基本缓解。
这可能与狼毒大戟对外周血中肿瘤细胞的抑制作用直接相
关 ,表明狼毒大戟跑减缓或部分阻止 L615白血病细胞对中枢
神经的浸润作用。
3.2　狼毒大戟水浸液对 L615白血病小鼠肝 、肾 MDA 含量的
影响　与正常对照组相比 , 给予狼毒大戟后小鼠肝 、肾中
MDA 含量显著上升(P<0.01),高低剂量间无显著差异 。受
L615白血病攻击的患鼠肝 、肾 MDA 含量亦无明显增加。 见
表 1。狼毒大戟对细胞产生了脂质过氧化作用 ,是由狼毒大
戟直接引起 ,还是通过激发机体的酶系统而产生自由基尚需
要进一步探讨。
表 1　狼毒大戟水煎液对小鼠肝 、肾中 MDA 含量的影响.n
=10 , x±s
Tab 1　The effect of EFS water ex tract on MDA content in liv-
er and kidney of mice.n =10 , x±s
组别 剂量/g·kg-1·d-1 肾/nmol·g-1 肝/ nmo l·g-1
LS-1组 1.8 346.11±113.351) 268.27±66.391)
LS-2组 3.0 376.26±120.341) 255.75±39.891)
肿瘤对照组 - 159.23±91.762) 155.25±99.292)
药物对照组 3.0 310.27±109.351) 220.34±98.701)
正常对照组 - 139.10±60.65 139.25±30.75
注:1)与正常对照组 、肿瘤对照组相比 , P<0.01;2)与正常对照组相比 , P >
0.05
1)vs normal cont rol and tumor control , P<0.01;2)vs no rmal control , P>0.05
3.3　精子畸变率　50 只小鼠实验结束时还剩 37 只 ,正常对
照组 10 只 , 环磷酰胺组 8 只 ,低剂量组 9 只 , 中剂量组 7 只 ,
高剂量组 3 只。精子畸形多为香蕉形 、无钩 、胖头和无定形。
双头 、双尾未见。结果见表 2。中 、高剂量组与阴性对照组相
比有显著性差异(P<0.005),低剂量组与之相比无显著性差
异。高 、中剂量的狼毒大戟水提物对小鼠有明显的致突变作
·958· Chin Pharm J , 2002 December , Vol.37 No.12 　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2002年 12月第 37卷第 12期
用 ,并有一定数量的小鼠死亡 , 但低剂量时未见明显的毒性 ,
其毒性也远远低于治疗剂量下的环磷酰胺 ,说明狼毒低剂量
下无显著性生殖毒性 , 但可能有蓄积毒性 , 其安全用药剂量
有待进一步探讨。
表 2　精子畸变实验结果.n=10 , x±s
Tab 2　The results of sperm distor tion test.n=10 , x ±s
组别 剂量/ 小鼠数 观察精子 畸形数 畸形率 死亡率
g·kg-1·d-1 /只 总数/个 /个 / % / %
阴性对照组 - 10 10000 130 13.0 0
环磷酰胺组 - 8 8000 580 72.5 20
狼毒低剂量组 30 9 9000 135 15.0 10
狼毒中剂量组 180 7 7000 290 41.4 30
狼毒高剂量组 360 3 3000 157 52.3 70
(收稿日期:2002-04-22)
贵州蜘蛛香挥发性成分的 GC-MS 研究
梁光义 ,周欣 ,王道平 ,徐必学 (贵州省中国科学院天然产
物化学重点实验室 ,贵州 贵阳 550002)
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-
2494(2002)12-0959-01
作者简介:梁光义 ,男 ,教授 ,博士生导师 Tel:(0851)3804442-8030
蜘蛛香为败酱科缬草属植物蜘蛛香(Valeriana jata-
mansi Jones),药用其根茎及根 , 分布于河南 、湖北 、四川 、贵
州 、云南等省。我们采用水蒸气蒸馏法从蜘蛛香的根及根茎
中提取挥发性成分 ,以 GC-MS 进行分离 , 共鉴定出 37 个挥
发性成分 ,并利用峰面积归一化法测定其相对百分含量。
1　仪器与实验条件
仪器:气质联用仪为 HP6890/HP5973 GC/MS 联用仪
(美国惠普公司)。
气相色谱条件:色谱柱为 HP-5MS 5% Phenyl Methyl
Siloxane 30 m×0.25 mm×0.25 μm 弹性石英毛细管柱 , 柱
温:50 ～ 260℃(4 ℃·min-1), 恒温至完成分析;汽化室温度:
250℃;载气:高纯 He(99.999%);柱前压:53.66 kPa;载气
流量:1.0 mL·min-1;进样量:1 μL(乙醚溶液);分流比:40∶
1。
质谱条件:离子源:EI 源;离子源温度:230℃;四极杆温
度:150℃;电子能量:70 eV;发射电流:34.6 μA;倍增器电
压:1 341 V;接口温度:280℃;溶剂延迟:5 min;扫描范围:10
～ 550 AMU 。
2　方法与结果
2.1　蜘蛛香挥发性成分的提取
采集贵州省蜘蛛香 880g ,经我室严志坚博士鉴定为败酱
科缬草属植物蜘蛛香 Valeriana jatamansi Jones。将其切碎 ,
常压水蒸汽蒸馏 6h , 用乙醚萃取 2 次 ,除去乙醚 , 用无水硫酸
钠除去水分 , 过滤 , 获得具有特殊气味的浅黄色油状物 1.2
g ,得油率为0.14%。
2.2　定性分析
取蜘蛛香挥发性成分 1 μL(乙醚溶液), 用 GC-MS 分析
鉴定 ,共检出 68 个峰及对应的质谱峰 ,通过 HP MSD化学工
作站检索 Nist98 标准质谱图库和 WILEY275 质谱图库 , 并
结合有关文献 ,确认了 37 种化学成分 , 并按峰面积归一化法
进行计算求得各化学成分在挥发油中的相对百分含量共计
83.40%。结果见表 1。
表 1　蜘蛛香挥发油的化学成分
Tab 1 　Chemical constituents of vola tile oil from Valeriana
jatamansi Jones g rown in Guizhou province
保留时间 化合物 分子式 相对含量
/min / %
5.87 α-蒎烯(α-pioene) C10H16 1.23
6.21 α-小茴香烯(α-fencene) C10H16 0.76
6.25 莰烯(camphene) C10H16 2.84
7.00 β-蒎烯(β-pinene) C10H16 0.48
8.40 对聚伞花烃(P-cymene) C10H14 0.07
8.52 柠檬烯(limonene) C10H16 0.29
9.48 γ-萜品烯(γ-te tpinene) C10H16 0.07
13.00 L-龙脑(L-bo rneo l) C10H18O 0.48
13.39 萜品烯-4-醇(terpinen-4-ol) C10H18O 0.10
13.85 丙酸里哪酯(linaly lpropionate) C13H22O2 0.19
15.17 2-异丙基-甲氧基-4-甲基苯 C11H16O 0.46
　(2-isopropy l-methoxy-4-
　me thy lbenzene)
15.33 百里基甲基酯 C11H16O 0.19
　(thymy l methy l ether)
17.04 乙酸龙脑酯(borny l aceta te) C12H20O2 13.07
19.09 α-terpineny l aceta te C12H20O2 0.16
20.11 β-绿叶烯(β-patchoulene) C15H24 3.29
20.46 β-榄香烯(β-elemene) C15H24 1.91
21.32 β-石竹烯(β-caryophyllene) C15H24 0.91
21.82 α-香柠檬烯(α-bergamotene) C15H24 0.23
21.91 α-愈创烯(α-guaiene) C15H24 2.36
22.00 塞舌尔烯(seychellene) C15H24 4.74
22.37 α- 草烯(α-humulene) C15H24 3.48
22.44 α-绿叶烯(α-patchoulene) C15H24 1.71
22.54 α-古芸烯(α-gurjunene) C15H24 3.67
23.36 β-蛇床烯(β-selinene) C15H24 0.36
23.57 朱栾倍半萜 1-valencene C15H24 0.85
23.63 α-蛇床烯(α-selinene) C15H24 1.16
23.98 δ-愈创烯(δ-guaiene) C15H24 8.75
24.31 7-表-α-蛇床烯(7-epi-α-selinene) C15H24 1.57
25.24 榄香醇(elemo l) C15H26O 0.20
26.24 蓝桉醇(globulo l) C15H26O 0.20
26.47 喇叭茶醇(ledol) C15H26O 0.12
26.97 草烯氧化物(humulene epoxide) C15H24O 0.15
27.62 10-表-γ-桉叶油醇(10-epi-γ- C15H26O 0.20
　eudesmo l)
28.25 刺蕊草醇(pogo sto l) C16H28O 3.92
28.38 广藿香醇(patchouli alcohol) C15H26O 22.60
28.60 布藜醇(bulnesol) C15H26O 0.32
31.14 德米斯醇(drimenol) C15H26O 0.31
3　小　结
蜘蛛香挥发油中的萜类化合物是存在于植物界的一大
类化合物 ,还具有多种生物活性 , 值得进一步研究。
(收稿日期:2002-04-22)
·959·中国药学杂志 2002年 12月第 37卷第 12期　　　　　　　　　　 Chin Pharm J , 2002 December , Vol.37 No.12