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亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠脂代谢的影响及其抗氧化作用



全 文 :[6] 吕 媛,陈韵岱,骆景光,等 . NF-κB 激活在兔急性心肌
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亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠脂代谢的影响及其抗氧化作用
唐慧勤, 冯 旭* , 阎 莉, 卫智权
(广西中医药大学,广西 南宁 530001)
收稿日期:2012-11-29
基金项目:广西自然科学基金项目 (2011GXNSFF018006) ;广西中医药大学校级课题 (2006034)
作者简介:唐慧勤 (1979—) ,女,硕士,讲师,主要从事药理学和中药药理学。Tel: (0771)2279423,E-mail:478839447@ qq. com
* 通信作者:冯 旭,硕士,副教授,主要从事中药、民族药的新药开发。Tel:(0771)2219877,E-mail:gxnnfx@ yahoo. com. cn
摘要:目的 研究亮叶杨桐总黄酮调节脂质和抗氧化的作用。方法 运用连续喂养高脂饲料的方法建立高脂血症大鼠
模型,随机分为 6 组,即正常组、模型组、血脂康 (300 mg /kg)组、亮叶杨桐总黄酮高、中、低剂量 (200,400,
600 mg /kg)组,连续灌胃给药 35 d,测定血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)、
高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)、谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛
(MDA)及血流流变学指标;测定肝脏 TC、TG。结果 亮叶杨桐总黄酮可显著降低高脂血症大鼠血清 TC、TG、LDL-
C水平 (P < 0. 05) ,提高 HDL-C 水平 (P < 0. 05) ;抑制 TC、TG 在肝脏中的蓄积 (P < 0. 05) ,减少血清中 AST、
ALT水平 (P < 0. 05) ,显著提高血清中 SOD 活性 (P < 0. 05) ,抑制 MDA 产生 (P < 0. 05) ;抑制血小板聚集 (P <
0. 05) ;直接降低全血黏度,尤其是低切血液黏度 (P < 0. 05)。结论 亮叶杨桐总黄酮能够调节高脂血症大鼠血脂水
平,改善血流流变学,保肝及抗氧化,发挥抗动脉粥样硬化作用。
关键词:高脂血症;亮叶杨桐;总黄酮;脂质代谢;抗氧化
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)05-0899-05
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2013. 05. 006
Effects of total flavonoids from Adinandra nitida on lipid metabolism and antioxi-
dative activity in hyperlipidemic rats
TANG Hui-qin, FENG Xu* , YAN Li, WEI Zhi-quan
(Guangxi University of Chinese Medicine ,Nanning 530001,China )
ABSTRACT:AIM To observe the effects of total flavonoids from Adinandra nitida on lipid metabolism and an-
tioxidative activity in hyperlipidemic rats. METHODS The hyperlipidemic rats induced by feeding high lipid di-
et were randomly divided into six groups:normal control,model group,Xuezhikang group (300 mg /kg) ,total fla-
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vonoids from Adinandra nitida groups (200,400,600 mg /kg). Rats were treated daily for thirty-five days. The
contents of total cholesterol (TC) ,triglyeride (TG) ,low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) ,high density
lipoprotein cholesterol (HDL-C) ,aspartate aminotransferase (AST) ,alanine aminotransferase (ALT) ,malondial-
dehyde (MDA)levels,superoxide dismutase (SOD)activity in serum,hemorheological indexes,TC and TG in
liver were determined. RESULTS The contents of TC,TG,LDL-C,AST,ALT,MDA in serum and whole blood
low-shear viscosities reduced significantly (P < 0. 05) ,and TC,TG in liver decreased,too. HDL-C and SOD in
serum significantly increased (P < 0. 05)after administration with total flavonoids from Adinandra nitida. CON-
CLUSION Total flavonoids from Adinandra nitida can inhibit arterioscleros by regulating lipoprotein cholesterol
metabolism,improving hemorheological indexes,protecting liver and enhancing the anti-oxidation.
KEY WORDS:hyperlipidemia;Adinandra nitida;total flavonoids;lipid metabolism;antioxidation
亮叶杨桐系山茶科杨桐属植物亮叶杨桐 Adi-
nandra nitida Merr. ex Li 的干燥叶[1],主要生长在
阴冷潮湿的悬崖峭壁或沟谷溪涧边,在我国的黔、
桂、云、川等省均有分布,尤以平乐县产量最
多[2-3]。该植物具有消炎解毒、降压、退热和止血
等作用,民间用于防治各种炎症、无名肿毒及外伤
等[4]。而现代研究表明,它还有抗肿瘤、抑制癌
基因、抗氧化和抑菌等功效[5-7]。其主要成分黄酮
类的量为 20%左右,是目前发现在自然植物中含
黄酮类量最高的植物之一[8-9]。本研究通过建立高
脂血症大鼠模型,观察亮叶杨桐总黄酮对高脂血症
大鼠的脂质代谢的影响和抗氧化作用。
1 材料
1. 1 药物 亮叶杨桐购自广西平乐县供销社,广
西中医大学药学院中药鉴定教研室廖月葵高级实验
师鉴定为山茶科杨桐属植物亮叶杨桐 Adinandra nit-
ida Merr. ex Li 的干燥叶。血脂康胶囊:北大维信
生物科技有限公司,批号 20050507。
1. 2 动物 健康 SD 大鼠,体质量约 200 ~ 220 g,
雄性,由广西壮族自治区药品检验研究所提供
[SPF 级动物,动物许可证号:SCXK 桂 2003-
0001]。
1. 3 试剂 胆固醇,上海伯奥生物有限公司,批
号 050705;胆盐,杭州微生物试剂有限公司,批
号:20050516;总胆固醇 (TC)试剂盒,德国奥
林巴斯 (Olympus)公司,批号 2575;甘油三酯
(TG)试剂盒德国奥林巴斯 (Olympus)公司,批
号 3112;高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)试剂盒,
德国奥林巴斯 (Olympus)公司,批号 3659;谷草
转氨酶 AST试剂盒,德国奥林巴斯 (Olympus)公
司,批号 1937;谷丙转氨酶 ALT 试剂盒,德国奥
林巴斯 (Olympus)公司,批号 2751;低密度脂蛋
白胆固醇 (LDL-C)试剂盒,中北北控生物科技股
份有限公司产品,批号 242021;超氧化物歧化酶
(SOD)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批号
20051013;丙二醛 (MDA)试剂盒,南京建成生
物工程研究所,批号 20051006;芦丁标准品,中
国药品生物制品检验,批号 0080-9303。
1. 4 仪器 TU-1901 型紫外分光光度计 (北京
普析通用仪器有限责任公司)、L600 台式低速
自动平衡离心机 (长沙湘仪离心机仪器有限公
司)、EL204 电子天平 (梅特勒-托利多仪器
(上海)有限公司)、AU400 全自动生化分析仪
(德国 Olympus)、LG-R-80B 型血液黏度仪和血
小板聚集凝血因子分析仪 (北京中勤世帝科学
仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 药物样品制备[5] 取 1 000 g亮叶杨桐,粉碎
过 20 目筛,用 8 倍 70%乙醇在 70 ℃下浸提 4 h,
共 3 次,合并提取液并过滤,回收溶剂,水相用石
油醚脱酯,再用乙酸乙酯萃取,合并乙酸乙酯萃取
液,减压回收溶剂,得黄绿色粉末,即亮叶杨桐总
黄酮样品。
2. 2 亮叶杨桐总黄酮的测定 准确称取于 120 ℃
干燥至恒定质量的芦丁对照品 15. 20 mg,用甲醇
溶解并稀释至刻度。准确量取此液 1. 0、1. 5、
2. 0、2. 5、3. 0 mL 于 25 mL 量瓶中,分别加 5%
NaNO2 0. 1 mL,放置 6 min,加 10%Al(NO3)3溶液
1. 0 mL,放置 6 min。再加 10%NaOH 10 mL,用蒸
馏水稀释至刻度,混匀,放置 15 min。在 510 nm
处测定溶液吸光度 (A) ,得出总黄酮质量浓度
(C)吸光度 (A)回归方程:A = 11. 289C -
0. 095 11,相关系数 R = 0. 999 7。由标准曲线可知
在 0. 024 03 ~ 0. 072 96 mg /mL 范围内线性关系良
好。将亮叶杨桐总黄酮样品稀释一定质量浓度,精
密吸取 1. 0 mL于 25 mL 量瓶中,同上法处理后测
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定溶液吸光度,将吸光度值代入回归方程计算得总
黄酮的质量浓度,并计算亮叶杨桐总黄酮样品中总
黄酮质量分数为 71. 3%。
2. 3 模型制备[10] 取 SD 大鼠 60 只,体质量
200 ~ 220 g,雄性,适应性喂养一周,按体质量随
机分成 6 组,每组 10 只,即正常组、模型组、血
脂康对照组、亮叶杨桐总黄酮高、中、低剂量组。
除正常组每日给予普通饲料喂养,其余各组每日给
予高脂饲料 (基础饲料 87%、胆固醇 2%、胆盐
1%、猪油 10%) ,连续喂养 5 周。5 周后,大鼠禁
食不禁水 10 h,随机抽取每组 5 只大鼠,共 30 只,
断尾取血,测 TC、TG,确定造模是否成功。
2. 4 给药 造模成功后,于次日给药。正常组和
模型组给药等量蒸馏水,血脂康对照组剂量为 300
mg /kg,亮叶杨桐总黄酮低、中、高剂量组分别为
200、400、600 mg /kg,各组均按 1 mL /100 g 体质
量 ig给药,每日 1 次,连续 35 d。每 3 天称定质
量 1 次,根据体质量调整给药量。用药期间正常组
饲以普通饲料,模型组和各给药组每只大鼠仍给与
高脂饲料以维持模型,自由饮水。
2. 5 标本采集 治疗 35 d后,禁食 (不禁水)12
h,末次给药 1 h 后,10%乌拉坦 1 mL /100 g 腹腔
注射麻醉,取腹主动脉血 6 mL,其中 3 mL血待自
然凝固后,3 000 r /min,离心 10 min,分离血清,
用于测定血清 TC、TG、HDL-C、LDL-C、MDA、
SOD、ALT、AST。另外 1 mL用肝素钠 40 U /mL抗
凝用于测定全血黏度,2 mL 用枸橼酸钠抗凝用于
血小板聚集的测定。同一位置取肝组织用异丙醇提
取,测定肝脏 TC、TG。
2. 6 血清、肝脏脂质和生化指标的测定 取血清
在全自动生化分析仪上按试剂盒要求测定 TC (酶
法)、TG (酶法)、HDL-C (酶法)、LDL-C (清除
法)、MDA (TBA 法)、SOD (黄嘌呤氧化法)、
ALT (IFCC法)、AST (IFCC法)。
2. 7 全血黏度的测定 取 1 mL血液,按 40 U /mL
肝素抗凝,加到血液流变仪测定全血低切、中切、
高切黏度。
2. 8 比浊法测定血小板聚集性 取血 2 mL,500
r /min离心 10 min,制备富血小板血浆 (PRP) ;再
以 3 000 r /min 离心 10 min,制备贫血小板血浆
(PPP)。调节 PRP 中血小板密度约在 200 × 109
L -1,以终浓度 5 μmol /L 的 ADP 为血小板聚集诱
导剂,采用比浊法于 37℃测定血小板最大聚集率。
2. 9 统计方法 用 SPSS11. 0 统计软件统计,组间
比较用单因素方差分析,结果以 x ± s 表示。P <
0. 05 有统计学意义。
3 结果
3. 1 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠血清中脂质
水平的影响 模型组血清 TC、TG及 LDL-C均明显
升高,HDL-C明显降低 (与正常组比,P < 0. 05) ,
说明高脂血症大鼠模型成功。用亮叶杨桐总黄酮治
疗后,低、中、高剂量组血清 TC、TG、LDL-C 水
平均明显降低 (P < 0. 05) ,HDL-C水平明显升高。
血脂康组亦可降低血清 TC、TG 及 LDL-C (P <
0. 05) ,但对 HDL-C无影响。结果见表 1。
表 1 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠血清中脂质水平的影响 (x ± s,n =10)
Tab. 1 Effect of total flavonoids from Adinandra nitida on serum lipid levels in hyperlipidemic rats (x ± s,n =10)
组 别
剂量 /
(mg·kg -1)
TC /
(mmol·L -1)
TG /
(mmol·L -1)
HDL-C /
(mmol·L -1)
LDL-C /
(mmol·L -1)
正常组 - 0. 74 ± 0. 09 1. 39 ± 0. 24 1. 09 ± 0. 20 0. 33 ± 0. 06
模型组 - 1. 39 ± 0. 45* 3. 48 ± 0. 78* 0. 81 ± 0. 12* 1. 35 ± 0. 32*
血脂康组 300 1. 05 ± 0. 08△ 2. 10 ± 0. 21△ 0. 81 ± 0. 12 0. 75 ± 0. 08△
亮叶杨桐总黄酮低剂量组 200 1. 01 ± 0. 14△ 2. 96 ± 0. 98 0. 95 ± 0. 13△ 1. 13 ± 0. 28
亮叶杨桐总黄酮中剂量组 400 0. 98 ± 0. 22△ 2. 76 ± 0. 54△ 0. 94 ± 0. 15△ 1. 11 ± 0. 27
亮叶杨桐总黄酮高剂量组 600 0. 85 ± 0. 19△ 2. 59 ± 0. 61△ 0. 81 ± 0. 08 0. 98 ± 0. 27△
注:与正常组比较,* P < 0. 05;与模型组比较,△P < 0. 05。表 2 ~ 4 同。
3. 2 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠血清 SOD、
MDA、AST和 ALT 的影响 模型组大鼠与正常对
照组比较,血清中 SOD 显著下降 (P < 0. 05) ,
MDA显著上升 (P < 0. 05) ,提示模型组大鼠抗氧
化能力下降,脂质过氧化物生成增多;而 AST、
ALT明显升高 (P < 0. 05) ,表明肝功能受到损伤。
亮叶杨桐总黄酮低剂量可显著升高血清中 SOD 水
平 (P < 0. 05) ,各剂量组均可显著降低血清中
MDA水平 (P < 0. 05)。而血脂康组 SOD 和 MDA
与模型组比无统计意义。结果显示,亮叶杨桐总黄
酮的抗氧化能力较强。此外,亮叶杨桐总黄酮低、
中、高剂量组均可降低其肝脏 TC、TG 和血清
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AST、ALT水平 (P < 0. 05)。血脂康组亦可减低肝
脏 TC、TG及血清 AST、ALT水平 (P < 0. 05) ,亮
叶杨桐总黄酮作用与其相似。结果见表 2。
表 2 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠血清 SOD、MDA、AST和 ALT的影响 (x ± s,n =10)
Tab. 2 Effect of total flavonoids from Adinandra nitida on serum SOD,MDA,AST and ALT in hyperlipidemic rats (x ± s,
n =10)
组 别
剂量 /
(mg·kg -1)
SOD /
(U·L -1)
MDA /
(mmol·L -1)
AST /
(U·L -1)
ALT /
(U·L -1)
正常组 - 425. 46 ± 14. 69 4. 01 ± 0. 76 255. 71 ± 43. 60 65. 15 ± 12. 68
模型组 - 404. 60 ± 16. 16* 6. 80 ± 2. 56* 332. 69 ± 43. 46* 109. 77 ± 13. 62*
血脂康组 300 426. 26 ± 47. 94 5. 13 ± 1. 86 260. 59 ± 35. 79△ 70. 03 ± 8. 41△
亮叶杨桐总黄酮低剂量组 200 440. 21 ± 18. 58△ 4. 76 ± 1. 90△ 315. 99 ± 32. 69 81. 52 ± 9. 10△
亮叶杨桐总黄酮中剂量组 400 411. 16 ± 34. 32 3. 86 ± 1. 03△ 265. 05 ± 62. 71△ 82. 02 ± 15. 39△
亮叶杨桐总黄酮高剂量组 600 397. 35 ± 22. 04 4. 24 ± 0. 79△ 235. 14 ± 54. 14△ 71. 40 ± 5. 09△
3. 3 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠肝脏中 TC、
TG的影响 模型组大鼠肝脏中 TC、TG 明显升高,
与正常对照组比较有显著意义 (P < 0. 05) ,提示
大鼠肝脏可能发生了脂肪变性。亮叶杨桐总黄酮
低、中、高剂量组可降低其肝脏 TC、TG (P <
0. 05)。血脂康组亦可减低肝脏 TC、TG (P <
0. 05) ,亮叶杨桐总黄酮作用与其相似甚至稍强。
结果见表 3。
3. 4 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠全血黏度和
血小板聚集率的影响 模型组大鼠与正常对照组比
较,血小板聚集率增加 (P < 0. 05) ,低、中切全
血黏度显著上升 (P < 0. 05) ,高切全血黏度无显
著意义,提示高脂血症大鼠血流变学发生了变化。
亮叶杨桐总黄酮低、高剂量能显著抑制血小板聚集
率 (P < 0. 05) ;亮叶杨桐总黄酮中、高剂量能降
低大鼠低切全血黏度 (P < 0. 05) ,高剂量降低中
切全血黏度 (P < 0. 05) ,但对高切全血黏度均无
影响。血脂康仅降低血小板聚集率 (P < 0. 05) ,
对全血黏度均无影响。结果见表 4。
表 3 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠肝脏中 TC、TG 的
影响 (x ± s,n =10)
Tab. 3 Effect of total flavonoids from Adinandra nitida on
liver TC,TG in hyperlipidemic rats (x ± s,n =
10)
组 别
剂量 /
(mg·kg -1)
TC /
(mmol·L -1)
TG /
(mmol·L -1)
正常组 - 1. 49 ± 0. 70 2. 80 ± 0. 73
模型组 - 5. 87 ± 0. 92* 6. 94 ± 1. 06*
血脂康组 300 4. 28 ± 0. 72△ 5. 78 ± 0. 12△
亮叶杨桐总黄酮低剂量组 200 4. 07 ± 0. 66△ 4. 92 ± 1. 11△
亮叶杨桐总黄酮中剂量组 400 4. 90 ± 0. 48△ 5. 76 ± 0. 81△
亮叶杨桐总黄酮高剂量组 600 5. 40 ± 0. 72 5. 37 ± 1. 45△
表 4 亮叶杨桐总黄酮对高脂血症大鼠全血黏度和血小板聚集率的影响 (x ± s,n =10)
Tab. 4 Effect of total flavonoids from Adinandra nitida on blood viscosity and platelet maximum aggregation rate in hyperlip-
idemic rats (x ± s,n =10)
组 别
剂量 /
(mg·kg -1)
全血黏度
低切 / (mPa·s) 中切 / (mPa·s) 高切 / (mPa·s)
血小板聚集率 /%
正常组 - 4. 60 ± 0. 59 3. 04 ± 0. 18 2. 71 ± 0. 19 48. 07 ± 8. 27
模型组 - 5. 80 ± 0. 41* 3. 25 ± 0. 16* 2. 73 ± 0. 13 60. 41 ± 5. 87*
血脂康组 300 5. 60 ± 0. 76 3. 17 ± 0. 21 2. 75 ± 0. 13 53. 32 ± 5. 23△
亮叶杨桐总黄酮低剂量组 200 5. 75 ± 0. 64 3. 32 ± 0. 19 2. 92 ± 0. 19 47. 02 ± 6. 47△
亮叶杨桐总黄酮中剂量组 400 5. 26 ± 0. 42△ 3. 14 ± 0. 19 2. 76 ± 0. 10 54. 95 ± 8. 03
亮叶杨桐总黄酮高剂量组 600 4. 79 ± 0. 53△ 3. 06 ± 0. 25△ 2. 74 ± 0. 24 51. 87 ± 6. 47△
4 讨论
动脉粥样硬化是缺血性脑血管病的主要病理基
础,而脂质代谢异常是动脉粥样硬化形成的重要因
素[11-13]。现已知血清 TC、TG 和 LDL-C 水平与动
脉粥样硬化呈正相关,HDL-C 水平与动脉粥样硬
化呈负相关。高脂血症可引起血液流变学的异常,
导致全血黏度增加,红细胞变形能力下降,造成微
循环障碍。在动脉粥样硬化形成的过程中伴有脂质
过氧化损伤,血液和组织细胞中 MDA 水平增多,
也使血小板膜损伤并聚集变形释放出氧自由基,造
成对内皮细胞进一步损伤和平滑肌细胞增殖。
本实验结果表明亮叶杨桐总黄酮可显著降低高
脂血症大鼠血清 TC、TG、LDL-C水平,提高 HDL-
C水平,说明其可通过直接清除血清中脂质,增加
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脂质的逆转运,发挥调节血脂代谢的作用;抑制
TC、TG在肝脏中的聚集,减少血清中 AST、ALT
水平,发挥抗脂肪肝和保护肝功能的作用;显著提
高血清中 SOD活性,抑制 MDA产生,提高机体的
抗氧化能力;对二磷酸腺苷 (ADP)诱导的血小
板聚集有抑制作用;直接降低全血黏度,尤其是低
切血液黏度,同时它也可以间接通过降低血清 TC、
TG,升高 HDL-C,增加红细胞膜流动性,改善高
脂血症大鼠血液流变学而起到调节脂质作用,抗动
脉粥样硬化作用。
亮叶杨桐富含生物活性成分,具有较高营养保
健和药用价值,开发应用的潜力很大。本研究为亮
叶杨桐进一步开发打下基础,有较高的参考价值。
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桉油精对补骨脂素体外抗肿瘤活性的增效作用研究
马兴苗1, 周 静1, 范 玲1, 李 爽1, 刘志辉2 *
(1. 南京中医药大学,江苏 南京 210046;2. 江苏省中医院,江苏 南京 210029)
收稿日期:2012-11-08
基金项目:江苏高校优势学科建设工程资助项目 (PAPD)2011 年
作者简介:马兴苗 (1987—) ,女,硕士生,从事中药新剂型与新技术研究。Tel:15905159129,E-mail:519016089@ qq. com
* 通信作者:刘志辉,主任中药师,从事中药制剂开发及中药质量标准研究。Tel:(025)86529291,E-mail:liuzh1008@ 126. com
摘要:目的 考察桉油精对补骨脂素体外抗肿瘤活性的增效作用。方法 采用 MTT 法观察桉油精与补骨脂素对 4 种
人胃癌细胞的生长抑制作用,计算 IC50,选择对补骨脂素最为敏感的一种癌细胞,以确定桉油精与补骨脂素的最佳比
例与浓度。结果 补骨脂素作用于 SGC-7901、MKN-45、BGC-823、MGC-803 的 IC50分别为 36. 23、66. 26、36. 9、
40. 27 μg /mL,白蔻仁挥发油及桉油精单用无显著抗肿瘤作用,但其与补骨脂素联用,有显著的抑制增强作用。选用
对补骨脂素最为敏感的 SGC-7901 进一步研究。结论 桉油精对补骨脂素的体外抗肿瘤活性具有协同作用。桉油精与
补骨脂素配伍的最佳抑制比例与剂量为 2 ∶ 1,72 ∶ 36 μg /mL。
关键词:补骨脂素;桉油精;人胃癌细胞株;协同作用
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2013)05-0903-06
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2013. 05. 007
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2013 年 5 月
第 35 卷 第 5 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
May 2013
Vol. 35 No. 5