全 文 ：HPLC法测定祖师麻膏药中祖师麻甲素和紫丁香苷
张晓萍1， 丁永辉2* ， 李玲莉3， 张 妍1， 倪 琳4， 杨 锡4
(1．兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000;2．甘肃省食品药品监督管理局，甘肃 兰州 730000;
3．甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000;4．甘肃省食品药品检验所，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2011-03-22
作者简介:张晓萍(1983—) ，女，硕士生，研究方向:从事药物分析研究。Tel:18794894862，E-mail:zh8762151@ 163． com
* 通信作者:丁永辉，男，硕士生导师。Tel:18693102958，E-mail:dingyonghui@ gsda． gov． cn
摘要:目的 建立定量测定祖师麻膏药中祖师麻甲素和紫丁香苷的高效液相色谱法(HPLC)。方法 采用高效液相色谱
法，以二极管阵列检测器(PAD)进行测定。色谱柱 CAPCELL PAK MG C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0． 4%
磷酸(10 ∶ 90) ，体积流量 1． 0 mL /min，检测波长 225 nm，柱温 30 ℃。结果 祖师麻甲素、紫丁香苷进样量分别在 0． 088 8
μg ～ 0． 266 4 μg和 0． 00 57 μg ～ 0． 017 1 μg范围内呈良好的线性关系(祖师麻甲素 r = 0． 999 6;紫丁香苷 r = 0． 999 3) ，
平均回收率分别为99． 95%和 98． 93%，RSD分别为 1． 33%和 1． 76%(n = 9)。结论 本方法快速，简便，结果准确可靠，
重现性好，可用于祖师麻膏药的质量控制。
关键词:祖师麻甲素;紫丁香苷;祖师麻膏药;高效液相色谱法
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)10-1727-04
Determination of daphnetin and syringin in Zushima Plaster by HPLC
ZHANG Xiao-ping1， DING Yong-hui2， LI Lin-li3， ZHANG YAN1， NI Lin4， YANG Xi4
(1． School of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China;2． Gansu Provincial Food and Drug Administration Bureau，Lanzhou 730000，China;
3． Gansu College of TCM，Lanzhou 730000，China;4． Gansu Provincial Institute for Food and Drug Control，Lanzhou 730000，China)
ABSTRACT:AIM To establish an HPLC method for determining daphnetin and syringin in Zushima Plasters
(Barks of root and stem of Daphne giraldii Ntcsche and Daphne tangutica Maxim．)METHODS The HPLC meth-
od was conducted with a PAD detecter and the detection wavelength set at at 225 nm． The column was CAPCELL
PAK MG C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)with mobile phase consisted of acetonitile-0． 4% phosphoric acid (10 ∶
90)and the flow rate was 1． 0 mL /min． The column temperature maintained at 30 ℃ ． RESULTS The standard
curve showed linear in ranges of 0． 088 8 μg － 0． 266 4 μg and 0． 005 7 μg － 0． 017 1 μg for daphnetin and syring-
in，respectively (daphnetin r = 0． 999 6 and syringin r = 0． 999 3)． The average recoveries were 99． 95% and
98． 93% ． The RSD were 1． 33% and 1． 76%，respectively (n = 9)． CONCLUSION This method is quick，sim-
ple and accurate with good reproducibility，which can be used for quality control of Zushima Plasters．
KEY WORDS:daphnetin;syringin;Zushima Plasters;HPLC
祖师麻膏药收载于《卫生部药品标准中药成方
制剂第十八册》，为祖师麻采用传统工艺制成的黑
膏药［1］。具有祛风除湿，活血止痛功能。用于风寒
湿痹、瘀血痹阻经脉，症见肢体关节肿痛、畏寒肢冷、
局部肿胀有硬结或瘀斑;风湿性关节炎、类风湿性关
节炎见上述证候者［2］。祖师麻为瑞香科植物黄瑞
香 Daphne giraldii Ntcsche． 或唐古特瑞香 Daphne
tangutica Maxim的干燥根皮与茎皮［3］，主含香豆素
类、二萜类、木质素类、黄酮类、蒽醌类及甾醇类化学
成分［4-5］，有采用 HPLC 法测定原药材中祖师麻甲
素［6-9］、紫丁香苷［10］及其他苯丙素类成分［11］的文献
报道，但祖师麻膏药原标准无定量控制指标，为了保
证药品质量，本实验采用高效液相色谱法同时测定
祖师麻膏药中的祖师麻甲素和紫丁香苷，方法简便，
灵敏度高，结果准确，重现性较好，可以作为该制剂
的质量控制依据。
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Chinese Traditional Patent Medicine
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1 仪器与试药
1． 1 仪器 Waters e2695 高效液相色谱仪，Waters
2998 二极管阵列检测器(PAD) ;KQ-250B 型超声波
清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;德国 Sartorius
R200D 型分析天平(十万分之一) ;上海梅特勒
AE240 型分析天平(万分之一)。
1． 2 试药 祖师麻甲素对照品(供定量测定用，批
号:0900-200001)、紫丁香苷对照品(供定量测定用，
批号:111574-200201) ，均购自中国药品生物制品检
定所;祖师麻膏药(武威泰康制药有限公司提供，批
号为 20100503、20100504、20100505) ，乙腈为色谱
纯;水为超纯水;其它试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2． 1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:CAP-
CELL PAK MG C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;PAD
检测器;以乙腈-0． 4%磷酸(10 ∶ 90)为流动相;体积
流量 1． 0 mL /min;检测波长 225 nm;柱温 30 ℃。
2． 2 对照品溶液的配制 精密称取祖师麻甲素对
照品 8． 88 mg，置 100 mL 量瓶中，用 85%甲醇溶解
并定容至刻度，备用［12］。精密称取紫丁香苷对照品
5． 70 mg，置 100 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻
度，备用。分别精密吸取上述祖师麻甲素对照品溶
液 10 mL和紫丁香苷对照品溶液 1 mL，置 100 mL
量瓶中，用 85%甲醇定容至刻度，摇匀，作为混合对
照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 取本品，除去背衬，剪碎，
混匀，取约 5g，精密称定，精密加入水 50 mL，称定质
量，超声 1 h(频率 40 Hz、功率 250 W) ，放冷，再称
定质量，用水补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤
液。滤液用 0． 45 μm滤膜过滤，即得。
2． 4 阴性对照溶液的制备 按处方比例及制备工
艺，配制不含祖师麻药材的阴性样品，同法制备阴性
样品溶液。
2． 5 方法的专属性考察 按照上述色谱条件，精密
吸取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶
液各 20 μL，分别注入液相色谱仪。结果:供试品中
祖师麻甲素和紫丁香苷与相邻组分达到基线分离，
且峰形良好，样品中其他组分对祖师麻甲素和紫丁
香苷的测定无干扰，理论塔板数按紫丁香苷计不小
于 4 000。结果见图 1。
2． 6 线性关系的考察 取 2． 2 项下的混合对照品
溶液(含祖师麻甲素 8． 88 μg /mL，紫丁香苷 0． 57
μg /mL)10． 0、15． 0、20． 0、25． 0、30． 0 μL 分别进样，
按上述色谱条件记录色谱图，测定峰面积，以峰面积
为纵坐标，祖师麻甲素和紫丁香苷对照品进样量为
横坐标，进行线性回归，得回归方程:祖师麻甲素 Y
= 2． 685 8 × 106X － 6． 010 × 103，r = 0． 999 6;紫丁香
苷 Y = 4． 187 6 × 106X － 1． 373 4 × 103，r = 0． 999 3。
以上结果表明:祖师麻甲素进样量在 0． 088 8 μg ～
0． 266 4 μg、紫丁香苷进样量在 0． 005 7 μg ～
0． 017 1 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
A
B
C
图 1 祖师麻膏药高效液相色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms of Zushima Plasters
A．对照品 B．祖师麻膏药样品 C．阴性样品 1．紫丁香苷 2．祖
师麻甲素
A． reference substances B． sample of Zushima Plasters C． negative
sample 1． syringin 2． daphnetin
2． 7 精密度试验 取 2． 2 项下的混合对照品溶液，
连续进样 6 次，每次进样 20 μL，结果:祖师麻甲素
的 RSD为 0． 37%，紫丁香苷的 RSD为 2． 21%。
2． 8 重复性试验 取同一个批号的祖师麻膏药
(批号:20100505) ，平行取样 6 份，按 2． 3 项方法操
作并检测。祖师麻甲素平均质量分数 0． 18 mg /g，
RSD为 0． 76%;紫丁香苷平均质量分数为 26． 54
μg /g，RSD为 2． 11%，表明方法重复性较好。
2． 9 稳定性试验 取同一批供试品溶液
(20100505) ，于 0、4、8、12、16、20、24 h 按上述色谱
条件分别进样 20 μL，按峰面积计算，祖师麻甲素的
RSD值为 0． 80%，紫丁香苷的 RSD值为 1． 84%，表
明供试品溶液中祖师麻甲素和紫丁香苷在 24 h 内
稳定。
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2． 10 回收率试验 取已知量的供试品(祖师麻甲
素:0． 18 mg /g，紫丁香苷:26． 54 μg /g)约 2． 5 g，分
成 3 组(每组 3 份) ，置 50 mL 量瓶中，每组分别精
密加入祖师麻甲素对照品溶液(0． 088 8 mg /mL)4、
5、6 mL，加入紫丁香苷对照品溶液(13． 2 μg /mL)4、
5、6 mL，加水适量，超声处理 60 min，取出，放冷，加
水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，进样，测定，结
果见表 1 ～ 2。
表 1 祖师麻甲素加样回收率试验结果 (n =9)
Tab． 1 Results of recovery test of daphnetin (n =9)
称样量
/ g
原有量
/mg
标准品加
入量 /mg
测得总
量 /mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
2． 500 4 0． 450 7 0． 355 2 0． 801 6 99． 04
2． 504 1 0． 450 7 0． 355 2 0． 801 2 98． 96
2． 501 2 0． 450 2 0． 355 2 0． 806 5 100． 24
2． 502 5 0． 450 5 0． 444 0 0． 894 3 99． 96 99． 95 1． 33
2． 500 9 0． 450 4 0． 444 0 0． 899 9 101． 22
2． 501 4 0． 450 2 0． 444 0 0． 892 3 99． 57
2． 501 1 0． 450 2 0． 532 8 0． 974 1 98． 02
2． 501 8 0． 450 3 0． 532 8 0． 983 0 99． 99
2． 502 3 0． 450 4 0． 532 8 0． 994 6 102． 54
表 2 紫丁香苷加样回收率试验结果 (n =9)
Tab． 2 Results of recovery test of syringin (n =9)
称样量
/ g
原有量
/mg
标准品加
入量 /mg
测得总
量 /mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
2． 500 4 66． 360 6 52． 80 117． 322 4 97． 23
2． 504 1 66． 458 8 52． 80 118． 600 8 99． 01
2． 501 2 66． 381 8 52． 80 116． 951 4 96． 64
2． 502 5 66． 416 4 66． 00 130． 775 9 97． 53 98． 93 1． 76
2． 500 9 66． 373 9 66． 00 132． 440 3 100． 10
2． 501 4 66． 387 2 66． 00 131． 417 9 98． 54
2． 501 1 66． 379 2 79． 20 144． 663 2 98． 62
2． 501 8 66． 397 8 79． 20 146． 945 7 102． 03
2． 502 3 66． 411 0 79． 20 146． 049 3 100． 66
2． 11 样品测定 取 3 批供试品，同 2． 3 项供试品
溶液的制备方法处理样品，作为供试品溶液。用
0． 45 μm微孔滤膜过滤，各取续滤液 20 μL，注入高
效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，计算样品中祖
师麻甲素和紫丁香苷的量，结果见表 3。
表 3 样品测定结果 (n =3)
Tab． 3 Determination results of sample (n =3)
批号
祖师麻甲素
平均质量
分数 /(mg /g)
RSD /%
紫丁香苷
平均质量
分数 /(μg /g)
RSD /%
20100503 0． 175 6 0． 34 25． 012 4 1． 08
20100504 0． 223 6 0． 26 28． 348 8 1． 29
20100505 0． 193 4 0． 19 26． 994 2 0． 97
3 讨论
3． 1 本实验比较了不同提取溶剂(甲醇，85%甲
醇，水)和不同提取方法(回流法和超声法)的提取
效率，并对超声提取时间(0． 5、1、1． 5 h)进行了考
察，结果显示:用超声法和回流法提取结果没有显著
差异;3 种溶剂，甲醇提取液中祖师麻甲素和紫丁香
苷量均很低，水和 85%甲醇提取液中紫丁香苷的量
相差不大，但水提液中祖师麻甲素的量明显很高，并
可排除膏药基质的干扰。因超声提取更为便捷快
速，所以选择用水做溶剂超声提取，最佳超声时间为
1 h。
3． 2 我们用 PAD检测器分别对祖师麻甲素对照品
溶液和紫丁香苷对照品溶液在 200 nm ～ 400 nm 进
行全波长扫描，结果祖师麻甲素最大吸收波长为
324 nm，紫丁香苷最大吸收波长为 225 nm;因供试
品中紫丁香苷量较低，为了提高检测方法的灵敏度，
选择 225 nm为测定波长，结果祖师麻甲素和紫丁香
苷峰型较好，可满足定量要求。
3． 3 我们曾采用文献报道的方法进行测定［13］，但
紫丁香苷保留时间为 3 min，影响测定结果的重现
性，通过反复试验，确定以乙腈-0． 4%磷酸(10 ∶ 90)
为流动相，紫丁香苷、祖师麻甲素和各杂质峰均可达
到基线分离，且保留时间适中。
3． 4 本方法具有样品预处理简单，在同一色谱条件
下同时测定两种成分的优点，可作为控制祖师麻膏
药质量的依据。
参考文献:
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Chinese Traditional Patent Medicine
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HPLC法测定丹参清解口服液中原儿茶醛和黄芩苷
吴丽红， 储忠英， 刘惠军
(上海市松江食品药品检验所，上海 201600)
收稿日期:2011-06-15
作者简介:吴丽红(1972—) ，女，主管药师，主要从事食品药品检验工作。Tel: (021)57822502，18917168208，E-mail:wulihong@ smda． gov．
cn
摘要:目的 用 HPLC测定丹参清解口服液(丹参、黄芩、白芷、桑白皮、麦饭石)中原儿茶醛和黄芩苷。方法 采用高效
液相色谱法，色谱柱为 C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，以甲醇为流动相 A，以 1%醋酸溶液为流动相 B，梯度洗脱，检测
波长为 280 nm;体积流量 1． 0 mL /min。结果 原儿茶醛对照品在 2． 460 ～ 29． 52 μg /mL范围内呈良好线性关系;黄芩苷
对照品在 4． 843 8 ～ 58． 126 0 μg /mL 范围内呈良好线性关系，原儿茶醛平均加样回收率为 100． 5%(n = 6) ，RSD 为
0． 95%(n = 6) ;黄芩苷平均加样回收率为 100． 5%(n = 6) ，RSD 为 0． 80%(n = 6)。结论 方法简单准确、重现性好，专
属性强，阴性对照无干扰，适用于丹参清解口服液的质量控制。
关键词:丹参清解口服液;HPLC;原儿茶醛;黄芩苷
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)10-1730-04
Determination of protocatechuic aldehyde and baicalin in Danshen Qingjie Oral
Liquid by HPLC
WU Li-hong， CHU Zhong-ying， LIU Hui-Jun
(Shanghai Songjiang Institute for Food and Drug Control，Shanghai 201600，China)
ABSTRACT:AIM To establish a method for determining protocatechuic aldehyde and baicalin in Danshen
Qingjie Oral Liquid (Salviae miltiorrhizae Radix et Rhizoma，Scutellariae Radix，Angelicae dahuricae Radix，Mori
Cortex，Maifahitum)by HPLC． METHODS The HPLC with a C18 column was used． The mobile phases was a
mixture of methanol for current phase A，1% acetic acid solution for current phase B;the form prescribed in the
gradient elution． The detection wavelength was 280 nm，flow velocity was 1． 0 mL /min． RESULTS The linear
ranges were 2． 460 － 29． 52 μg /mL for protocatechuic aldehyde and 4． 843 8 － 58． 126 0 μg /mL for baicalin． The
average recovery of protocatechuic aldehyde was 100． 45%(RSD was 0． 96%)． The average recovery of baicalin
was 100． 30%(RSD was 0． 79%)CONCLUSION The method is simple，accurate，and reproducible with exclu-
sive property． It can be used for quality control of Danshen Qingjie Oral Liquid．
KEY WORDS:Danshen Qingjie Oral Liquid;HPLC;protocatechuic aldehyde;baicalin
丹参清解口服液是复旦大学附属华山医院生产
的医院制剂［1］，由丹参、黄芩、白芷、桑白皮、麦饭石
五味药材组成，其中丹参和黄芩是主药，具有清热解
毒，活血化瘀之功效，在方中起着重要治疗作用。原
制剂质量标准只有丹参和黄芩的定性鉴别和口服剂
项下规定的检查项目，为了能更有效地控制该制剂
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Vol． 33 No． 10