全 文 ：收稿日期:2014-04-23
作者简介:王飞(1978-)，男，博士，讲师，研究方向:药物分析;Tel:024-31207015，E-mail:wangfeiharry@ 126. com。
* 通讯作者:孟宪生，Tel:0411-85890185，E-mail:mxsvvv@ 126. com。
不同产地余甘子黄酮类成分指纹图谱研究
王 飞1，王 帅1，2，孟宪生1，2* ，包永睿1，2，朱英环1
(1. 辽宁中医药大学，辽宁 沈阳 110032;2. 辽宁省现代中药研究工程实验室，辽宁 大连 116600)
摘要 目的:建立不同产地余甘子黄酮类成分高效液相色谱指纹图谱。方法:采用高效液相色谱法，Agilent
C18色谱柱，以 0. 5%甲酸水(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱，在 254 nm波长下对 10 个不同产地的余甘子药材
黄酮类成分进行测定，建立余甘子黄酮类成分的 HPLC指纹图谱，对其品质进行评价。结果:建立了余甘子黄酮类
成分指纹图谱，10 个不同产地余甘子黄酮类成分有 18 个共有峰，除广西、广东产余甘子外，其他产地 18 种黄酮类
成分指纹图谱相似度均在 0. 90 以上。结论:该方法简便、准确、重复性好，可为余甘子药材有效成分的品质评价及
其质控标准的制定提供科学依据。
关键词 余甘子;黄酮类成分;HPLC指纹图谱
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)11-1984-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 11. 018
HPLC Fingerprint Analysis of Flavonoids of Phyllanthi Fructus from Different Habitats
WANG Fei1，WANG Shuai1，2，MENG Xian-sheng1，2，BAO Yong-rui1，2，ZHU Ying-huan1
(1. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，China;2. Liaoning Province Modern Traditional Chinese
Medicine Ｒesearch and Engineering Laboratory，Dalian 116600，China)
Abstract Objective:To establish the HPLC fingerprint of flavonoids of Phyllanthi Fructus from different habitats. Methods:HPLC
method was adopted. The flavonoids composition of Phyllanthi Fructus from 10 different habitats was determined on an Agilent C18 chro-
matographic column with 0. 5% formic acid water(A)-acetonitrile(B)as the mobile phase in gradient elution under the wavelength of
254 nm. The HPLC fingerprints of flavonoids composition of Phyllanthi Fructus were established to evaluate the qualitiy of
them. Ｒesults:The HPLC fingerprints of flavonoids composition of Phyllanthi Fructus from 10 different habitats were established. 18
common peaks were found and the similarities of them were more than 0. 90 except the ones from Guangxi and Guangdong. Conclusion:
The method is simple，accurate and repeatable. It can be used for research and quality control of the effective components in Phyllanthi
Fructus.
Key words Phyllanthus emblica L.;Flavonoids;HPLC fingerprint
余甘子系藏族习用药材，为大戟科植物余甘子
Phyllanthus emblica L. 的干燥成熟果实〔1〕，在热带、
亚热带地域分布广泛，在我国主产于云南、贵州、四
川、广东、广西、福建等地，其中以福建、云南两省的
产量最高〔2〕。余甘子味甘、酸、涩，性凉;归肺、胃
经;具有清热凉血、消食健胃、生津止咳的功效〔1〕;
主要用于抗微生物感染、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、降
血压等〔2，3〕。现代药理研究表明，余甘子药材具有
多种生物活性的主要药效成分为黄酮及酚酸类化合
物，本实验室前期研究表明余甘子所含黄酮类成分
对肝癌细胞增殖具有较好的抑制作用〔3，4〕。
在前期研究的基础上，本文针对不同产地余甘
子药材黄酮类成分进行研究，建立余甘子药材黄酮
类成分指纹图谱，以期为其有效成分的品质评价、质
量控制及临床应用提供科学依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪;ACCU-
LAB ALC-11C. 4 型电子天平(德国 Sartorius集团)。
1. 2 药材与试剂 余甘子药材来源产地见表 2，经
辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为大戟科植物余甘
子 Phyllanthus emblica L. 的干燥成熟果实。芦丁对
照品(中国食品药品检定研究院，批号:20080328)。
聚酰胺树脂(沧州宝恩化工有限公司);乙腈为色谱
纯;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Agilent C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm)柱;流动相:0. 5 %甲酸水(A)-乙腈(B)，
梯度洗脱(0 ～ 10 min，5% ～ 10% B;10 ～ 10. 01 min，
10% ～12%B;10. 01 ～ 20 min，12% ～ 13% B;20 ～ 30
min，13% B;30 ～ 60 min，13% ～ 21% B);柱温:30
℃;流速:1. 0 mL /min;检测波长:254 nm;进样量:5
μL。
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2. 2 供试品溶液的制备 取余甘子药材粉末(过
16 目筛)3 g，精密称取，加入 33 mL 70%乙醇回流
提取 3 次，每次 1. 5 h，过滤，将滤液挥至无醇味，加
水调整浓度至 0. 15 g /mL。取浸泡好的聚酰胺树脂
15 mL，湿法装柱，水冲洗至无醇味，上样 17 mL，静
置 0. 5 h，以 0. 5 mL /min 的速度将药液过树脂，用
90 mL水以 1. 5 mL /min 的速度洗脱，弃去洗脱液
后，用 105 mL 50%乙醇以 0. 5 mL /min的速度洗脱，
收集洗脱液，水浴蒸干，得到总黄酮(质量分数 ＞
50%)〔4-6〕，分别称取总黄酮 0. 15 g，加水溶解定容至
25 mL量瓶中，即得。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品适
量，置 25 mL量瓶中，加甲醇制成浓度为 0. 200 mg /
mL的溶液，即得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验:取 1 号余甘子药材粉末约 3
g，精密称定，制备供试品溶液，连续进样 6 次，结果
各色谱峰相对保留时间 ＲSD 在 0. 15% ～ 1. 79%之
间，相对峰面积 ＲSD 在 1. 66% ～ 2. 73%之间，均小
于 5. 0%，表明仪器精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验:取 1 号余甘子药材 6 份，每份
约 3 g，精密称定，制备供试品溶液，测定，结果各色
谱峰相对保留时间 ＲSD在 0. 26% ～2. 10%之间，相
对峰面积 ＲSD 在 1. 35% ～ 3. 24% 之间，均小于
5. 0%，表明方法重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验:取 1 号余甘子药材粉末约 3
g，精密称定，制备供试品溶液，分别在 0、2、8、12、
24、48 h 进样分析，结果各色谱峰相对保留时间
ＲSD在 0. 17% ～1. 93%之间，相对峰面积的 ＲSD在
1. 06% ～2. 83%之间，均小于 5. 0%，表明供试品溶
液在 48 h内稳定。
2. 5 HPLC指纹图谱分析
2. 5. 1 余甘子黄酮类成分 HPLC 指纹图谱的测
定:取 10 个不同产地的余甘子药材，分别按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液，“2. 1”项下色谱条件测
定，得到 10 批余甘子黄酮类成分的指纹图谱;典型
色谱图见图 1，对照品色谱图见图 2。
图 1 余甘子黄酮类成分指纹图谱(示共有峰)
图 2 芦丁对照品色谱图
2. 5. 2 余甘子黄酮类成分指纹图谱的建立:通过
对 10 批余甘子药材黄酮类成分供试品溶液 HPLC
的分析，得到 10 批余甘子黄酮类成分特征图谱，经
过比较，发现 18 个峰为各批供试品溶液共有，本实
验以 18 号芦丁峰为参照，对这 17 个共有峰的相对
峰面积进行计算，结果见表 1。
2. 5. 3 不同产地余甘子黄酮类成分相似度评价:
建立 10 批余甘子药材黄酮类成分样品指纹图谱，应
用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似
表 1 10 批余甘子药材黄酮类成分特征图谱共有峰的相对峰面积
批号
特征图谱共有峰的相对峰面积
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18(S)
1 0. 0442 0. 4739 0. 0517 0. 0402 0. 1147 0. 1981 0. 1045 0. 0865 0. 1607 0. 0653 0. 8982 0. 2809 0. 0250 0. 0516 0. 2218 0. 0534 0. 0487 1
2 0. 0355 0. 3776 0. 0524 0. 0915 0. 1284 0. 2649 0. 1927 0. 1471 0. 2633 0. 0659 1. 6485 0. 3712 0. 0990 0. 0608 0. 5336 0. 0356 0. 0468 1
3 0. 0221 0. 2455 0. 0360 0. 0386 0. 0464 0. 1647 0. 1411 0. 2633 0. 1733 0. 0651 1. 1793 0. 2744 0. 1018 0. 0455 0. 4943 0. 0260 0. 0509 1
4 0. 0615 0. 3188 0. 1359 0. 0824 0. 1040 0. 1820 0. 1606 0. 1327 0. 3126 0. 0639 1. 9509 0. 2547 0. 2326 0. 0303 1. 3465 0. 0392 0. 1429 1
5 0. 0255 0. 4221 0. 0516 0. 0269 0. 1073 0. 2102 0. 0974 0. 1321 0. 2389 0. 0489 1. 1429 0. 2965 0. 0619 0. 0485 0. 2672 0. 0375 0. 0354 1
6 0. 0407 0. 4299 0. 0624 0. 0471 0. 1553 0. 2242 0. 1587 0. 1304 0. 2059 0. 0335 1. 3528 0. 3295 0. 0887 0. 0455 0. 4153 0. 0605 0. 0656 1
7 0. 0220 0. 2206 0. 0517 0. 0356 0. 1240 0. 1932 0. 0742 0. 2939 0. 6153 0. 0693 2. 0534 0. 3602 0. 0725 0. 0730 0. 4765 0. 0413 0. 0549 1
8 0. 0269 0. 3141 0. 0368 0. 0500 0. 1156 0. 2420 0. 2066 0. 3257 0. 2784 0. 0484 1. 7045 0. 3469 0. 1182 0. 0541 0. 6301 0. 0372 0. 0789 1
9 0. 0701 0. 3625 0. 1613 0. 0936 0. 1751 0. 1822 0. 2066 0. 2917 0. 5891 0. 0752 1. 9663 0. 4712 0. 1349 0. 0979 1. 1651 0. 0409 0. 1334 1
10 0. 0157 0. 2270 0. 0445 0. 0328 0. 1009 0. 1666 0. 1009 0. 2909 0. 4670 0. 0553 1. 7186 0. 3222 0. 0682 0. 0554 0. 4672 0. 0292 0. 0601 1
ＲSD /% 49. 24 26. 32 63. 42 47. 13 29. 21 16. 14 33. 61 43. 32 50. 60 21. 05 25. 39 18. 90 55. 74 32. 58 61. 03 25. 64 51. 47 －
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度评价系统”(2004 A 版)建立共有模式，并对四
川、云南、贵州、福建等 10 个产地的余甘子药材提取
纯化后的黄酮类成分的指纹图谱进行相似度分析，
以相关系数(中位数)代表其相似度，与余甘子黄酮
类成分对照指纹图谱(共有模式)比较，10 批余甘子
黄酮类成分的相似度见表 2，样品色谱图和对照谱
图见图 3。
图 3 10 个不同产地余甘子药材黄酮类成分 HPLC指纹图谱与对照指纹图谱
表 2 10 个不同产地余甘子药材黄酮类成分相似度评价结果
样品编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
产地 四川 云南 贵州 广西 福建 四川盐源 云南雄州 新疆 广东 福建漳州
相似度 1 0. 946 0. 953 0. 665 0. 985 0. 966 0. 900 0. 933 0. 666 0. 920
由表 2 可见，以四川产余甘子药材黄酮类成分
为参照，除广西、广东外，其他产地余甘子图谱与之
比较相似度均大于 0. 90，可作为推荐品使用。
3 讨论
本实验前期对余甘子黄酮类化合物的分离、纯
化工艺进行考察，富集得到的总黄酮质量分数达
50%以上。经前期药理实验研究发现，其对肝癌细
胞增 殖 具 有 较 好 的 抑 制 作 用，抑 制 率 可 达
92. 79%〔4〕。本文首次针对余甘子药材中黄酮类成
分进行指纹图谱研究，为其有效成分的质量控制提
供了良好的借鉴。
我国余甘子资源丰富，广泛分布于云南、四川、
福建、贵州、广西等地。本实验建立了四川、云南、贵
州等 10 个主要产地余甘子药材黄酮类成分 HPLC
指纹图谱，发现除广西、广东外各产地余甘子黄酮类
成分与四川产比较相似度均在 0. 90 以上，为其质量
评价与临床合理用药提供了参考。
参 考 文 献
［1］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］．一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:163.
［2］杨顺楷，杨亚力，杨维力 . 余甘子资源植物的研究与开
发进展［J］． 应用与环境生物学报，2008，14(6):846-
854.
［3］朱英环，孟宪生，包永睿，等 . 余甘子总酚酸和总黄酮配
伍抑制肝癌细胞增殖及对免疫功能的调节作用［J］．中
国实验方剂学杂志，2012，18(3):132-135.
［4］王飞 . 余甘子抗癌化学物质组分及作用机制研究［D］．
沈阳:辽宁中医药大学，2011.
［5］朱英环 . 余甘子质量评价及抗肝癌有效组分研究［D］．
沈阳:辽宁中医药大学，2011.
［6］王飞，包永睿，孟宪生，等 . 不同产地余甘子酚酸类成分
HPLC指纹图谱研究［J］．亚太传统医药，2014，10(4):
31-33.
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