全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(2)∶198 ～ 200
用可能是其保护心脏的作用机制之一。实验中模型
小鼠心肌组织中 GSH － Px、GＲ 的活性均较正常对
照小鼠的低，而用芹菜素的小鼠心肌组织中 GSH －
Px、GＲ的活性增加，尤其大剂量的作用更为明显。
提示芹菜素可通过增加 GＲ活性使氧化型谷胱甘肽
还原为 GSH，同时通过增加 GSH － Px的活性增强了
清除过氧化物而使其底物 GSH 减少，因此，芹菜素
的抗氧化作用可能主要是通过增加心肌组织中
GSH － Px和 GＲ的活性来实现的。
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收稿日期:2014 － 03 － 27
作者简介:谭国生(1985—) ，男，京族，正攻读中西医结合专业的硕士学位。
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:djzhang@ nwipb． cas． cn
五味余甘子散对大鼠心肌缺血再灌损伤的保护作用
谭国生，姜若菲，李永平，李福安，张得钧*
(青海大学医学院，青海 西宁 810001)
摘要:目的 探讨藏方五味余甘子散对心肌缺血再灌损伤大鼠的保护作用。方法 将 96 只 SD大鼠随机均分成五味余甘子
散高、中、低剂量组及伪手术组、模型组和阳性对照组，连续给药 10 d，在末次给药 24 h 后，进行造模，结扎左冠前室间支 30
min，复灌 40 min。测定血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的含量及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧
化物酶(GSH － Px)的活性和丙二醛(MDA)的含量，并比较各组心肌的超微结构变化。结果 五味余甘子散能显著降低血清
中 LDH和 CK的含量，同时能提高心肌组织中 SOD、GSH － Px的活性，降低 MDA的活性。结论 五味余甘子散对大鼠心肌缺
血再灌损伤有保护作用，其机制可能与抑制自由基相关酶有关。
关键词:五味子余甘子散;心肌缺血;再灌注损伤;自由基;心肌超微结构;乳酸脱氢酶;肌酸激酶
中图分类号:Ｒ96 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)02 － 0198 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 02． 024
Effects of Wuwei Yuganzi san on myocardial ischemia － reperfusion injury in the rats
TAN Guo － sheng，JIANG Ｒuo － fei，LI Yong － ping，LI Fu － an，ZHANG De － jun
(Medical College of Qinghai University，Xining，Qinghai，810001 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To investigate the protective effect of Tibetan medicinal formula Wuwei Yuganzi san(WYS)on myocardial
ischemia － reperfusion(I /Ｒ)injury model in rats．METHODS 96 SD rats were assigned randomly to six groups including WYS high，
middel and low dosage groups，sham group，model group and positive control group． Ｒats were administrated consecutively for 10 days．
24 hours after the last administration，the model was made by ligation of the left anterior interventricular branch，crown for 30 minutes，
and then reperfused for 40 minutes． The lactate dehydrogenase (LDH)，creatine kinase(CK)levels in the serum and the superoxide dis-
mutase (SOD) ，glutathione peroxidase (GSH － Px)activity and malondialdehyde aldehyde (MDA)content in the myocardial tissue
were measured． The changes of myocardial ultrastructural were compared． ＲESULTS WYS can reduce significantly serum LDH and
CK levels，simultaneously improve SOD and GSH － Px activity，decrease MDA activity as well． CONCLUSION WYS has a protective
effect on myocardial I /Ｒ injury，which probably is associated with the inhibition of free radical － related enzymes．
Key words:Wuwei Yuganzi San;Myocardial;Ischemia － reperfusion injury;Free radical;Myocardial ultrastructural;LDH;CK
CLC number:Ｒ96 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2015)02 － 0198 － 03
随着人们生活水平的提高及老龄化程度的不断
加大，冠心病的发病率及病死率呈逐年升高的趋
势［1］。不管是介入、溶栓还是冠脉搭桥，再通后都
将面临心肌缺血再灌损伤这一难题。藏方五味余甘
子散首载于《帝玛医著选集》中，由余甘子、藏锦鸡
儿、尼泊尔黄堇、大黄、干姜等组成，用于治疗心绞
痛、高血压、高脂血症等血热血淤证，疗效显著，但尚
未进行过相关实验研究。现通过五味余甘子散对实
验大鼠心肌缺血再灌损伤的影响来探讨其可能的保
护机制。
1 实验部分
1． 1 试药与动物
五味余甘子散(自制，由余甘子、藏锦鸡儿、尼
泊尔黄堇、大黄、干姜等药按一定比例配制);普萘
洛尔(山西晋太药业，每片 10 mg，批号:20110502) ;
氨基甲酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司，批号:
H14021523);超氧化物歧化酶试剂盒(SOD，批号:
2013042015)、谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒(GSH －
Px，批号:20130420018)、丙二醛试剂盒(MDA，批
号:2013042011)(Kit ＲGB＆CHN公司)。清洁级 SD
大鼠(甘肃中医学院科研实验中心，许可证号:
SCXK2011 － 0001) ，♀♂兼用，180 ～ 220 g。
1. 2 方法与结果
1. 2. 1 药物的制备 将五味余甘子散 500 g 饮片
稍加粉碎，混匀置砂锅中，加入 8 倍药量蒸馏水，浸
泡 1 h后，先武火煎煮沸，后文火煎煮 50 min后将药
液倒出，再加药量 4 倍的蒸馏水再煎提 1 次，最后将
两次煎提液充分混匀，用四层纱布过滤，在 40 ～
50 ℃下、30 r·min －1的旋转蒸发仪中进行减压浓缩，
浓缩至 100%浓缩液，即含生药 1 g·mL －1。将 500
mL浓缩液按 60 kg成人与 200 g大鼠的剂量估算关
系进行折算［3］，配成低、中、高 3 个浓度，分别为 93、
187、373 mg·mL －1(分别为人的 7、14、28 倍的浓度)
悬浮液;普萘洛尔配成 1． 3 mg·mL －1混悬液，各 500
mL，置 4 ℃冰箱中保存。
1. 2. 2 大鼠的分组、给药及造模 经 1 周适应性饲
养，将 96 只 SD大鼠随机均分成五味余甘子散(高、
中、低剂量)组、手术组、模型组及阳性组。用五味
余甘子散低、中、高浓度给药的容量分别为 15 mL·
kg －1药液，每天给药 1 次，假手术组及模型组分别给
予相应容积的生理盐水，阳性组给予 15 mL·kg －1药
液的普萘洛尔，每日 ig 1 次，连续 10 d。据相关文
献［3］稍加改进，将大鼠经称重后，以 5 mL·kg －1 20%
的氨基甲酸乙酯溶液行腹腔麻醉，固定，备皮，连接
好 Powerlab数据采集分析系统并记录正常心电图，
于颏下颈部逐层钝性分离气管，在甲状软骨下 0． 8
cm处，剪一倒置“T”型切口，进行气管插管，并连接
动物呼吸机，调整呼吸频率为每分钟 70 次，潮气量
为 15 ～ 20 mL·kg －1，呼吸比为 3∶1，压力 5 ～ 25
cmH2O。沿距胸骨左缘第三肋间 0． 8 cm处，用组织
剪纵向剪开约 2． 5 cm(为第三肋至第六肋之间)切
口，充分暴露胸腔，仔细剥离心包，暴露心脏，于左心
耳与肺动脉圆锥间处，找到左冠状动脉主干，用棉签
轻轻托起左侧心脏，于左心耳下缘左冠脉左前降支
1． 5 ～ 2 mm 处，用带 5 /0 号丝线的无创眼科缝合针
进针，深度为 1 ～ 1． 5 mm，宽度为 2 ～ 3 mm，从肺动
脉圆锥旁出针。将浸过肝素的聚乙烯管于结扎处血
管平行、贴壁放置，后结扎并关闭胸腔，观察心电图
的变化及心尖部颜色的改变。以心电图 QＲS 波增
宽及 J点抬高或降低超过 1 /3 稳定 10 min 以上，及
心尖部呈暗紫色为结扎成功标志。30 min 后，将结
扎线从聚乙烯管腔中剪断，缓慢拔出线头，再灌 40
min，以心电图恢复及心尖部明显颜色改善为再灌注
成功标志，否则给予剔除。假手术组只穿线而不结
扎，30 min后拨出线。在造模过程中假手术组 4 只、
模型组 2只、阳性组 7 只，五味余甘子散组各 5 只大
鼠造模失败。
1． 2. 3 标本的采集及指标的测定 造模结束，即刻
于腹主动脉采血，血液标本置碎冰上静置 10 min，于
2． 5 × 103 r·min －1离心 20 min，取上层血清，用自动
生化分析仪测定 CK、LDH 的含量。采血结束，摘取
心脏，用 4 ℃生理盐水冲洗血渍，用滤纸吸干，迅速
用液氮固定，然后置 － 80 ℃ 冰箱中保存。SOD、
GSH － Px的活性及 MDA的含量测定严格按试剂盒
说明操作。电镜组织取材在各实验组中随机取2 ～ 3
个心脏，用预冷的 4 ℃生理盐水洗去血渍，将心尖与
结扎间的心组织置碎冰上，用锐利手术刀片快速切
取 3 ～ 4 块横向面及纵向面、大小为 2 mm × 2 mm ×
2 mm的心肌组织，立刻用 3%戊二醛溶液固定，经
脱水、渗透与包埋、聚合、修整、切片、染色后，在透射
电镜下观察并拍照。
1． 2. 4 结果 五味余甘子散对大鼠心肌缺血再灌
注血清中 CK、LDH 及心肌中 SOD、GSH － Px、MDA
的含量影响见表 1。模型组与假手术组比较，CK、
LDH、MDA升高，SOD、GSH － Px降低(P ＜ 0． 05);五
味余甘子散各组与模型组比较，CK、LDH、MDA 降
低，SOD、GSH － Px 升高(P ＜ 0． 05) ，提示五味余甘
子散干预治疗心肌缺血再灌损伤有效;治疗作用与
阳性药物作用相当且治疗效果与剂量不相关。各组
超微结构的变化见图 1。图 1 显示:伪手术组的肌
膜下见肌纤维排列疏松，部分肌丝溶解，线粒体大小
991第 2 期 谭国生，等。五味余甘子散对大鼠心肌缺血再灌损伤的保护作用
形态异常;模型组肌原纤维内大量收缩带，肌丝排列
稀疏，肌质网扩张，润盘解离，局部肌纤维内线粒体
肿胀嵴疏松，部分嵴消失;阳性对照组的基本趋于正
常肌纤维结构;低剂量组的大部分肌纤维结构正常，
少部分肌纤维见心肌收缩带，带内粗细肌丝解离，肌
丝排列疏松;中剂量组的基本趋于正常，或收缩带完
全缓解的心肌纤维结构;高剂量组的基本正常肌
纤维。
1. 2. 5 数据统计处理 数据采用 SPSS17． 0 软件进
行处理，数据以 珋x ± s 表示，组间两两比较用方差分
析的 SNK － q检验，检验水准 α = 0． 05。
表 1 五味余甘子散对心肌缺血再灌损伤大鼠模型血清中 CK、LDH、SOD、GSH － Px、MDA含量的影响(珔x ± s)
Table 1 Effects of Wuwei Yuganzi san on the serum level of CK，LDH，SOD，GSH － Px and MDA in MIＲI model rats (珔x ± s)
组别 n CK /IU·L －1 LDH /IU·L －1 SOD /U·mg －1 GSH － PX /U·mg －1 MDA /nmol·mg －1
假手术组 12 3． 679 × 103 ± 1． 086 × 103 980． 70 ± 673． 80 187． 650 ± 43． 210 67． 820 ± 3． 560 7． 540 ± 0． 610
模型组 14 9． 654 × 103 ± 2． 140 × 103△ 2． 787 × 103 ± 887． 90△ 128． 220 ± 26． 130△ 39． 290 ± 3． 770△ 14． 590 ± 2． 310△
阳性对照组 9 3． 898 × 103 ± 1． 068 × 103▲ 1． 026 × 103 ± 314． 20▲ 128． 220 ± 26． 130△ 39． 290 ± 3． 770△ 14． 590 ± 2． 310△
五味余甘子散 11 2． 689 × 103 ± 781． 20▲ 552． 43 ± 106． 20▲ 156． 548 ± 12． 044▲ 50． 152 ± 2． 293▲ 11． 907 ± 1． 348▲
11 2． 793 × 103 ± 864． 67▲ 980． 35 ± 210． 76▲ 155． 281 ± 10． 684▲ 51． 590 ± 5． 888▲ 12． 145 ± 1． 557▲
11 2． 823 × 103 ± 892． 07▲ 735． 07 ± 208． 73▲ 150． 175 ± 21． 746▲ 54． 349 ± 2． 343▲ 12． 689 ± 2． 202▲
与假手术组比较:△P ＜ 0． 05;与模型组比较:▲P ＜ 0． 05
A B C D E F
图 1 假手术组(A)、模型组(B)、阳性对照组(C)、五味余甘子散低(D)、中(E)、高(F)剂量组大鼠心肌组织的超微结构变化
Figure 1 Ultrastructural variance of sham group(A)，model group(B)，positive control group(C)，Wuwei Yuganzi San high(D)，middle(E)
and low(F)dosage groups in the myocardial tissue under electron microscope
2 讨论
心肌缺血再灌注损伤的机制尚未完全阐明，与
自由基作用、炎性反应、钙超载及细胞凋亡等参与再
灌损伤过程有关，其中，自由基在心肌缺血再灌损伤
中起到关键作用［4］。CK、LDH为心肌胞浆中重要酶
之一，其血清含量与细胞膜损伤程度成一定的比
例［5］。MDA作为细胞内重要的脂质过氧化代谢中
间产物之一，被广泛用来衡量缺血再灌注过程中心
肌细胞氧化损伤的程度高低［6］。心肌细胞超微结构
的改变是反映细胞损伤最为直观的指标，对观察心
肌缺血再灌注损伤有着重要的意义。传统藏药五味
余甘子散具有清热凉血、化淤通脉的功效［7 － 8］。实
验表明:五味余甘子散对心肌缺血再灌损伤具有保
护作用，可能的保护机理是通过清除或减少氧自由
基等来实现保护再灌注后的心肌细胞。
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