全 文 ：中国药品标准 2012 年第 13 卷第 6 期 430 Drug Standards of China 2012，Vol. 13 No. 6
表 5 龙脑回收率试验结果
称样量
/ g
样品中含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
15. 460 0 11. 60 7． 45 19. 1 100. 74
15. 076 9 11. 31 8． 55 19. 7 98. 16
15. 094 7 11. 32 7． 65 19. 2 102. 99 101. 1 3. 4
15. 089 4 11. 32 8． 35 20. 2 106. 38
15. 003 3 11. 25 8． 41 19. 8 101. 64
13. 855 0 10. 39 7． 45 17. 6 96. 76
取 3 批样品，每批 2 份，按“2. 2. 2”项下的方法
制备成供试品溶液，依法测定，记录峰面积，按外标
两点法计算含量，结果见表 6。
表 6 样品含量测定结果
批号
樟脑
/mg·g － 1
龙脑
/mg·g － 1
异龙脑
/mg·g － 1
0210020 3. 6 1. 02 0. 63
0210010 3. 5 0. 86 0. 60
0210024 4. 0 0. 80 0. 57
3 讨论
3. 1 提取方法的选择
狗皮膏为黑膏药，若直接用溶剂提取，则基质干
扰严重，而且进一步的分离纯化也存在困难，本实验
采用提取挥发油检测樟脑冰片的含量，可以有效避
免基质干扰，简便快捷。
3. 1. 1 溶剂的选择 分别采用环己烷和乙酸乙酯
作为挥发油的吸收溶剂，结果样品色谱图基本一致，
因此采用低毒环保的乙酸乙酯为吸收溶剂。
3. 1. 2 样品提取量的选择 分别称取 15，30，45 g
的样品进行挥发油提取，定容至 25 mL检测，结果样
品气相色谱图信息量基本一致，考虑到样品称取的
难度及定量定性分析的需要，采用称取 15 g 的样品
进行检测。
3. 1. 3 提取时间的选择 分别称取 15 g 样品进行
挥发油提取，时间分别为 2，3，4，5 h，结果 3 h 便能
提取完全。
3. 2 耐用性考察
采用两根不同的色谱柱测定同一批样品，结果
见表 7 ，结果表明方法耐用性良好。
表 7 耐用性试验结果
色谱柱型号
FFAP
(30 m × 0. 25 mm
×0. 25 μm)
DB-WAX
(30 m × 0. 25 mm
×0. 25 μm)
樟脑含量 /mg·g － 1 3. 6 3. 6
异龙脑含量 /mg·g － 1 0. 63 0. 64
龙脑含量 /mg·g － 1 1. 02 0. 98
3. 3 生产工艺
由于该制剂工艺特殊，处方未规定得膏率，且樟
脑、冰片在 70 ℃左右的膏药中加入，不同批次样品
间存在较大的不均一性，因此该制剂的含量限度制
订困难，建议统一生产工艺，规定处方得膏率。
参考文献
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荷脑、异龙脑、龙脑含量［J］． 色谱，1998，16(5) :411-413．
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物中冰片的含量［J］． 华西药学杂志，1989，4(1) :55-56．
基金项目:吉林省创新基金项目(合同编号:SC0702118)
作者简介:郝羚竹，主管药师;研究方向:药物分析与质量管理。Tel:15948053611;E-mail:lingzhuhao@ 163． com
HPLC法测定铁冬青总皂苷中间苯三酚的含量
郝羚竹1，潘书洋1，李超生2(1. 吉林省食品药品检验所，长春 130033;2. 吉林省中医药科学院，长春 130021)
摘要 目的:建立中药材救必应中铁冬青总皂苷中间苯三酚含量的测定方法。方法: 采用 HPLC法测定铁冬青总皂苷中间苯
三酚的含量，色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-C18 ( 4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-水( 70∶ 30) ;流量 0. 8 mL·min
－1 ; 检
测波长 211 nm。结果:间苯三酚在 0. 078 8 ～ 0. 394 0 μg范围内呈良好的线性关系，r = 0. 999 8，平均回收率为 99. 59%，RSD
为 2. 03%。结论:该方法简便、快速、结果准确，可作为救必应的质量控制方法。
关键词:铁冬青总皂苷; 间苯三酚; 高效液相色谱法; 含量测定
Drug Standards of China 2012，Vol. 13 No. 6 中国药品标准 2012 年第 13 卷第 6 期 431
中图分类号:R921. 2 文献标识码:A 文章编号:1009 － 3656(2012)－ 6 － 430 － 3
Determination of M-trihydroxybenzene in Total Saponins of Ilex rotunda by HPLC
Hao Lingzhu1，Pan Shuyang1，Li Chaosheng2* (1. JiLin Institute for Food and Drug Control，Changchun 130033;2. Traditional Chinese
Medicine Academy of Sciences of Jilin province，Changchun 130021)
Abstract Objective:To establish a method for determination of M-trihydroxybenzene in Total Saponins of Ilex rotunda. Methods:
The content of M-trihydroxybenzene was determined by HPLC with a Agilent ZORBAX SB-C18 column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)and
mobile phase composed of methanol-water (70∶ 30)at flow rate of 0. 8 mL·min －1. The UV-detection wavelength was set at 211 nm.
Results:The calibration curve was linear in the range of 0. 078 8-0. 394 0 μg (r = 0. 999 8)． The average recovery rate was 99. 59%，
RSD was 2. 03% . Conclusion:The established method is simple，accurate and reproducible，and can be used for quality control of Ili-
cis Rotundae Cortex.
Key words:total saponins of Ilex rotunda;M-trihydroxybenzene;HPLC;content determination
救必应系冬青科植物铁冬青 Ilex rotunda
Thunb. 的干燥树皮;具有清热解毒，利湿止痛的功
效;用于暑湿发热，咽喉肿痛，湿热泻痢，脘腹胀痛，
风湿痹痛，湿疹，疮，跌打损伤;《中国药典》2010 年
版收载了该品种［1］。救必应的活性成分主要为皂
苷类、多糖类和黄酮类。铁冬青总皂苷主要由长梗
冬青苷、紫丁香苷、间苯三酚、铁冬青酸等组成，具有
活血化瘀、行气止痛、扩张冠脉血管、改善心肌缺血
等功效，是铁冬青治疗心脑血管病的有效部位。据
文献报道，通过对铁冬青总皂苷的组成成分的研究，
分离出间苯三酚等成分，对其结构进行了鉴定，确定
了其化学结构［2］。间苯三酚具有明显的止痛作用，
可治疗急性痉挛性疼痛［3］、胆绞痛［4］、肾绞痛［5］，其
止痛作用可能是铁冬青总皂苷能够治疗冠心病心绞
痛的基础。因此，有必要对铁冬青总皂苷中的重要
成分间苯三酚的含量进行控制。本课题研究涉及了
铁冬青总皂苷质量标准，对长梗冬青苷、紫丁香苷、
间苯三酚等几种成分分别进行了测定。长梗冬青
苷、紫丁香苷的含量测定方法文献报道较多，2010
年版《中国药典》救必应〔含量测定〕项测定了长梗
冬青苷和紫丁香苷的含量。而有关间苯三酚的高效
液相色谱法虽有报道［6］，但有关救必应药材及其总
皂苷中间苯三酚的含量测定未见报道。本文采用高
效液相色谱法测定铁冬青总皂苷中间苯三酚的含
量，并对其方法学进行考察。该方法分离效果好，简
便、快速、取得满意效果，可作为救必应质量控制指
标之一。
1 仪器与试药
岛津 LC-10A 高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外
检测器;CX-250 超声波清洁器(北京医疗设备二
厂) ;FA604A型电子天平(上海精天电子仪器有限
公司)。间苯三酚对照品(中国药品生物制品检定
所，批号 1026-200901) ;铁冬青总皂苷(吉林省中医
药科学院长白山资源所提供，批号 100415，100416，
100417) ;甲醇为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为 Agilent ZORBAX SB-C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-水(70:30) ;流量
0. 8 mL·min －1;检测波长 211 nm。理论板数以间
苯三酚峰计算不低于 3000。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取间苯三酚对照品
1. 97 mg，置于 100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得。
2. 2. 2 供试品溶液 精密称取铁冬青总皂苷 25
mg，置于 25 mL 量瓶中，加甲醇适量，超声处理 30
min，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0. 45
μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2. 3 线性关系考察
精密吸取间苯三酚对照品溶液 4，8，10，16，20
μL分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结
果见表 1。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵
坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为 Y =
14 765 769. 76X － 126 217. 50(r = 0. 999 8) ，表明间
苯三酚进样量在 0. 078 8 ～ 0. 394 0μg范围内与峰面
积呈良好的线性关系。
2. 4 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，连续进样 6 次，每次
中国药品标准 2012 年第 13 卷第 6 期 432 Drug Standards of China 2012，Vol. 13 No. 6
表 1 间苯三酚进样量和峰面积对应关系
进样量 /μL 4 8 10 16 20
进样量 /μg 0． 078 8 0． 157 6 0． 197 0 0． 315 2 0． 394 0
峰面积 1 051 305 2 224 123 2 723 698 4 549 621 5 691 534
10 μL，记 录 峰 面 积，分 别 为 2 623 213. 00，
2 693 442. 25，2 686 758. 25，2 625 852. 75，
2 678 725. 25，2 670 038. 25，其 RSD 为 1. 16%，结
果表明所用仪器具有良好的精密性。
2. 5 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 10 μL，分别于 0，3，
6，10，20，24 h 进样测定，记录峰面积，分别为
2 533 214. 5， 2 504 502. 0， 2 599 682. 25，
2 533 440. 5，2 594 197. 0，2 491 337. 75，峰面积的
RSD为 1. 77%，表明供试品溶液在 24 h 内基本
稳定。
2. 6 重复性实验
精密称取同一批铁冬青总皂苷样品(批号
100415)，按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，依法进
行测定，每次进样 10 μL。重复独立测定 5 份，测得间
苯三酚的含量分别为 2. 733 8%、2. 651 0%、2. 592 8%、
2. 643 7%、2. 681 2%，平均值为2. 66%、RSD为1. 95%。
结果表明该方法具有良好的重现性。
2. 7 加样回收率试验
取同一批铁冬青总皂苷样品(批号 100415) ，共
取 5 份，每份约 12. 5 mg，精密称定，分别精密加入
间苯三酚对照品 0. 35 mg，按“2. 2. 2”项下方法制备
供试品溶液，依法进行测定，进样 10 μL，计算回收
率，测定结果见表 2。
表 2 加样回收率试验结果
样品含量
/%
加入量
/%
测得量
/%
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
mg
0. 043 51 0. 035 46 0. 078 75 99. 38
0. 030 48 0. 035 46 0. 065 64 99. 15
0. 047 94 0. 035 46 0. 084 40 102. 82 99. 59 2. 03
0. 039 08 0. 035 46 0. 073 55 97. 21
0. 039 08 0. 035 46 0. 074 33 99. 41
2. 8 样品测定
取 3 批样品，依法测定。结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果
批号 间苯三酚 /% 平均含量 /%
100415 2. 771 3
100416 2. 964 7 2. 79
100417 2. 630 4
3 讨论
3. 1 测定波长的选择
取间苯三酚对照品溶液，在 200 ～ 400 nm 波长
处进行扫描，结果在 211 nm 波长处有最大吸收，所
以本实验选择检测波长为 211 nm。
3. 2 流动相的选择
在预实验中，分别比较了甲醇-水、乙腈-水等不
同比例的流动相，结果表明，使用甲醇-水(70∶ 30)流
动相，间苯三酚色谱峰与其它成分分离最好，保留时
间适中，故选择该流动相进行色谱测定。
3. 3 色谱柱的选择
在实验中，分别比较了 TECHSPHERE ODS
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)、Diamonsil C18(4. 6
mm × 250 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX SB-C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)三种液相色谱柱，以
Agilent ZORBAX SB-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm)色谱柱的柱效最高，色谱分离度较好，所以
实验中选择该色谱柱。
参考文献
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