全 文 ：收稿日期:2012-05-31 接受日期:2012-11-14
基金项目:云南省后备人才培养项目(2009CI071)
* 通讯作者 Tel:86-871-5223111;E-mail:zhaopeiji@ mail． kib． ac． cn;
gefeng79@ yahoo． com． cn
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2013，25:190-192
文章编号:1001-6880(2013)2-0190-03
虎皮楠内生真菌 Aspergillus sp． DCS31 化学成分研究
孟欣欣1，2，葛 锋1* ，曾 英2，赵沛基2*
1昆明理工大学生命科学与技术学院，昆明 650500;2 中国科学院昆明植物研究所
植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 650204
摘 要:从长序虎皮楠韧皮部分离到内生真菌 Aspergillus sp． DCS31，经 ITS 序列分析将该株菌鉴定为曲霉属真
菌。我们从该菌的固体发酵物中分离得到了 5 个化合物，经质谱和核磁共振波谱解析，分别鉴定为 asperpyrone
D(1)、asperpyrone A(2)、flavasperone(3)、1，2-benzenedicarboxylic acid bis(2α-methyl heptyl)ester(4)、2，5-di-
hydroxyphenylacetic acid methyl ester(5)。化合物 1、2、3、4 为首次从虎皮楠内生真菌中分离得到。
关键词:长序虎皮楠;内生真菌;Aspergillus sp． DCS31;化学成分
中图分类号:Q936 文献标识码:A
Chemical Constituents from the Endophytic Fungus Aspergillus sp．
DCS31 of Daphniphyllum longeracemosum
MENG Xin-xin1，2，GE Feng 1* ，ZENG Ying 2，ZHAO Pei-ji 2*
1Faculty of Life Science and Technology，Kunming University of Science and Technology，Kunming 650500，China;
2State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China，
Kunming Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650204，China
Abstract:Endophytic fungus Aspergillus sp． DCS31 was isolated from Daphniphyllum longeracemosum and identified to
be Aspergillus by ITS sequence． Five compounds were isolated from the solid-state fermentation product of endophytic
fungus Aspergillus sp． DCS31． Their structures were identified as asperpyrone D (1) ，asperpyrone A (2) ，flavasperone
(3) ，1 2-benzene dicarboxylic acid bis(2α-methyl heptyl)ester (4)and 2，5-dihydroxyphenylacetic acid methyl ester
(5)． Compounds 1-4 were isolated from the endophytic fungus of Daphniphyllum longeracemosum for the first time．
Key words:Daphniphyllum longeracemosum;endophytic fungus;Aspergillus sp． DCS31;chemical constituents
长序虎皮楠(Daphniphyllum longeracemosum)为
虎皮楠科(Daphniphyllaceae)虎皮楠属(Daphniphyl-
lum)植物，在我国主要分布于云南东南部和广西，
是一种生于海拔 1000 ～ 1800 m 密林中的常绿乔
木［1，2］。虎皮楠科植物在传统中药中具有一定的药
用价值，具有愈合、消炎等作用［3］。其代谢产物中
含有大量的虎皮楠生物碱，该类生物碱多变的结构
和复杂的多环骨架，成为化学和生物合成的热点之
一。
植物内生真菌是指在某一时期生活在植物体
内，但对寄主植物组织并不引起明显病害症状的真
菌［4］。内生真菌长期与药用植物共同相互共生，有
可能产生与宿主相同或相似生理活性的化学成
分［5］。为了进一步寻找新型的天然产物及活性物
质，我们对一株分离自长序虎皮楠韧皮部的内生真
菌的化学成分进行研究，从内生真菌 Aspergillus sp．
DCS31 的固体发酵培养基中分离得到五个化合物，
分别为 asperpyrone D(1)、asperpyrone A(2)、fla-
vasperone(3)、1，2-benzene dicarboxylic acid bis (2α-
methyl heptyl)ester(4)、2，5-dihydroxyphenylacetic
acid methyl ester(5)。化合物 1 ～ 4 为首次从虎皮
楠内生真菌中分离得到。
1 实验部分
1． 1 仪器与材料
Bruker AM-400 型核磁共振仪;DRX-500 型核磁
共振仪;Avance III 600 型核磁共振仪;Finnigan
LCQ-Advantage型质谱仪;薄层层析用硅胶板和柱层
析硅胶 G，200 ～ 300 目(青岛海洋化工厂) ，柱层析
硅胶 H(Merck 公司) ;Sephadex LH-20 葡聚糖凝胶
(Amersham Pharmacia 公司)。
Aspergillus sp． DCS31 分离来自长序虎皮楠
(Daphniphyllum longeracemosum)的树皮韧皮部。长
序虎皮楠采自 2009 年移栽于昆明植物园的植物。
1． 2 内生菌的鉴定
Aspergillus sp． DCS31 的总 DNA 根据文献采用
肌氨酸钠法提取［6］。实验中所用的 ITS 4 与 ITS 5
引物是真菌系统学研究中设计的通用引物 ITS 4(5
＞ TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC ＜3)和 ITS 5(5
＞ GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G ＜ 3)。
PCR程序为 95 ℃预变性 15 min(加酶) ;95 ℃变性
40 s，55 ℃退火 40 s，72 ℃延伸 90 s，30 个循环;72
℃延伸 10 min，PCR后回收到大约700 bp的核酸片段，
测序后通过与 GenBank数据库比对来鉴定菌株。
1． 3 培养基及培养条件
PDA培养基:马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼脂
20 g，定容至 1 L，pH自然，121 ℃灭菌 20 min。
培养条件:Aspergillus sp． DCS31 经 PDA 固体培
养基发酵 10 L，28 ℃培养 14 d。
1． 4 发酵产物的分离纯化
将长满菌丝的固体培养基划成小块放于锥形瓶
中，用乙酸乙酯:甲醇:冰醋酸 =(80∶ 15∶ 5，V /V /V)
混合溶剂提取 3 次，所得提取液经 45 ℃减压浓缩得
到浸膏，将浸膏悬浮于蒸馏水后加入等体积的乙酸
乙酯萃取至无色，最后得到提取物 37 g。粗提物经
正相柱层析(200 ～ 300 目) ，分别用石油醚:丙酮
(10∶ 1、9∶ 1、8∶ 2、7∶ 3) ，氯仿:甲醇(20∶ 1、10∶ 1、9∶ 1、
8∶ 2、7 ∶ 3)进行梯度洗脱，得到 7 个组分。组分 2
(215． 5 mg)经过反复的正相柱层析得到化合物 3
(6． 0 mg) ，组分 4(4． 0 g)经过反复的正相柱层析和
Sephadex LH-20 柱分离得到化合物 1(26． 5 mg)、2
(5． 2 mg)、5(8． 2 mg) ，组分 5(2． 0 g)经过反复的正
相柱层析和 Sephadex LH-20 柱分离得到化合物 4
(31 mg)。
图 1 化合物 1 ～ 5 的结构式
Fig. 1 Structures of compounds 1-5
2 结果与讨论
2． 1 内生真菌的鉴定
Aspergillus sp． DCS31 的 5． 8S rDNA 序列(Gen-
Bank:JX025097)通过与 GenBank 数据库序列比对，As-
pergillus sp． DCS31 与曲霉属(Aspergillus)的同源性达
99%，因此 Aspergillus sp． DCS31鉴定为曲霉属真菌。
2． 2 结构鉴定
化合物 1 C31H24O10，黄色无定形粉末;ESI-MS
m /z:557 ［M + H］+;1H NMR (C5D5N，600 MHz)
δ:1. 93 (3H，s，CH3-2) ，2. 13 (3H，s，CH3-2) ，3. 58
(3H，s，OCH3-8) ，3. 78 (3H，s，OCH3-6) ，3. 91
(3H，s，OCH3-10) ，6. 05 (1H，s，H-3) ，6. 12 (1H，s，
H-3) ，6. 64 (1H，d，J = 2. 3 Hz，H-7) ，6. 90 (1H，
d，J = 2. 4 Hz，H-9) ，7. 26 (1H，s，H-10) ，7. 61
(1H，s，H-9) ;13C NMR (C5D5N，150 MHz)δ:185. 0
(s，C-4) ，184. 8 (s，C-4) ，168. 4 (s，C-2 /2) ，163. 8
(s，C-5) ，162. 8 (s，C-5) ，162. 3 (s，C-8) ，161. 9
(s，C-10) ，160. 6 (s，C-6) ，159. 8 (s，C-8) ，153. 5
(s，C-10a) ，151. 8 (s，C-10a) ，141. 7 (s，C-9a) ，
141. 6 (s，C-9a) ，118. 4 (s，C-7 /6) ，111. 3 (s，C-
5a /4a) ，109. 2 (d，C-5a) ，107. 5 (s，C-3) ，107. 3
(d，C-3) ，106. 5 (s，C-9) ，104. 5 (d，C-4a) ，100. 9
(s，C-10) ，97. 5 (d，C-7 /9) ，62. 3(q，OCH3-6) ，
56. 1 (q，OCH3-10) ，55. 1 (q，OCH3-8) ，20. 2 (q，
CH3-2) ，22. 1 (q，CH3-2)。以上数据与文献报道一
致［7］，由于化合物 1 与相类似化合物 NMR 的数据
差别很小，通过 2D NMR进一步确定化合物 1 为 as-
perpyrone D。
化合物 2 C31H24O10，黄色无定形粉末;ESI-MS
m / z:557［M + H］+;1H NMR (C5D5N，600 MHz)
δ:1. 96 (3H，s，CH3-2) ，2. 24 (3H，s，CH3-2) ，3. 62
(3H，s，OCH3-6) ，3. 67 (3H，s，OCH3-10) ，3. 92
(3H，s，OCH3-8) ，6. 06 (1H，s，H-3) ，6. 40 (1H，s，
191Vol. 25 孟欣欣等:虎皮楠内生真菌 Aspergillus sp． DCS31 化学成分研究
H-3) ，6. 66 (1H，d，J = 2. 2 Hz，H-7) ，6. 92 (1H，
d，J = 2. 2 Hz，H-9) ，7. 29 (1H，s，H-6) ，7. 60
(1H，s，H-7) ;13C NMR (C5D5N，150 MHz)δ:187. 0
(s，C-4) ，185. 2 (s，C-4) ，170. 4 (s，C-2) ，169. 4
(s，C-2) ，165. 8 (s，C-5) ，164. 4 (s，C-6) ，163. 9
(s，C-8) ，162. 5 (s，C-8) ，160. 1 (s，C-10) ，159. 1
(s，C-5) ，157. 6 (s，C-10b) ，153. 8 (s，C-10a) ，
143. 6 (s，C-6a) ，143. 6 (s，C-9a) ，119. 8 (s，C-9) ，
112. 7 (d，C-3) ，111. 3 (s，C-4a) ，111. 3 (s，C-5a) ，
109. 8 (d，C-3) ，109. 5 (s，10a) ，108. 5 (d，C-7) ，
108. 5 (s，C-10a) ，107. 6 (d，C-6) ，106. 7 (s，C-
4a) ，99. 4 (d，C-9) ，99. 4 (d，C-7) ，63. 4 (q，
OCH3-10) ，58. 1 (q，OCH3-8) ，57. 1 (q，OCH3-6) ，
22. 2 (q，CH3-2) ，22. 0 (q，CH3-2)。以上数据与文
献报道一致［8］。通过 2D NMR进一步确定化合物 2
为 asperpyrone A。
化合物 3 C16H14O5，黄色无定形粉末;ESI-MS
m / z:287 ［M + Na］+;1H NMR (CDCl3，500 MHz)
δ:7. 28 (1H，s，OH-6) ，6. 98 (1H，s H-7) ，6. 60
(1H，d，J = 3. 2 Hz，H-9) ，6. 41 (1H，d，J = 3. 1
Hz，H-11) ，6. 02 (1H，s，H-3) ，4. 02 (3H，s，OCH3-
10) ，3. 94 (3H，s，OCH3-12) ，2. 39 (3H，s，CH3-
2) ;13C NMR (CDCl3，125 MHz)δ:184. 2 (s，C-4) ，
167. 4 (s，C-2) ，162. 6 (s，C-10) ，161. 5 (s，C-6) ，
160. 6 (s，C-12) ，153. 3 (s，C-14) ，141. 1 (s，C-8) ，
108. 4 (s，C-13) ，107. 3 (d，C-7) ，104. 3 (s，C-5) ，
101. 0 (d，C-3) ，97. 8 (d，C-9) ，97. 2 (d，C-11) ，
56. 1 (q，OCH3-12) ，55. 4 (q，OCH3-10) ，20. 7 (q，
CH3-2)。以上数据与文献报道一致
［9］。
化合物 4 C24H38O4，淡黄色油状;ESI-MS m / z:
391 ［M + H］+;1H NMR (CDCl3，400 MHz)δ:
7. 71 (2H，m，H-4，5) ，7. 54 (2H，m，H-3，6) ，4. 26
(4H，m，H-1，1″) ，1. 70 (2H，m，H-2，2″) ，1. 25-
1. 45 (16H，m，H-3，3″，4，4″，5，5″，6，6″) ，0. 93
(6H，d，J = 7. 5 Hz，CH3-2，2″) ，0. 90 (6H，t，J =
6. 6 Hz，H-7，7″) ;13 C NMR (CD3Cl3，100 MHz)δ:
167. 63 (s，C = O) ，132. 39 (s，C-1，2) ，130. 76 (d，
C-3，6) ，128. 70 (d，C-4，5) ，68. 07 (t，C-1，1″) ，
38. 67 (d，C-2，2″) ，30. 29 (t，C-4，4″) ，29. 84 (t，C-
5，5″) ，23. 68 (t，C-6，6″) ，22. 88 (t，C-3，3″) ，
13. 91 (t，C-7，7″) ，10. 86 (q，CH3-2，2″)。以上数
据与文献报道一致［10］。
化合物 5 C9H10 O4，无色油状;ESI-MS m / z:
183［M + H］+;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:
8. 72 (1H，s，OH-5) ，8. 64 (1H，s，OH-2) ，6. 62
(1H，d，8. 6 Hz，H-3) ，6. 59 (1H，d，2. 9 Hz，H-6) ，
6. 55 (1H，dd，8. 6，3. 0 Hz，H-5) ，3. 67 (3H，s，
OCH3-8) ，3. 54 (2H，s，H-7) ;
13C NMR (CD3OD，150
MHz)δ:174. 7 (s，C-8) ，151. 2 (s，C-4) ，149. 7 (s，
C-2) ，123. 3 (s，C-1) ，118. 7 (d，C-6) ，116. 7 (d，C-
3) ，115. 8 (d，C-5) ，52. 5 (q，OCH3-9) ，36. 6 (t，C-
7)。以上数据与文献报道一致［11］。
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