全 文 ：tochemical staining.Result:The positive expression of VEGF in retina and the activities of NOS and AR in retina of the T g roup rats w as
w eaken significantly compared with the DM group , but still above normal level.Conclusion:TMP may prevent the development of diabetic
retinopathy , and the effect may be partly achieved by repression the VEGF and restrained the activities of retinal NOS and AR.
Key words　tetrame thylprazine;diabetic re tinopathy;aldose reductase;nitric oxide synthase;vascular endithelial grow th facto r
扁蒴藤素的抗氧化与抗肿瘤作用
陈长瑞　李文广　吴勇杰　高明堂
(兰州医学院药理教研室　兰州　730000)
　　提　要　目的:研究扁蒴藤素的体外抗氧化与抗肿瘤活性 。方法:用 TBA 比色法测 Fe2+-抗坏血酸(Fe2+-AA)诱导的大鼠心 、
肝 、肾组织匀浆 MDA 生成;用 M TT 法测定对 HL-60细胞的抗肿瘤活性。结果:扁蒴藤素剂量依赖性抑制 Fe2+-AA诱导的大鼠心 、
肝 、肾组织匀浆 MDA 的生成 ,剂量 、时间依赖性地抑制 IL-60细胞生长。结论:扁蒴藤素有明显抗氧化及抗肿瘤作用。
　　关键词　扁蒴藤素;抗氧化;抗肿瘤
　　很多植物如茶叶 、姜黄 、葡萄[ 1 ～ 3]等成分同时有较强的抗氧
化和抗肿瘤作用 , 说明抗氧化作用与抗肿瘤作用有密切关系。我
们研究证实 ,在传统抗肿瘤药物鬼臼毒素中引入稳定氮氧自由基
可增强其抗肿瘤活性而降低毒性 ,其抗肿瘤作用和抗氧化作用有
相同的构效关系[ 4 , 5] , 说明稳定氮氧自由基对抗肿瘤药物的增效
减毒作用与其抗氧化作用有关。卫矛科植物大多具有杀虫、抗肿
瘤活性。从卫矛科植物南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thunb.)中分
离的扁蒴藤素体外对白血病 P388细胞有很强的抑制作用, 南蛇
藤素有很强的抗氧化作用[ 6] 。粉背南蛇藤(Celastrus hypoleucus
(Oliv.)Warb)也属卫矛科, 从中分离出扁蒴藤素 , 本实验对其进
行了初步的抗肿瘤和抗氧化作用研究。
1　材料和方法
1.1　试验药物　扁蒴藤素(pristimerin)由兰州大学化学系提
供 ,纯度大于 98%。
1.2　试剂 　新生小牛血清为三利生物制品厂产品(批号
010516)。 RPMI 1640 为 Gibco 产品。 四氮唑(MTT 3-(4 , 5-
dimethy lthiazol-2-yl)-2 , 5-diphenylterazoiiumbromide)试剂为 Flu-
ka公司产品。 SDS(十二烷基磺酸钠)为 Sigma 公司产品。硫代
巴比妥酸(TBA)为北京化工厂产品 , 其余试剂均为国产分析纯。
自由基生成系统为 FeSO4-抗坏血酸(Fe2+-AA , 50/50μmol/ L)。
1.3　动物　Wistar大鼠 , 雌雄兼用 , 体重 200 ～ 250g , 由兰州医
学院动物中心提供。
1.4　靶细胞　HL-60 细胞株由兰州医学院血液病研究所传代
保种 ,用含 10%小牛血清 、1×10-5/ L 青霉素和 100mg/ L 链霉素
的 RPMI 1640 培养液 , 在37℃ 5% CO 2及饱和湿度的孵箱中悬
浮培养 ,每 2 ～ 3 天传代一次。
1.5　方法
1.5.1　对 HL-60细胞生长的抑制作用　将 1×105ml HL-60 细
胞以 100μl等量接种于 96 孔培养板 ,实验组分别加入不同浓度
的药液 ,对照组加入等量溶媒(5% DMSO),调零孔加等量的完
全培养液。每组设四个平行孔 , 常规培养 , 实验终止前 4h 每孔
加入 MTT 10μl继续培养至实验终止 , 再加入 10% SDS 100μl
终止反应 ,过夜 , 用 DG 3022 酶联免疫检测仪(第四军医大学国
营华东电子管厂)测定各孔在 570nm 波长的 OD 值 ,取 4 孔 OD
值求平均值 ,计算抑制率。
　　抑制率(IR%)=(1-给药组 OD均值对照组 OD均值×100%
1.5.2　MDA测试[ 4] 　大鼠断头处死 ,剖取心 、肝 、肾 ,用冷生理
盐水制成 5%的组织匀浆 , 实验分空白组(加溶媒)、对照组(加
溶媒和 Fe2+-AA 50/ 50μmol/ L)和给药组(加不同浓度的药液和
Fe2+-AA), 每组平行 4 管 , 各 1ml 组织匀浆 、0.05ml 溶媒或
Fe
2+-AA 或药液 ,先加药液 37℃温育 10min , 再加 Fe2+-AA 继
续温育 30min ,按 TBA法测 MDA 。
　　抑制率(IR%)=(对照组 MDA 均值-给药组 MDA均值对照组 MDA 均值-空白组 MDA均值×100%
2　结果
2.1　对 Fe2+-AA诱导的大鼠心 、肝 、肾组织匀浆 MDA 生成的
影响　结果见表 1 , 正常心 、肝 、肾组织匀浆也可产生 MDA , 当
加入 Fe2+-AA 后 MDA 明显升高。 扁蒴藤素浓度依赖性抑制
Fe2+-AA 诱导的大鼠心 、肝 、肾组织匀浆 MDA生成 , IC50分别为
6.23 、7.30 和 1.91mg/ L。其中对肾脏组织匀浆 MDA 生成的抑
制作用最强 , 12.5 ～ 25mg/ L 时抑制率均超过 100%, 说明扁蒴
藤素完全抑制 Fe2+-AA 诱导的 MDA 生成 , 并对组织匀浆自发
性产生的 MDA也有抑制作用 。
　　表 1　扁蒴藤素对大鼠组织匀浆MDA(nmol/ g)生成的影响( x ±s ,
n=4)
剂量
(mg/L) 心
抑制率
(%) 肝
抑制率
(%) 肾
抑制率
(%)
空白 31.6±14.7＊＊ 59.8±3.4＊＊ 98.2±8.5＊＊
对照 317.6±10.2 407.3±16.4 357.6±11.3
1.56 　　　- - 　　　- - 273.0±10.2＊＊ 30.9
3.125 264.6±11.8＊＊ 18.5 349.7±7.9＊＊ 16.6 157.4±7.9＊＊ 76.5
6.25 139.3±6.2＊＊ 62.4 258.4±20.9＊＊ 43.0 119.6±7.9＊＊ 91.4
12.5 108.9±6.2＊＊ 73.0 146.7±6.2＊＊ 75.1 91.9±11.8＊＊ 102.3
25 49.6±20.9＊＊ 93.8 78.4±4.5＊＊ 94.7 59.8±7.9＊＊ 115.0
　　与对照组比较 ＊＊P<0.01
2.2　对 HL-60 细胞生长的抑制作用　MTT 比色法结果(表 2)
表明 ,扁蒴藤素对 HL-60 细胞的生长有显著抑制作用 , 24 ～ 72h
抑制率与浓度呈正相关 , 处理时间在 24h , 36h , 48h 及 72h 时 ,
IC50分别为 1.79 , 0.39 , 0.72 和 0.83mg/ L。
20 中药药理与临床 2002;18(5)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2002.05.013
　　表 2　 扁蒴藤素对 HL-60的影响( x ±s , n=4)
剂量
(mg/ L)
OD570
12h　 24h　 36h　 48h　 72h　
对照 0.55±0.01 0.76±0.06 0.80±0.08 0.94±0.06 0.79±0.05
0.313 0.38±0.07＊＊ 0.59±0.08＊＊ 0.46±0.06＊＊ 0.69±0.03＊＊ 0.59±0.06＊＊
0.625 0.42±0.03＊＊ 0.49±0.01＊＊ 0.34±0.09＊＊ 0.49±0.03＊＊ 0.45±0.02＊＊
1.25 0.41±0.04＊＊ 0.48±0.05＊＊ 0.25±0.04＊＊ 0.25±0.02＊＊ 0.25±0.02＊＊
2.5 0.35±0.01＊＊ 0.41±0.05＊＊ 0.16±0.03＊＊ 0.25±0.02＊＊ 0.22±0.03＊＊
5.0 0.37±0.01＊＊ 0.18±0.01＊＊ 0.10±0.04＊＊ 0.14±0.03＊＊ 0.13±0.03＊＊
10.0 0.29±0.04＊＊ 0.16±0.01＊＊ 0.09±0.03＊＊ 0.06±0.03＊＊ 0.09±0.01＊＊
　　与对照组比较 ＊＊P<0.01
3　讨论
　　本实验结果表明 ,扁蒴藤素在体外对 HL-60 细胞的生长有
明显抑制作用 ,处理时间在 24～ 72h 时抑制率与浓度呈正相关 ,
IC50分别为 1.79 、0.39、0.72 和0.83ml/ L。对 Fe2+-抗坏血酸诱
导的大鼠心 、肝 、肾组织匀浆 MDA 生成均有明显抑制作用 , 说
明扁蒴藤素既有抗氧化作用 , 也有抗肿瘤作用。尽管抗氧化剂
有肯定的防癌作用 ,一般认为抗氧化和抗肿瘤作用是相互矛盾
的 ,但很多药物既有抗氧化作用 , 同时也有抗肿瘤作用[ 1 ～ 3] , 说
明抗氧化作用与抗肿瘤作用关系密切。 为解释这一现象 , 有人
认为肿瘤细胞产生大量自由基和其他活性氧(ROS)能使细胞增
殖减慢 ,这就会干扰抗肿瘤药的细胞毒作用 , 因为抗肿瘤药的
细胞毒作用依赖于细胞快速增殖 ,抗氧化剂清除 ROS 而增加化
疗药的抗肿瘤作用[ 7] 。另有人认为所有抗氧化剂都有双重作
用 ,在一定条件下显示促氧化剂作用 , 当在抗氧化酶活性大为
降低的肿瘤细胞时发挥促氧化剂作用 , 产生活性氧 , 起抗癌作
用 ,而正常细胞却有防御作用[ 1] 。有关药物的抗氧化和抗肿瘤
作用的关系有待深入研究。
参考文献
1　方允中.茶叶抗氧化作用的抗癌机制.中国肿瘤 , 2000;9(1)∶21 ～
22
2　林　溪 ,许建华 ,柯丹如.姜黄素与阿霉素联合用药的体外抗肿瘤作
用.中国药理学通报 , 2000;16(5)∶522～ 525
3　Bagchi D , Ray SD , Patel D , Bagchi M.Protection against drug and
chemical-induced multiorgan toxici ty by a novel IH636 grape seed proantho-
cyanidin ext ract.Drugs Exp Clin Res , 2001;27(1)∶3～ 15
4　李文广 ,张小郁 ,吴勇杰.鬼臼酰肼哌啶氮氧自由基腙及其还原物对
MDA生成的影响.中国药理学通报 , 1997;13(5)∶420～ 422
5　李文广 ,孟富敏 ,张小郁 ,等.鬼臼酰肼哌啶氮氧自由基腙及其还原
物的体内抗肿瘤作用和毒性.兰州医学院学报 , 1996;22(3)∶19～ 21
6　徐美珍.南蛇藤属植物化学成分研究进展.中草药 , 1997;28(8)∶
502～ 505
7　Conklin KA.Dietary antioxidants during cancer chemotherapy:impact
on chemotherapeutic ef fectiveness and development of side ef fects.Nutr
Cancer , 2000;37∶1～ 18
The anti-tumor and antioxidation action of pristimerin
Chen Changrui , Li Wenguang , Wu Yongjie , Gao M ingtang
(Department of Pharmacology , Lanzhou Medical College , 　Lanzhou　730000)
　　Objective:To investigate the antitumor and antio xidation action of pristimerin.Methods:The fo rmation of malondialdehyde(MDA)
induced by Fe2+-AA in homogenate of liver , hear t and kidney of rats was determined by TBA colorime tric method.The antitumor action
w as measured by MTT assay.Results:P ristimerin obviously inhibited MDA generation induced by Fe2+-AA in homogenate of heart , liver
and kidney s of rats with IC50 were 6.23 , 7.30 and 1.91mg/ L , respectively.It also markedly inhibited the proliferation of H L-60 with time
and concentration-dependent manner in vitro.Conclusion:Pristimerin have anti-tumo r and anti-oxidation action
Key words　pristimerin;antioxidation;antitumor
南沙参多糖对亚慢性辐射损伤的防护作用
杨永建　梁　莉1　李　梅　李新芳
(兰州医学院　1兰州医学院第一附属医院药剂科　兰州　730000)
　　提　要　目的:研究南沙参多糖对亚慢性照射引发小鼠辐射损伤的保护作用。方法:小鼠灌服南沙参多糖 ,用60Coγ射线全身
低剂量均匀间断照射 106d ,累计吸收剂量为 3.25Gy ,检测体重变化 、丙二醛(MDA)含量 、超氧化物歧化酶(SOD)活力 、免疫器官脏
器指数 、全血中硒-谷胱甘肽过氧化物氧化酶(Se-GSH-Px)活力 、血清谷丙转氨酶(GPT)及谷草转氨酶(GOT)活力。结果:辐射损伤
后小鼠体重增加幅度下降 、脾和胸腺指数下降 、MDA含量增高 、SOD及 GSH-Px 活力下降 、GPT 和 GOT 活力增加。南沙参多糖可
促进上述指标恢复。结论:南沙参多糖对亚慢性受照损伤小鼠有明显的保护作用 ,其机制可能与抗氧化活性有关。
21中药药理与临床 2002;18(5)